GC-MS法對(duì)哈蟆油中甾體類化合物的分析

陳燕超，胡巖，王詩涵，王永生*（.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春307；.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧沈陽003）

GC-MS法對(duì)哈蟆油中甾體類化合物的分析

陳燕超1，胡巖1，王詩涵2，王永生1*
（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧沈陽110032）

目的測定哈蟆油中甾體類化合物的成分及含量。方法將粉碎后的藥材用皂化法預(yù)處理，以乙醚萃取未皂化物——甾體類成分，水浴蒸干，利用氣質(zhì)聯(lián)用色譜法對(duì)甾體類化合物進(jìn)行鑒別及含量測定。結(jié)果哈蟆油中共鑒定出8個(gè)化合物，即膽固醇（32.236%）、膽甾-3-酮（0.925%）、膽甾-3，5二烯-7-酮（2.811%）、菜油甾醇（0.611%）、膽甾-4-烯-3-酮（7.657%）、膽甾-4，6-二烯-3-酮（1.395%）、豆甾醇-22，23-二氫（0.316%）、膽甾-8-烯-7-酮（0.768%）。結(jié)論本法可用于哈蟆油中甾體類化合物的成分與含量的測定研究。

哈蟆油；甾體類；氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

哈蟆油（Oviductus Ranae）是蛙科動(dòng)物中國林蛙（Rana temporaria chensinesis David）雌蛙的干燥輸卵管。始載于明代《本草綱目》，其性平，味甘、咸，入肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)腎益精、養(yǎng)陰潤肺之功效。臨床用于身體虛弱、病后失調(diào)、精神不足、心悸失眠、盜汗不止、癆嗽咳血等癥。哈蟆油為名貴的滋補(bǔ)品，主產(chǎn)于東北三省，尤以吉林省為主，目前，哈蟆油已發(fā)展成為我國東北長白山區(qū)域特產(chǎn)的一味道地藥材，因其具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，作為國家北藥基地的吉林省已將其列為中藥材規(guī)范化生產(chǎn)基地（GAP）首批的10個(gè)品種之一。近年來，哈蟆油中甾體類化合物已被試驗(yàn)證實(shí)為哈蟆油中具有獨(dú)特藥理作用的一類化合物，因此開展對(duì)哈蟆油中甾體類化合物的研究具有重大意義［1－3］。本文利用氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)哈蟆油中甾類化合物進(jìn)行初步研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑安捷倫7890／5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫科技有限公司），JJ600型精密電子天平（美國雙杰兄弟有限公司），高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。

哈蟆油藥材經(jīng)本校中藥鑒定教研室姜大成教授鑒定為蛙科動(dòng)物中國林蛙Rana temporaria chensinensis David.雌蛙的輸卵管，經(jīng)采制干燥而得，符合《中國藥典》2005年版一部哈蟆油項(xiàng)下規(guī)定。

1.2 皂化樣品的制備將哈蟆油藥材粉碎，過60目篩，精密稱取10 g樣品，加氫氧化鉀7 g（適量蒸餾水溶解），90%乙醇40 mL振搖混勻，皂化2 h。皂化液放冷后加蒸餾水50 mL稀釋，用乙醚萃取4次，收集乙醚層于水浴鍋上揮干，用甲醇定容，備用。

1.3 氣相色譜和質(zhì)譜條件色譜條件：采用程序升溫：初始溫度60℃，保留1 min，以18℃／min升至250℃，保留5 min，再以2℃／min升至280℃，保留20 min；DB25石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm），進(jìn)樣口溫度為280℃，氣化室的溫度為270℃，載氣為氦氣，分流比為5∶1。

質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度：250℃，轟擊電子能量70 eV，質(zhì)量掃描范圍35～500amu。

2 結(jié)果與分析

將皂化后的供試品溶液按照上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果從哈蟆油藥材中共分離鑒定出8個(gè)化合物（化合物編號(hào)見圖1），通過NIST譜庫檢索，對(duì)該8種化合物進(jìn)行鑒別并利用面積歸一法對(duì)其進(jìn)行含量測定研究。氣相色譜結(jié)果見圖1，分析結(jié)果見表1。

圖1 哈蟆油藥材皂化后的氣相色譜圖

表1 皂化后的哈蟆油藥材化學(xué)成分及相對(duì)含量分析表

3 討論

本研究通過對(duì)哈蟆油藥材進(jìn)行皂化處理，利用氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)處理后的哈蟆油藥材進(jìn)行分析，從中共分離鑒定出8種甾體類化合物。其中，膽甾-3-酮（峰號(hào)2）、膽甾-3，5二烯-7-酮（峰號(hào)3）、菜油甾醇（峰號(hào)4）、膽甾-4-烯-3-酮（峰號(hào)5）、膽甾-4，6-二烯-3-酮（峰號(hào)6）、豆甾醇-22，23-二氫（峰號(hào)7）、膽甾-8-烯-7-酮（峰號(hào)8）為首次從哈蟆油藥材中分離得到。

本實(shí)驗(yàn)采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析了哈蟆油中甾體類的成分及其含量，操作簡單方便，可信度高，為日后對(duì)哈蟆油藥材中甾體類化合物的分離鑒定提供了新的方法和手段。

［1］范玉林.蛤士蟆油成分研究的進(jìn)展［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，18（3）：105.

［2］譚任祥.甾體化學(xué)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2009：98.

［3］郭澄.超臨界萃取螻蛄脂肪酸成分及其氣相色譜-質(zhì)譜分析［J］.分析化學(xué)研究報(bào)告，2006，9（34）：15-18.

R966

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1007－4813（2010）05－0660－02

2010－07－07）

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（課題編號(hào)：20080915）。

陳彥超（1985－），碩士研究生。研究方向：中藥有效成分與應(yīng)用開發(fā)研究。

*通信作者：王永生，博士，教授。Tel：0431-86172298 E-mail：mikewangwys＠163.com。