小陷胸湯加味方對兔心肌缺血再灌注損傷的干預*

王 穎 霍淑杰 劉玉潔

急性心肌梗死屬于中醫(yī)學“胸痹”、“真心痛”范疇。目前，中醫(yī)藥作為急性冠脈痙攣、心臟介人術后的后續(xù)治療手段正逐漸得到廣泛應用。小陷胸湯是臨床常用方，具有清熱化痰、寬胸散結的功效。本實驗旨在觀察小陷胸湯加味方預處理對心肌缺血再灌注損傷髓過氧化物酶（MPO）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應蛋白（CRP）的干預，探討其在心肌缺血再灌注中的作用?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）試劑與儀器：MPO試劑盒（南京建成生物工程研究所）、TNF-α（解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所）、CRP測定試劑盒（上?？迫A生物工程股份有限公司）。臺式高速離心機（TDL-4，上海安亭科學儀器廠）、721分光光度計（江蘇無錫柯達智能儀器廠）、電子稱、電熱恒溫水浴箱（常州國華電器有限公司）、ECG-6511單導心電圖機（上海匯豐醫(yī)療器械有限公司）。（2）動物：新西蘭大耳白兔，體質(zhì)量2～2.5kg/只，雄性，屏障環(huán)境喂養(yǎng)，自由進食，由華北煤炭醫(yī)學院動物實驗中心提供，許可證編號：scxk（京）2006-0005。（3）藥物：小陷胸湯加味方，組方：瓜蔞 30g，半夏 12g，黃連 6g，丹參 15g，海藻 10g，大黃 5g。采用廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)的中藥配方顆粒（相當于生藥飲片劑量）。

1.2 分組及造模 （1）動物分組：32只兔隨機分為假手術組、模型組、小陷胸湯加味方低劑量組、小陷胸湯加味方高劑量組，每組8只。（2）給藥方法：根據(jù)人兔臨床用藥劑量換算公式[1]換算成兔用藥量，將中藥顆粒用生理鹽水混勻，按小陷胸湯加味方高劑量 6.32g/（kg·d），小陷胸湯加味方低劑量 3.16g/（kg·d），于術前5d灌胃給藥。假手術組及模型組給予等量生理鹽水術前5d灌胃。（3）造模方法：取兔，稱重。用20%氨基甲酸乙酯按5mL/kg腹腔注射麻醉，仰臥，固定，8%硫化鈉進行四肢及胸部脫毛。四肢接標準肢體Ⅱ導聯(lián)心電圖。沿胸骨正中線剪開皮膚，沿胸骨左緣剪斷3～5肋軟骨，小心剪開心包，切勿將胸膜破壞，開胸器打開切口，暴露心臟，用浸生理鹽水的棉棒旋轉心臟，在左心耳下緣0.5cm處尋找冠狀動脈，以5/0號線在左心耳下方2～3cm處用小圓針（3/8，3×10規(guī)格）穿過靜脈下心肌，連同心大靜脈，打雙活結結扎左冠狀動脈前降支，30min后打開結扎線實現(xiàn)再灌注，再灌注120min后結束實驗。假手術組只穿線不結扎，以ST段抬高、缺血區(qū)域心肌顏色變暗為模型成功標志。成功標準：ST段抬高，T波倒置；結扎區(qū)以下心肌顏色變成暗紅色。失敗標準：心電圖無變化，心肌顏色無變化，家兔死亡。（4）取材及測定：灌注結束時于右心房取血5mL，按照說明書方法分離血清，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。免疫組織化學及生化法測定MPO，放射免疫法測定TNF-α，免疫比濁法檢測CRP。實驗結束時，迅速取出心臟，以結扎線為標準，剪取缺血區(qū)左心室前壁心肌1g，按說明書方法制作成10%組織勻漿，各指標均嚴格按照說明書方法檢測。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，采用LSD法。

2 結果

2.1 各組MPO活性比較 見表1?？梢娔Ｐ徒M、小陷胸湯加味方低、高劑量組MPO活性均較假手術組升高（P＜0.01），均比模型組MPO活性降低（P＜0.05或0.01），低、高劑量組之間相近（P ＞ 0.05）。

2.2 各組TNF-α水平比較 見表1。可見模型組、小陷胸湯加味方低、高劑量組TNF-α水平均較假手術組升高（P＜0.01），低、高劑量組均比模型組TNF-α水平降低（P ＜0.05），低、高劑量組相近（P＞0.05）。

2.3 各組CRP水平比較 見表1?？梢娔Ｐ徒M，小陷胸湯加味方低、高劑量組CRP水平均較假手術組升高（P＜0.01），均比模型組CRP水平降低（P＜0.05），低、高劑量組相近（P＞0.05）。

表1 各組MPO活性、TNF-α及CRP水平比較

3 討論

心肌缺血最有效的治療措施是恢復血液供應。缺血后恢復血流供應的過程稱為再灌注。再灌注可使缺血心肌損傷加重[2]，即產(chǎn)生心肌缺血再灌注損傷。心肌缺血再灌注損傷有多種因素參與?；A研究表明MPO、TNF-α及CRP參與了心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生[3～7]。

心肌缺血再灌注損傷，屬于中醫(yī)學“胸痹、心痛”、“真心痛”范疇。早在《內(nèi)經(jīng)》時代，醫(yī)家就已提出胸痹的重證“真心痛”以“陰氣在中”為病機。緩解期多見氣血陰陽虛損，發(fā)作期則以瘀血、痰濁、氣滯、寒凝為主。《傷寒論》中指出“小結胸病，正在心下，按之則痛，脈浮滑者，小陷胸湯主之”；程扶生在《古今名醫(yī)方論》中指出“以半夏之辛散之，黃連之苦瀉之，栝蔞之苦潤滌之，所以除熱散結于胸中也”。方中瓜蔞為君，清熱化痰，通胸膈之痹；黃連為臣，瀉熱降火，半夏化痰降逆，二藥相配，辛開苦降，化痰散結，通暢氣機。佐以丹參涼血化瘀，輔以海藻以散頑結，使大黃既清熱解毒又化瘀散結，使熱毒從大便而出，謂邪有出路也。藥理研究也表明，丹參可通過多種途徑減輕心肌缺血再灌注損傷[8，9]。臨床中也觀察到許多冠心病患者發(fā)病時或冠狀動脈搭橋術、經(jīng)皮冠狀動脈內(nèi)成形術后常常出現(xiàn)胸痛、胸悶、憋氣、發(fā)熱、心悸、煩躁不安、大便不暢，舌質(zhì)暗紅，舌苔黃膩、或黃燥，脈象多滑數(shù)、弦數(shù)等癥，在使用小陷胸湯加味方后冠心病患者癥狀和理化指標得到有效改善，收到滿意療效[10]。

MPO是中性粒細胞嗜天青顆粒產(chǎn)生的一種重要的過氧化物酶，主要存在于嗜中性粒細胞和單核細胞中[10]。MPO也是一種血紅素蛋白，可作為中性粒細胞的特異性標記物[12]，即一種新的心肌標志物，所以用藥物治療來盡量減輕再灌注損傷，部分依賴于減少中性粒細胞的浸潤。在臨床中證實急性心肌梗死患者血漿中TNF-α含量在發(fā)病早期即顯著升高[13]，而再灌注是TNF-α升高的主要原因[14]。大量研究表明，心肌缺血能夠引起急性炎癥反應，在再灌注后進一步加劇，導致不可逆的細胞損傷。CRP是人體非特異性炎癥的最敏感的標志物之一，是一種γ球蛋白，在正常人血清中的含量極微，一般少于10mg/L，但在急性炎癥反應階段其含量可迅速增加1000多倍，血清CRP含量的高低與疾病的炎癥反應程度關系密切[15]。本實驗提示，小陷胸湯加味方可降低兔心肌缺血再灌注MPO的活性及TNF-α、CRP的含量。這可能是通過減輕炎癥反應達到保護缺血再灌注心肌的作用?？梢娦∠菪販游斗綄π募∪毖俟嘧p傷具有保護作用。

MPO、TNF-α及CRP在心肌缺血再灌注過程中發(fā)揮了重要作用，引起越來越多的關注，已經(jīng)逐漸成為治療的新途徑。本實驗發(fā)現(xiàn)，小陷胸湯加味方預處理可以通過減輕炎癥反應而起到保護缺血再灌注心肌的作用，但心肌缺血再灌注的確切發(fā)病機制尚未完全闡明，因此該藥發(fā)揮作用的其他途徑尚需進一步研究。

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