原發(fā)性高血壓患者血漿基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1水平變化及依那普利的影響

李響,嚴(yán)研,李南

原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)是威脅我國(guó)人民健康的常見(jiàn)心血管疾病之一,其病因十分復(fù)雜。其中,各種原因?qū)е碌膬?nèi)皮細(xì)胞功能障礙與原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展關(guān)系十分密切,而如何修復(fù)受損的內(nèi)皮細(xì)胞,恢復(fù)其功能則逐漸成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[1-2]?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)又名CXCL12,是趨化因子CXC家族中的一員,由骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生。與其特異性受體CXCR4結(jié)合后,對(duì)骨髓干細(xì)胞有很強(qiáng)的趨化作用,以調(diào)控造血干細(xì)胞(內(nèi)皮祖細(xì)胞)遷移及歸巢,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)[3]?，F(xiàn)已有實(shí)驗(yàn)證明,血漿SDF-1濃度上升可促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員,進(jìn)行血管內(nèi)皮修復(fù),且血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)類(lèi)藥物可通過(guò)SDF-1/CXCR4軸增加血漿SDF-1水平[4]。

1 對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 所有對(duì)象均來(lái)自2008年5月～2009年11月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院搶救中心和體檢中心,男性 33例,女性 29例,平均年齡(54.7±11.4)歲。高血壓組34例,正常對(duì)照組28例。高血壓組均為初發(fā)病例,近4周內(nèi)無(wú)服藥史,規(guī)律應(yīng)用依那普利10 mg,1/d,分別于治療前、治療2周后抽血檢測(cè)血漿SDF-1。高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1999年世界衛(wèi)生組織和國(guó)際高血壓學(xué)會(huì)(WHO/ISH)標(biāo)準(zhǔn),即收縮壓≥140 mmHg,或/和舒張壓≥90 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、體格檢查、心電圖、心臟彩超等確定診斷,排除繼發(fā)性高血壓、冠心病、糖尿病、腦卒中、嚴(yán)重肝腎疾病或甲狀腺疾病病史以及惡性腫瘤者。

高血壓組性別、年齡、體重、體重指數(shù)(BMI)、腰臀比、吸煙史與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異;高血壓組血壓較健康對(duì)照組明顯升高;高血壓組存在更多高血壓家族史,而對(duì)照組飲酒史較多。見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床資料比較(例)

1.2 試劑和儀器 SDF-1 ELISA試劑盒:南京建成生物工程研究所;恒溫培養(yǎng)箱:Heto Holten Denmark;微量離心機(jī):Kendro laboratory Products,Germany;紫外分光光度計(jì)DU 640型:Beckman,U.S.A。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 將備用的血漿4℃下10000 r/min離心10 min,去除血小板。將標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清各100 μ l加入相應(yīng)反應(yīng)孔(96孔板),再分別加入 50 μ l酶標(biāo)溶液,后封閉板孔,(36±2)℃下避光孵育60 min;350 μ l洗滌液洗板5次,每次靜置10～20 s;每孔依次加50 μ l SDF-1結(jié)合物A 、B,封板;(36±2)℃下避光孵育15 min。加入終止液50 μ l,30 min內(nèi)在酶標(biāo)儀上讀取吸光度(A)450值。以標(biāo)準(zhǔn)品OD值/標(biāo)準(zhǔn)品0點(diǎn)OD值%為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),然后根據(jù)血清標(biāo)本A值計(jì)算其濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以(±s)表示,進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent-Samples T test)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示,進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析。顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

高血壓組患者血漿SDF-1水平(4.211±1.132)mmol/L,高于健康對(duì)照組(3.568±0.936)mmol/L(P＜0.05)。依那普利治療2周后患者血漿SDF-1水平為(4.950±1.050)mmol/L,高于治療前(P＜0.05)。

Spearman相關(guān)性分析顯示,治療前后SDF-1水平變化(ΔSDF-1)與收縮壓和舒張壓變化(Δ SBP,Δ DBP)均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

近年研究結(jié)果證明,內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員、歸巢是內(nèi)皮修復(fù)的重要影響因素之一,并發(fā)現(xiàn)趨化因子SDF-1/CXCR4軸是影響內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員的關(guān)鍵,參與內(nèi)皮修復(fù)。Lee等[5]和 Pillarisetti等[6]發(fā)現(xiàn),SDF-1α在缺氧組織中早期就表達(dá)上調(diào),這提示它與血管新生有關(guān)。Kahn等采用Gene Calling技術(shù)探討內(nèi)皮細(xì)胞分化形成管狀結(jié)構(gòu)的過(guò)程中各種相關(guān)基因的表達(dá)情況時(shí),發(fā)現(xiàn)CXCR4表達(dá)上調(diào) 40倍[7]。Yamaguchi等發(fā)現(xiàn),SDF-1α能誘導(dǎo)前體內(nèi)皮細(xì)胞的遷移并延緩其凋亡,且SDF-1α通過(guò)增加局部前體內(nèi)皮細(xì)胞的聚集來(lái)促進(jìn)血管新生。他們應(yīng)用多普勒超聲檢測(cè)小鼠缺血后肢的血液灌流,SDF-1較 PBS組灌流信號(hào)明顯增強(qiáng)[8]。Schober等用SDF-1α單抗干預(yù)小鼠去內(nèi)膜的頸動(dòng)脈,發(fā)現(xiàn)其內(nèi)膜增生區(qū)較之對(duì)照組減少44%,細(xì)胞成分中平滑肌細(xì)胞減少17%[9]。血漿SDF-1水平與血管內(nèi)皮損傷性疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系,檢測(cè)其水平將有助于評(píng)價(jià)受損血管內(nèi)皮修復(fù)能力,有助于預(yù)測(cè)疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。但其與原發(fā)性高血壓的相關(guān)關(guān)系仍未見(jiàn)報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn),高血壓患者血漿SDF-1水平升高,且應(yīng)用ACEI依那普利可以進(jìn)一步擴(kuò)大這一效果。

過(guò)去10年中大量循證醫(yī)學(xué)證據(jù)充分證明了ACEI治療心血管病的價(jià)值。ACEI已被推薦用于高血壓、心力衰竭、冠心病、心肌梗死的治療及高危人群的二級(jí)預(yù)防,并寫(xiě)入國(guó)內(nèi)外指南之中。但是,我們?cè)谂R床實(shí)踐中觀察到這樣一種現(xiàn)象,同樣作用于 RAAS系統(tǒng)的ACEI類(lèi)以及ARB類(lèi)降壓藥物,在同樣患者服用時(shí)其效果并不完全一致,甚至?xí)^察到有些患者服用ACEI時(shí)臨床效果非常理想,而另一些具有同樣臨床情況的高血壓患者服用ARB時(shí)臨床效果較差,這種現(xiàn)象提示我們ACEI類(lèi)藥物除通過(guò)RAAS系統(tǒng),也存在其他藥理影響因素。

研究表明,CD26與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)同屬于二肽基肽酶家族,可水解SDF-1,CD26可以借由SDF-1/CXCR4軸調(diào)控細(xì)胞移行;有研究顯示,應(yīng)用CD26抑制劑可以增加外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量,加強(qiáng)血管內(nèi)皮修復(fù)[10]。而ACEI也具有抑制CD26蛋白水解的功能[11],通過(guò)影響CD26,同樣可以影響 SDF-1/CXCR4軸,增加血漿SDF-1濃度,加強(qiáng)內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員[4]。

本實(shí)驗(yàn)顯示,血漿SDF-1水平及其變化與患者血壓值無(wú)明顯的相關(guān)性,而有文獻(xiàn)報(bào)道稱(chēng)血漿SDF-1水平上升可導(dǎo)致肺血管壓力增高[12]。分析原因主要考慮為:①血壓升高是由多種因素影響的綜合表現(xiàn),SDF-1單一影響不大或無(wú)直接影響,可能與其他因素協(xié)同作用(如血管緊張素等[13]);②血壓波動(dòng)本身是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程,一次或幾次的測(cè)量可能并不能完全反應(yīng)患者的真實(shí)情況[14];③本實(shí)驗(yàn)樣本量相對(duì)較少,可能存在實(shí)驗(yàn)誤差。

本次小樣本量實(shí)驗(yàn)證明,高血壓患者血漿SDF-1水平明顯升高,且ACEI類(lèi)藥物依那普利可增加血漿SDF-1濃度。未來(lái)我們的研究應(yīng)盡可能廣泛地選取更多的高血壓病例,通過(guò)進(jìn)一步臨床、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)反映機(jī)體中實(shí)際情況,并以其為基礎(chǔ),拓展研究趨化因子SDF-1在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中的作用,以及ACEI類(lèi)藥物通過(guò)SDF-1/CXCR4軸治療高血壓的分子機(jī)制,指導(dǎo)臨床更加準(zhǔn)確、合理應(yīng)用ACEI類(lèi)藥物。

[1]張會(huì)敏,何芳.內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙與原發(fā)性高血壓關(guān)系研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2007,13(2):114-116.

[2]Imanishi T,M oriwaki C,Hano T,et al.Endothelial progenitor cell senescence is accelerated in both experimental hy pertensive rats and patients with essential hypertension[J].J Hy pertens,2005,23:1831-1837.

[3]De-La-Luz-Sierra M,Yang F,Narazaki M,et al.Differential processing of stromal-derived factor-1 alpha and stromal-derived factor-1 beta ex plains functional diversity[J].Blood,2004,103:2452-2459.

[4]Wang CH,Verma S,Hsieh IC,et al.Enalapril increases ischemiainduced endothelial progenitor cell mobilization through manipulation of the CD26system[J].J Molecul Cell Cardiol,2006,41:34-43.

[5]Lee SH,Wolf PL,Escudero R,et al.Early expression of angiogenesis factors in acute my ocardial ischemia and infarction[J].N Engl J Med,2000,343(2):626-633.

[6]Pillarisetti K,Gupta SK.Cloning and relative expression analysis of rat stromal cell derived factor-1(SDF-1)1:SDF-1 alpha mRNA is selectively induced in rat model of myocardial infarction[J].Inflammation,2001,25(1):293-300.

[7]Kahn J,Mehraban F,Ingle G,et al.Gene expression profiling in an in vitro model of angiogenesis[J].Am J Pathol,2000,156(6):1887-1900.

[8]Yamaguchi J,Kusano KF,Masuo O,et al.Stromal cell-derived factor-1 effects on ex vivo expanded endothelial progenitor cell recruitment for ischemic neovascularization[J].Circulation,2003,107:1322-1328.

[9]Schober A,Knarren S,Lietz M,et al.Crucial role of stromal cellderived factor-1α in neointima formation after vascular injury in apolipoprotein E-deficient mice[J].Circulation,2003,108:2491-2497.

[10]Sbaa E,DeWever J,M artinive P,et al.Caveolin play s a central role in endothelial progenitor cell mobilization and homing in SDF-1-driven postischemic vasculogenesis[J].Circ Res,2006,98:1219-1227.

[11]Lefebvre J,Murphey LJ,Hartert T V,et al.Dipeptidyl Peptidase IV activity in patients with ACE-inhibitor-associated angioedema[J].Hy pertension,2002,39:460-464.

[12]Young KC,T orres E,Hatzistergos KE,et al.Inhibition of the SDF-1/CXCR4 axis attenuates neonatal hypoxia-induced pulmonary hypertension[J].Circ Res,2009,104(11):1293-1301.

[13]Salguero G,Akin E,Templin C,et al.Renovascular hypertension by two-kidney one-clip enhances endothelial progenitor cell mobilization in a p47phox-dependent manner[J].J Hypertens,2008,26(2):257-268.

[14]Jula A,Puukka P,Karanko H.Multiple clinic and home blood pressure measurements versus ambulato ry blood pressure monito ring[J].Hypertension,1999,34(2):261-266.