溴氯海因?qū)追N病原真菌的室內(nèi)毒力試驗(yàn)及田間藥害試驗(yàn)

謝剛 ，劉雨華 ，朱宏建 ，高必達(dá) ﹡

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物安全科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長沙 410128；2.湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院招生就業(yè)處，湖南長沙410127）

溴氯海因 （1-溴-3-氯-5.5-二甲基乙內(nèi)酰脲，簡稱BCDMH）是近期發(fā)展起來的高效、廣譜、快速安全的新型氧化型消毒劑，可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中各種疾病的預(yù)防和治療，還可用于游泳池消毒、水果保鮮和工業(yè)用循環(huán)水滅藻及日常生活消毒等[1-3].溴氯海因消毒殺菌，主要是通過它在水中水解產(chǎn)生次溴酸發(fā)揮作用.次溴酸將硫基氧化為過硫鍵，氨基氧化為肼或肟醚，作用于微生物的細(xì)胞壁，使其通透性增加，細(xì)胞中的蛋白質(zhì)與核心物質(zhì)漏出，DNA雙鏈發(fā)生斷裂，從而使細(xì)胞死亡[4-6].溴氯海因具有強(qiáng)烈殺滅真菌、細(xì)菌及病毒的功效[7]，但尚無在植物保護(hù)領(lǐng)域應(yīng)用的報(bào)道.為探討溴氯海因在植物病害防治上應(yīng)用的可能性，筆者進(jìn)行了溴氯海因?qū)追N植物病原真菌的室內(nèi)毒力測定及田間藥害試驗(yàn).

1 材料與方法

1.1 材料

辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici Leonian)、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum capsici）、水稻紋枯病菌 （Rhizoctonia.solani Ktihn）、 水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea).均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；供試水稻、辣椒植株均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)研究基地提供；16%溴氯海因由湖南省海洋生物工程有限公司提供.培養(yǎng)基均采用PDA培養(yǎng)基.

1.2 方 法

供試菌株培養(yǎng).用PDA培養(yǎng)基分別接種辣椒疫霉病菌、辣椒炭疽病菌、水稻紋枯病菌、水稻稻瘟病菌，試驗(yàn)前純培養(yǎng)物在溫箱內(nèi) (28℃)培養(yǎng)5 d，至菌落接近完全覆蓋培養(yǎng)平板，備用.

1.2.1 培養(yǎng)平板抑菌試驗(yàn)

在超凈工作臺上，取16%溴氯海因1 g，放入49 mL無菌水的150 mL三角瓶中，振蕩搖勻，用無菌移液管吸取藥液分別配制成100、200、400、800倍藥液，充分搖勻后倒入PDA培養(yǎng)基（55℃左右）中，使稀釋倍數(shù)分別為2 500、5 000、 10 000、 20 000、 40 000， 搖勻， 制成平板，并設(shè)清水空白對照（CK）.待培養(yǎng)基冷卻后，用7 cm無菌打孔器在純培養(yǎng)的病原菌上打成菌餅，倒置移放到含有藥液的平板中央.每個(gè)病原菌每個(gè)濃度重復(fù)3次.靜置1 h后放入溫箱，28℃下培養(yǎng)5 d.用十字交叉法測量抑制菌圈直徑.

1.2.2 田間藥害試驗(yàn)

取16%的溴氯海因分別配制成250、500、1 000倍水溶液，搖勻后裝于噴霧器具中，均勻噴灑于供試水稻和辣椒葉片，每個(gè)濃度分別處理植株5株，另設(shè)清水對照，3 d后觀察結(jié)果.

2 結(jié)果與分析

室內(nèi)毒力試驗(yàn)表明，16%溴氯海因?qū)?種病原真菌均有一定的抑制作用，當(dāng)稀釋到2 500倍時(shí)，對稻瘟病菌、稻紋枯病菌、辣椒疫霉病菌、辣椒炭疽病菌的抑制率分別達(dá)到88%、100%、93%、78%，其EC50值對稻紋枯病菌為60，抑制效果最佳.

表1 溴氯海因?qū)?種真病原菌的室內(nèi)毒力

田間藥效試驗(yàn)表明,16%溴氯海因稀釋至250倍時(shí)，在水稻葉片上產(chǎn)生明顯的褐色斑點(diǎn)，藥害現(xiàn)象較為明顯，至1 000倍時(shí)，沒有藥害癥狀.辣椒對溴氯海因水溶液不敏感，3個(gè)濃度與清水對照比，無明顯區(qū)別.

3 討論

溴氯海因?qū)?個(gè)病原真菌的室內(nèi)毒力試驗(yàn)，結(jié)果表明，在同一稀釋倍數(shù)2 500倍下，對紋枯病菌的抑制效果最好，達(dá)100%，對辣椒炭疽病菌抑制效果最差，只有78%;而從對稻紋枯病的抑制效果來看，其EC50值為60，和井岡霉素相比，尚有一定的差距[8].美國麥科伊[9]認(rèn)為,在氧化型殺菌劑中最具實(shí)用價(jià)值的是溴氯海因，因此在植物病害防治方面的應(yīng)用，有待于進(jìn)一步研究.筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),此藥劑粉劑劑型很難溶于水，可能限制了作用效果.有試驗(yàn)表明,添加少量的助溶劑可明顯改善溴氯海因的殺菌能力，含0.1%助溶劑的溴氯海因（3 mg/L）對大腸桿菌的殺滅率為99.91%，無助溶劑時(shí)的殺滅率為96.48%,同時(shí)加入表面活性劑，能使有效溴氯更好地與菌體接觸、黏附，提高其藥效和速度[10].因此改變藥劑劑型可能會提高防治效果.

[1]Yasuhara Yoshiharu,Hasegawa Kazuhiro,Tanaka Kazunari,et al.Method and apparatus for disinfecting drainage with bromine and iodine disinfectant[P].Wo:2000018689,2000-08-06.

[2]Budavaris，Maryadlele J，Neil O，et al，The Merck Index:An Encyclopedia of Chemcals，Dlogicals (12th ed)[M].Whiehouse Station，N J:Merck＆Co.，Inc,1996:518-519.

[3]熊永忠，萬文英，楊林.一種新的消毒劑——溴氯海因[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2005（1）：56.

[4]劉繼敏，趙勇.溴氯海因殺滅微生物效果與穩(wěn)定性的試驗(yàn)觀察[J].中國消毒雜志，2001（18）：218-222.

[5]陳榮鳳，薛廣波.二溴二甲基乙丙酰脲消毒機(jī)理的實(shí)驗(yàn)室研究[J].南方護(hù)理學(xué)報(bào)，2002（9）：69-71.

[6]李焰，陳祖興.新型二溴二甲海因復(fù)合保鮮劑的研制[J].精細(xì)化工，2001（18）：307-309.

[7]陳強(qiáng)，李清祿.復(fù)方溴氯海因消毒劑的性能[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2003（6）：225-229.

[8]張穗，郭永霞.井岡霉素A對水稻紋枯病菌的毒力和作用機(jī)理研究[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，12:31-37.

[9]麥科伊J W.冷卻水的化學(xué)處理[M].麥王筠,譯.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1981:93.

[10]秦娟，崔群，朱躍釗，等.溴代海因水溶液制劑及殺菌效果研究[J].南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005：27（4）：22-26.