濾袋法快速測(cè)定飼料中粗脂肪和總脂肪

張麗英 隋連敏 楊文軍

脂肪含量高低是衡量飼料質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低的重要指標(biāo)之一，因此脂肪測(cè)定早已成為飼料常規(guī)分析項(xiàng)目。目前飼料中脂肪測(cè)定多依據(jù)《飼料中粗脂肪的測(cè)定》GB/T6433—2006，該標(biāo)準(zhǔn)等同采用了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 6492：1999《動(dòng)物飼料中粗脂肪含量的測(cè)定》，并且與1994版的主要差異是增加了水解方法。多數(shù)植物性飼料中的油脂非常容易用石油醚等直接提取出來(lái)，但對(duì)于動(dòng)物性飼料和經(jīng)過膨化、制粒等熱處理的飼料，有一部分脂肪呈結(jié)合態(tài)，因此要想獲得準(zhǔn)確的總脂肪含量，需要先進(jìn)行酸水解預(yù)處理，然后再進(jìn)行提取。對(duì)于這些樣品，如果不經(jīng)過水解，脂肪測(cè)定結(jié)果會(huì)大大低于實(shí)際含量。

由于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T6433—2006中增加了水解方法，如何準(zhǔn)確有效操作成了大家所關(guān)心的問題。如果按照標(biāo)準(zhǔn)中所描述的步驟，非常繁瑣且不容易準(zhǔn)確掌握、操作，難以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。目前不僅企業(yè)的化驗(yàn)員，即使是檢測(cè)機(jī)構(gòu)的專職檢測(cè)人員也覺得不好把握。如何根據(jù)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的原理，尋找一種簡(jiǎn)捷而可靠的測(cè)定方法是從事飼料分析人員在實(shí)際工作中迫切需要的。本文著重介紹一種目前在歐美廣泛使用的濾袋法，來(lái)快速測(cè)定飼料中粗脂肪和總脂肪，并對(duì)測(cè)定結(jié)果與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較評(píng)價(jià)。

1 濾袋法測(cè)定飼料中的粗脂肪

1.1 適用范圍

該方法適用于GB/T6433—2006《飼料中粗脂肪的測(cè)定》中定義的A類樣品，即除B類樣品以外的所有動(dòng)物飼料。B類樣品主要包括：純動(dòng)物性飼料，包括乳制品；脂肪不經(jīng)水解不能提取的純植物性飼料，如谷蛋白、酵母、大豆及馬鈴薯蛋白以及熱處理的飼料（如制粒、膨化等）；含有一定數(shù)量加工產(chǎn)品的配合飼料、濃縮飼料，其20%脂肪來(lái)自加工產(chǎn)品。

1.2 方法提要

將試樣在103℃條件下烘干，然后用石油醚等在一定溫度條件下進(jìn)行提取，提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中粗脂肪含量。

1.3 儀器設(shè)備

分析天平：精度0.1 mg。干燥箱：溫度控制（103±2）℃。脂肪提取儀：ANKOM XT15，工作溫度（90±2）℃。濾袋：ANKOM XT14，孔徑 1 μm。封口機(jī)、干燥器，記號(hào)筆：耐酸和其他溶劑。

1.4 測(cè)定步驟

①將標(biāo)記好的濾袋放在天平上，并回零；②稱取0.75～1.0 g試樣置于濾袋中，記錄質(zhì)量（m1）；③用封口機(jī)在離濾袋上沿約4 mm處完全熱封，冷卻2 s；④將濾袋置于103℃條件下干燥3 h，干燥結(jié)束，快速?gòu)母稍锵渲腥〕鰜?lái)放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m2）；⑤將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15個(gè)（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)。按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設(shè)定時(shí)間60 min，溫度90℃；⑥測(cè)定結(jié)束，取出帶濾袋的樣品支架，并將濾袋置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑦將濾袋放入干燥器中冷卻至室溫,并稱重（m3）。

1.5 結(jié)果計(jì)算

試樣中粗脂肪含量按照公式（1）計(jì)算。

式中：m1——試樣質(zhì)量，g；

m2——浸提前烘干后試樣+濾袋質(zhì)量，g；

C1——浸提前空白袋干燥后質(zhì)量，g；

C2——脂肪提取后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

m3——浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

2 濾袋法飼料中總脂肪的測(cè)定

2.1 適用范圍

本方法適用現(xiàn)行GB/T6433—2006《飼料中粗脂肪測(cè)定》中所規(guī)定的B類樣品（見本文1.1部分）。

2.2 方法提要

首先將試樣用鹽酸溶液水解，釋放結(jié)合態(tài)油脂，然后用石油醚等溶劑在一定溫度條件下進(jìn)行提取。提取前后試樣質(zhì)量減少部分占試樣質(zhì)量百分比即為試樣中總脂肪含量。

2.3 儀器設(shè)備

鹽酸水解系統(tǒng)：ANKOM HCI,溫度控制（90±2）℃。

硅藻土：用6 mol/l鹽酸溶液消煮30 min，然后用水沖洗至中性，并在130℃烘箱中干燥，備用。

其他同粗脂肪測(cè)定。

2.4 試劑與溶液

石油醚：沸點(diǎn)40～60℃。鹽酸溶液：3 mol/l。

2.5 測(cè)定步驟

①將標(biāo)記好的濾袋放在天平上，并回零；②當(dāng)試樣中脂肪含量超過20%，需要在濾袋中先稱取0.5～1 g硅藻土，并回零；③稱取0.75～1.0 g試樣置濾袋中，記錄質(zhì)量（m1），每個(gè)袋中的硅藻土和試樣干燥后的質(zhì)量不能超過1.5 g；④用封口機(jī)在離濾袋上沿4 mm處完全熱封，冷卻2 s，然后搖動(dòng)濾袋，使試樣和硅藻土混合均勻；⑤將試樣放入鹽酸水解系統(tǒng)的樣品架上，每批可以放15個(gè)（包括空白濾袋），然后將其放入水解系統(tǒng)的缸體內(nèi)，加3 mol/l鹽酸溶液500 ml，并按照儀器屏幕指示操作，設(shè)定時(shí)間60 min，水解溫度90℃，水淋洗20 min；⑥當(dāng)水解結(jié)束，將濾袋連同支架一起從水解系統(tǒng)中取出來(lái)，鋪平濾袋，在兩層吸水紙之間輕輕擠壓，以除掉濾袋中殘存的水；⑦將濾袋置于103℃條件下干燥箱中干燥3 h，干燥結(jié)束，快速?gòu)母稍锵渲腥〕鰜?lái)放入干燥器中，冷卻至室溫并記錄質(zhì)量（m2）；⑧將濾袋擺放在脂肪分析儀的樣品架上，每批可以放15個(gè)（包括空白濾袋），然后將其放入脂肪分析儀的缸體內(nèi)，按照脂肪分析儀屏幕指示操作，設(shè)定時(shí)間60 min，溫度90℃；⑨測(cè)定結(jié)束，將濾袋取出來(lái)，置于103℃干燥箱中干燥1 h；⑩干燥結(jié)束，將濾袋放在干燥器中冷卻至室溫，并稱重（m3）。

2.6 結(jié)果計(jì)算

試樣中總脂肪含量按照公式（2）計(jì)算。

式中：m1——試樣質(zhì)量，g；

m2——水解后試樣+濾袋+硅藻土烘干后質(zhì)量，g；

C1——水解后空白袋干燥后質(zhì)量，g；

C2——脂肪提取后空白袋烘干后質(zhì)量，g；

m3——浸提后樣品+濾袋烘干后質(zhì)量，g。

3 結(jié)果比較與評(píng)價(jià)

3.1 與傳統(tǒng)方法比較

濾袋法與傳統(tǒng)方法飼料中脂肪測(cè)定結(jié)果比較見表1。由表1可以看出，所比較的10種飼料原料或產(chǎn)品，其脂肪含量覆蓋范圍比較寬，最低不到0.5%，最高則超過40%，但無(wú)論脂肪含量高與低，濾袋法與傳統(tǒng)方法測(cè)定結(jié)果相同或非常接近。

表1 濾袋法與傳統(tǒng)方法飼料中脂肪結(jié)果比較（%）

3.2 聯(lián)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果

濾袋法已經(jīng)獲得美國(guó)油脂協(xié)會(huì)（AOCS）的批準(zhǔn)（AOCS Approved Procedure Am 5-04）。表2為AOCS組織的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由表2可以看出，選用了7種典型飼料原料和產(chǎn)品作為比對(duì)樣品，參加實(shí)驗(yàn)室數(shù)量為10～12個(gè)。采用濾袋法全體實(shí)驗(yàn)室結(jié)果平均值與有資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室采用AOCS Official Methods Ba 3-38,AOAC 920.39或其他公認(rèn)方法測(cè)定結(jié)果平均值相同或非常接近，并且有比較好的重復(fù)性和再現(xiàn)性。

若干篇，刊略，需者可函索）