上海市湯卜遜沙門菌流行特征分析*

王 宇,華哲云,張前龍,許學斌,王洪霞,刁保衛(wèi),闞 飆

黃浦區(qū)疾病預防控制中心(HPCDC)作為上海市的4個監(jiān)測點之一,于2007年加入非傷寒沙門菌的全球監(jiān)測網(wǎng)絡(GSS)。當年10月,黃浦區(qū)中心醫(yī)院實驗室連續(xù)報告了3例以上的疑似相同血清型的沙門菌腹瀉病例,根據(jù)監(jiān)測方案開展流行病學調(diào)查,并通過GSS監(jiān)測網(wǎng)絡收集菌株的湯卜遜沙門菌血清型復核鑒定、耐藥表型和脈沖場凝膠電泳(PFGE)圖譜分析,確認是1起食源性暴發(fā)案例,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗菌株 2006-2007年上海市GSS監(jiān)測病例湯卜遜沙門菌23株(包括2007黃浦區(qū)中心醫(yī)院腹瀉病例分離的8株和2株食品株);大腸埃希菌ATCC25922為藥敏試驗質(zhì)控菌株;布倫登盧普沙門菌H9812作為PFGE的分子量標準菌株,由上海市疾病預防控制中心菌種保藏室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 亞硒酸鹽煌綠增菌液(SBG)、羅伯特增菌液(RVS)、木糖賴氨酸膽酸鹽瓊脂平板(XLD)、CHROMagarTM沙門菌顯色瓊脂平板(CAS)、M-H 瓊脂平板、“H”相誘導軟瓊脂平板(上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司),腸道雙支糖綜合鑒別管和其他輔助生化鑒定試劑由本中心供應室配置。以上增菌液和平板均避光10℃以下保存,在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 試劑和儀器 沙門菌分型診斷血清50種(成都生物制品研究所)、沙門菌分型診斷血清 79種(S&A,Ltd,泰國);沙門菌診斷因子血清23種(丹麥,SSI);藥敏分配器和16種抗生素紙片:四環(huán)素(TET)、頭孢噻夫(EFT)、奧格門丁(AMC)、氨芐西林(AMP)、復方新諾明(SXT)、環(huán)丙沙星(CIP)、氯霉素(C)、氧氟沙星(OFX)、萘啶酸(NA)、頭孢吡肟(FEP)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢他啶(CAZ)、慶大霉素(CN)、鏈霉素(S)、磺胺異惡唑(S3)、甲氧芐氨嘧啶(W)(Oxoid,英國);VitekAM-60自動生化鑒定儀(梅里埃,法國)和菌液比濁儀(西門子,德國);限制性內(nèi)切酶XbaⅠ(TaKaRa,日本);SeaKem Gold瓊脂糖(Cambraex Bio Rockland,美國);脈沖凝膠電泳儀CHEF mapper system和凝膠成像系統(tǒng)GEL Doc2000(Bio-Rad,美國)。血清和抗生素紙片均在有效期內(nèi)使用。

1.2 實驗方法

1.2.1 湯卜遜沙門菌(GSS)病例監(jiān)測 按文獻[1]和《上海市沙門菌病監(jiān)測方案.2006年》中檢測程序由4個監(jiān)測點12家醫(yī)院的腸道門診采集糞便樣品,CDC實驗室完成標本分離、菌株初篩鑒定和血清分型,系統(tǒng)生化反應符合并且血清抗原式符合[6,7:k:1,5]者鑒定為湯卜遜沙門菌。

1.2.2 暴發(fā)病例調(diào)查 按照《上海市沙門菌病監(jiān)測方案2006年》中有關(guān)流行病學調(diào)查的程序完成對檢出陽性菌株的病人調(diào)查。

1.2.3 抗生素敏感性試驗 參照CLSI(NCCLS)2005年的操作規(guī)程采用改良K-B法并根據(jù)抑菌圈直徑判斷敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)。頭孢噻夫(EFT)K-B法的判斷結(jié)果為19≤20-23≥24mm(由Oxoid公司提供參考值)。

1.2.4 PFGE數(shù)據(jù)庫 按照GSS方案要求,在中國CDC國家腸道病重點實驗室按照 PulseNet規(guī)定的PFGE標準方法,完成22株湯卜遜沙門菌(包括20株腹瀉株和2株食品株)的脈沖場凝膠電泳圖譜和聚類分析。

2 結(jié) 果

2.1 湯卜遜沙門菌病例監(jiān)測 2006年上海市GSS病例分離到1株湯卜遜沙門菌,2007年分離到22株。2007年報告的湯卜遜沙門菌列本市非傷寒沙門菌監(jiān)測確認病例第3位,10月份為湯卜遜沙門菌報告病例菌株數(shù)的高峰期,共報告了13株,其中黃浦區(qū)中心醫(yī)院報告10例,長寧區(qū)中心醫(yī)院報告2例,浦東新區(qū)金楊社區(qū)服務中心報告1例。從發(fā)病曲線看,黃浦區(qū)中心醫(yī)院報告的病例高度懷疑為一起聚集性病例。

2.2 暴發(fā)病例的流行病學調(diào)查 10例確認的病例中有8人來自黃浦區(qū)制造局路193號南聯(lián)工地。該工地有建筑工人百多人,均來自浙江紹興,飲水為自來水,住宿為簡屋房,共有2層,約300m2,12人/間。旁邊為自搭廚房以及用餐點。流行病學調(diào)查顯示,2007年 10月4-13日陸續(xù)有11人(男6名,女5名)發(fā)生腹瀉癥狀就診,分別為:5日2人,9日3人,11日1人,13日3人。臨床癥狀均表現(xiàn)有腹瀉、稀便;另有4人同時伴有發(fā)熱癥狀,有5人伴有嘔吐癥狀。就診病例中8人從肛拭中分離到湯卜遜沙門菌。通過對腹瀉病例的配對調(diào)查發(fā)現(xiàn),絕大多數(shù)腹瀉病人明顯有食用“皮蛋拌豆腐”的共同進餐史。工地生活區(qū)和就餐區(qū)經(jīng)過環(huán)境整治和消毒等控制措施后,未出現(xiàn)后續(xù)病例。

2.3 抗生素耐藥率 以16種抗生素紙片作耐藥性測定,2006-2007年上海市GSS分離的23株湯卜遜沙門菌腹瀉菌株(包括8株暴發(fā)病例菌株和15株散發(fā)病例菌株)中,所有菌株對四環(huán)素、奧格門丁、氨芐西林、氯霉素、萘啶酸、磺胺異惡唑的耐藥率均為100%,明顯高于散發(fā)菌株對抗生素的耐藥率,圖1。

圖1 上海市湯卜遜沙門菌耐藥性監(jiān)測Fig.1 Drug resistance Surveillance of S.thompson in Shanghai

2.4 PFGE分型 2006-2007年上海市GSS分離的20株湯卜遜沙門菌腹瀉病人株(包括黃浦區(qū)的8株)和2株湯卜遜沙門菌食品監(jiān)測株(分別為豬心和豬肚)經(jīng) XbaⅠ酶切電泳后共分為15個PFGE帶型。其中8株暴發(fā)菌株的電泳帶型一致,顯示在遺傳上屬于完全相同的克隆,見圖2。剩余的14個PFGE帶型相對應的菌株均僅有1株,分別來自湯卜遜沙門菌散發(fā)菌株(12株)和食品株(2株)。通過聚類分析顯示暴發(fā)菌株和散發(fā)菌株、食品株之間的遺傳相似度不高,見圖3。

3 討 論

GSS是以腹瀉病例監(jiān)測為基礎,重點針對非傷寒沙門菌引起的“散在暴發(fā)”案例開展相關(guān)的食源性溯源調(diào)查研究的全球合作項目。湯卜遜在我國屬較常見的沙門菌血清型,一般僅引起散發(fā)的食源性個案病例,出現(xiàn)暴發(fā)流行較少見〔2〕,但 2007年報告的22株湯卜遜沙門菌列本市非傷寒沙門菌監(jiān)測確認病例數(shù)的第3位,尤其在10月初報告的8株腹瀉菌株高度疑似為食源性暴發(fā)病例,有不潔飲食史(皮蛋拌豆腐)是此次暴發(fā)的主要危險因素。

現(xiàn)有的文獻已表明湯卜遜沙門菌對大多數(shù)抗生素敏感〔3〕。而此次GSS菌株的耐藥表型監(jiān)測證實,暴發(fā)菌株對四環(huán)素、奧格門丁、氨芐西林、氯霉素、萘啶酸、磺胺異口惡唑6種抗生素100%的耐藥,耐藥性遠大于散發(fā)菌株。某種程度上超過了對氨芐西林、氯霉素、鏈霉素、磺胺異惡唑、四環(huán)素5種抗生素耐藥的定義為“超級細菌”的鼠傷寒沙門菌(DT104)的耐藥性。由于國內(nèi)禽畜和水產(chǎn)品等農(nóng)產(chǎn)品養(yǎng)殖業(yè)者對抗生素的濫用和多數(shù)發(fā)達地區(qū)的腹瀉病人相對容易獲得抗生素的事實使某些沙門菌型為適應生態(tài)環(huán)境中而更容易獲得“耐藥”基因的改造。這種突變的湯卜遜是否能形成穩(wěn)定的克隆株和其耐藥的分子機理變化需通過在建立中的病例監(jiān)測和食源性監(jiān)控和而為一的網(wǎng)絡化(China PulseNet)監(jiān)測體系進行系統(tǒng)而深入的研究。

PFGE是建立標準化的監(jiān)測體系中實驗室的標準化“語言”之一。其酶切圖譜系統(tǒng)闡述了本地區(qū)湯卜遜沙門菌株間分子水平的變化特征:腹瀉株和食品株之間存在共性和個性的PFGE型譜特征。20株湯卜遜沙門菌腹瀉株的優(yōu)勢型為12型,全部由8株暴發(fā)菌株所構(gòu)成,其余12株分屬12個PFGE型。2株湯卜遜食品株的PFGE型分別為9型和18型,沒有與之完全匹配的腹瀉株帶型。暴發(fā)菌株的PFGE結(jié)果也從分子水平再次確認了上海市黃浦區(qū)2007年10月初發(fā)生的暴發(fā)病例,而缺少與之匹配的食品株的結(jié)果提示在食源性事件的調(diào)查中要重視污染食品或傳染源的溯源調(diào)查。

由于沙門菌病的潛伏期長,故其引發(fā)的食源性病例具有一定隱匿性,病程較長,若發(fā)現(xiàn)不及時或不及時消除污染源易出現(xiàn)持續(xù)病例現(xiàn)象。本次的湯卜遜暴發(fā)病人前后病程共計9天,因集中于黃浦區(qū)中心醫(yī)院就診,同時接診醫(yī)生反映靈敏,故能及時發(fā)現(xiàn)疫情。有文獻報道〔4-5〕:美國加州曾在1999年 3月6-31日間發(fā)生食用受污染的鮮香菜造成76人的湯卜遜沙門菌暴發(fā)病例(其中有35人表現(xiàn)為散發(fā)病例);2000年8月,在美國加州南部出現(xiàn)持續(xù)增多的湯卜遜沙門菌腹瀉病例,最后確認源于1名隱性感染的食品從業(yè)人員不斷加工生產(chǎn)被湯卜遜沙門菌污染的面包。以上信息間接說明現(xiàn)階段開展食源性疾病的監(jiān)測對公共衛(wèi)生和實驗室檢測、分析及分子分型的能力的技術(shù)整合提出了新的要求。相信隨著GSS項目在本地區(qū)的開展并總結(jié)、積累相關(guān)信息能繼續(xù)服務和共享于本市的公共衛(wèi)生保障體系的建設和2010年世博會的衛(wèi)生保障活動。

〔1〕許學斌,顧寶柯,陳敏,等.沙門菌檢測方法的優(yōu)化〔J〕.檢驗醫(yī)學,2007,22(6):677-680.

〔2〕顧寶柯,袁政安,金匯明,等.上海市沙門菌病流行特征分析〔J〕.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學,2008,25(3):245-247.

〔3〕許學斌,顧寶柯,金匯明,等.免疫磁珠法檢測食品中的沙門菌及分離菌株的耐藥性〔J〕.中國食品衛(wèi)生雜志,2006,18(3):202-204.

〔4〕Campbell JV,Mohle-Boetani J,Reporter R,et al.An Outbreak of Salmonella serotype thompson associated with fresh cilantro〔J〕.T he Journal of Infections Diseases,2001,183:984-987.

〔5〕Kimura AC,Palumbo MS,Meyers H,et al.A multi-state outbreak of Salmonella serotype thompson infection from commercially distributed bread contaminated by an ill food handler〔J〕.Epidemiology and Infection,2005,133:823-828.