18種中藥提取物對植物病原菌的抑制作用

張應(yīng)烙，尹彩萍

（1.浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004；2.浙江師范大學(xué)工學(xué)院，浙江 金華 321004）

植物殺菌物質(zhì)在高等植物組織中普遍存在[1]，從植物中尋找殺菌抑菌物質(zhì)是開發(fā)無公害新型殺菌劑的一條有效途徑[2]。本研究在查閱中藥學(xué)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上篩選了18種中藥植物[3～4]，這些中藥均具有一定的醫(yī)用抗菌活性[4～6]，但其農(nóng)用抗菌活性僅有個別報道[7]，本研究測試了其提取物對幾種重要植物病原菌的生物活性，旨在為發(fā)現(xiàn)新農(nóng)藥提供線索。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌種：棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum），番茄灰霉病菌（Botrytis cirerea），楊樹潰瘍病菌(Dothiorella gregaria)，油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum），小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)均由西北農(nóng)林科技大學(xué)植物病理研究所提供。

1.2 供試中藥提取物

所有供試中藥（均產(chǎn)自吉安市）共 18種（見表1），均購于江西吉安市河?xùn)|中心衛(wèi)生院，60℃烘干，粉碎，用丙酮振蕩提取3次，時間間隔分別為24h、16h、8h，搖床搖速為140r/min，合并3次濾液后減壓濃縮，用丙酮定容，使最終質(zhì)量濃度為1g/mL，具體提取過程參照馮俊濤等方法[8]。

1.3 中藥提取物抑菌活性測定

中藥提取物對病原菌菌絲生長抑制作用采用生長速率法[9]。帶毒培養(yǎng)基的制備：取 1.2所制備的中藥提取物 0.5mL于滅菌的 10mL試管中，加入9.5mL50℃左右PDA，搖勻，倒入滅菌培養(yǎng)皿中即成，使帶毒培養(yǎng)基中最終提取物質(zhì)量濃度為0.05g/mL。中藥提取物對病原菌孢子萌發(fā)抑制作用采用載玻片法[10]，供試濃度為 0.1g/mL，直接用孢子懸浮液對1.2所制備的提取物稀釋10倍即成。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取物對5種病原真菌菌絲生長抑制作用

提取物對5種病原真菌菌絲生長抑制作用結(jié)果（表2）表明：在供試質(zhì)量濃度為0.05g/mL時，公丁香、八角茴香、川芎、姜黃提取物對所有供試菌菌絲生長抑制作用的抑制率均在60%以上，其中公丁香提取物抑菌活性最好，對所有供試菌的抑制率均為 100%；黃岑、羌活、知母、當(dāng)歸提取物抑菌活性次之，對其中 4種供試菌的抑菌活性均大于60%；青木香、白術(shù)、地榆、萆薢提取物的抑菌活性也較好，對其中2～3種供試菌的抑菌活性均大于60%；防己和郁金提取物僅對其中一種供試菌的抑制率大于60%；其它中藥提取物抑菌活性較差，抑制率均在60%以下。

表1 供試中藥樣品Table 1 Tested Chinese herb

表2 中藥提取物對幾種病原菌菌絲生長的抑制作用Table 2 Inhibition of Chinese herb extracts on hypha of several kinds of pathogen fungi

2.2 提取物對棉花枯萎病菌孢子萌發(fā)抑制作用

提取物對棉花枯萎病菌孢子萌發(fā)抑制作用（表3）表明：在供試質(zhì)量濃度為0.1g/mL時，公丁香、八角茴香和黃岑提取物能強烈抑制棉花枯萎病菌的孢子萌發(fā)抑制作用，抑制率均為 100%；川芎、羌活和知母提取物對棉花枯萎病菌的孢子萌發(fā)抑制作用顯著，抑制率均在90%以上；防己、莪術(shù)和白術(shù)提取物對孢子萌發(fā)抑制活性次之，抑制率均在70%以上；其它中藥提取物抑菌活性較差，抑制率均在60%以下。

表3 中藥提取物對棉花枯萎病菌孢子萌發(fā)的抑制作用Table 3 Inhibition of Chinese herb extracts on spore of F.oxysporum f.sp.vasinfectum

3 小結(jié)與討論

公丁香、八角茴香、川芎、黃岑、羌活、知母、姜黃和當(dāng)歸等8種中藥作為植物源殺菌劑值得進一步研究。本研究結(jié)果表明，公丁香提取物對所有供試菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制作用均為 100%，王桂清等研究表明其對番茄灰霉病菌、水稻稻瘟病菌等5種病原菌具有很好的抑制作用[7]，表明公丁香具有強烈的抑菌活性且抑菌譜廣；八角茴香、黃岑、川芎、羌活、知母對至少4種菌的菌絲生長抑制率大于60%且對棉花枯萎病菌的孢子萌發(fā)抑制作用大于90%；姜黃和當(dāng)歸提取物雖對棉花枯萎病菌的孢子萌發(fā)抑制作用小于50%，但對至少4種菌的菌絲生長抑制率大于60%。因此，公丁香、八角茴香、川芎、黃岑、羌活、知母、姜黃和當(dāng)歸等8種中藥提取物中含有農(nóng)用抗菌成分，且抑菌譜較廣，對其深入研究可能會開發(fā)出無公害植物源殺菌劑。

至于本研究篩選出有效中藥的活體盆栽實驗、有效成分的分離純化及其對病原菌的作用機制有待于進一步的研究、探討。

[1] 謝慧玲, 李樹人, 閻志平等.植物殺菌作用及其應(yīng)用研究[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 1997, 31(4): 367-370.

[2] 張國珍, 樊瑛, 丁萬隆等.麻黃和細(xì)辛揮發(fā)油的抗真菌作用[J].植物保護學(xué)報, 1995,22(4):373-375.

[3] 李永剛, 文景芝.30種中藥抑菌活性的篩選試驗初報[J].植物保護學(xué)報, 2003, 30(1): 109-110.

[4] 宮毓靜, 安汝國, 虞慧等.164種中藥乙醇提取物抗真菌作用研究[J].中草藥, 2002, 33(1): 42-47.

[5] 滕蘭菊,桂芳,黃剛等.公丁香等 17種中草藥對腸道桿菌的體外抑菌實驗[J].中醫(yī)藥臨床雜志, 2004, 16(5):455-456.

[6] 趙俊麗, 駱志成, 武三卯等.八角茴香揮發(fā)油抗念珠菌活性的體外研究[J].中華皮膚科雜志, 2004, 37(8):475-477.

[7] 王桂清, 姬蘭柱, 張弘, 袁靜.公、母丁香乙醇提取物離體抑菌活性比較[J].農(nóng)藥, 2006, 45(12): 852-855.

[8] 馮俊濤, 石勇強, 張興.56種植物抑菌活性篩選試驗[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報, 2001, 29(2): 65-68.

[9] 吳文君.植物化學(xué)保護實驗技術(shù)導(dǎo)論[M].西安: 陜西科學(xué)技術(shù)出版社, 1988.

[10] 方中達(dá).植病研究方法[M].第 3版.北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1998.