高效液相色譜法測定正柴胡飲顆粒中芍藥苷的含量

李 霞，韓曼雪，董衛(wèi)紅，婁 敏，李榮生

(中國中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)藥廠，北京 100700)

正柴胡飲顆粒是由柴胡、赤芍、生姜等6味中藥組成，具有表散風(fēng)寒，解熱止痛的功效。本法主要對方中赤芍中所含有效成分芍藥苷的含量測定。關(guān)于芍藥苷的含量測定，文獻(xiàn)已有報(bào)道，主要為比色法、薄層層析——紫外分光光度法[1]、薄層掃描法[2]、高效液相色譜法[3]等等。我們針對正柴胡飲顆粒，通過提取溶媒及其濃度、提取方法及超聲處理時(shí)間的選擇，選用了目前常用的高效液相色譜法，測定正柴胡飲顆粒中芍藥苷的含量，方法簡便，靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

島津 LC-10AD高效液相色譜儀，島津 SPD-10AVP紫外檢測器，N-2000數(shù)據(jù)工作站。CSF-1A超聲波清洗發(fā)生器:(工作頻率33kHz，輸出超聲電功率250W)。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號0736-9811)試劑除甲醇為色譜醇外，其余均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相:甲醇-異丙醇-36% 乙酸-水(25∶2∶2∶71);流速 1.0ml/min，檢測波長 230nm;靈敏度:0.1AUFS;柱溫:室溫。進(jìn)樣量:10μl。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%乙醇制成每1ml含芍藥苷0.1mg的溶液，搖勻即得。

2.3 樣品的測定

表1顯示，取本品約0.5g，研細(xì)，精密稱定，置50ml量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理30min，放置至室溫，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻、濾過即得。用0.45μm的微孔濾膜過濾，進(jìn)樣10μl，用外標(biāo)法計(jì)算含量。

表1 樣品測定結(jié)果

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

表2顯示，精密吸取對照品溶液(0.1mg/ml)5、10、15、20、25μl，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，芍藥苷含量為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:Y=－14.4629+1.034×103X，r=0.99997，表明芍藥苷在 0.5μg～2.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)

表3顯示，精密吸取供試品溶液(001110)，重復(fù)進(jìn)樣5次，芍藥苷峰面積積分值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<2%。

表3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

表4顯示，按照2.3含量測定項(xiàng)下進(jìn)行，取同一批樣品(001110)制備5份供試品溶液進(jìn)行測定，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.06%。

表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表5顯示，按照2.3含量測定項(xiàng)下方法，對同一批樣品(001110)進(jìn)行了 0、1、2、4、8、24h 測定，結(jié)果表明，其在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

表5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.8 空白實(shí)驗(yàn)

按照正柴胡飲顆粒制法，制成成藥空白(即除去赤芍后制成的成藥)，然后按照2.3項(xiàng)下進(jìn)行。結(jié)果表明，正柴胡飲顆粒陰性(空白)對照液，在芍藥苷的色譜峰處未見明顯色譜吸收峰，故表明無明顯干擾。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

表6顯示，采用加樣回收法，精密稱取已知含量的正柴胡飲顆粒(批號001110含量3.32mg/g)0.25g，精密加入芍藥苷對照品(濃度0.0168mg/ml)50ml，按照2.3含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，以下式計(jì)算回收率。

表6 回收率測定結(jié)果

結(jié)果表明，本方法回收率準(zhǔn)確。

3 討論

供試品溶液制備試驗(yàn)了不同溶媒(40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、50%乙醇和水)超聲處理的提取方法，結(jié)果用50%乙醇超聲提取含量較高;流動相進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)選擇[甲醇-水(23:77)、甲醇-異丙醇-36%乙酸-水(25∶2∶2∶71)]后者的含量測定效果好;在使用加熱回流、超聲處理及冷浸3種提取方法時(shí)，超聲處理簡便易行且含量略高。

采用上述方法測定正柴胡飲顆粒中芍藥苷的含量，簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]顧麗貞，等.藥物分析雜志，1985，5(1):18.

[2]張慶生，等.中國中藥雜志，1991，16(9):546.

[3]田飛敏，等.繁用生藥的成分定量，廣川書店，1991.