金龍膠囊對肺腺癌A549生長能力的影響的研究

呂永豐 陳清霞 梁丹

肺癌是我國第一大癌，其治療方法多樣，但其中不少治療方法存在著不同程度的副作用，中醫(yī)藥在預防不良反應方面有明顯優(yōu)勢。金龍膠囊(JinLong Capsule，JCL)由鮮守宮、鮮金錢、白花蛇等動物藥組成，具有中醫(yī)整體調(diào)節(jié)、扶正蕩邪、滋陰、破瘀散結、解郁通絡及中藥“生者尤良”的優(yōu)點［1］。經(jīng)多年治療腫瘤的臨床經(jīng)驗及實驗室研究表明，其對多種腫瘤都有良好的治療作用。大量臨床研究表明，金龍膠囊具有抑制腫瘤生長、抑制腫瘤復發(fā)轉移、合并放化療解毒增效，腫瘤鎮(zhèn)痛，增強機體免疫功能，增強機體抗病能力等功效。本實驗擬采用肺腺癌A549進行JCL抑制肺癌細胞生長研究［2］。

1 材料與方法

1.1 藥物制備 JLC金龍膠囊是我國第一個正式批準使用的鮮動物藥制劑，為守宮、蘄蛇等鮮動物制劑，由北京建業(yè)公司提供。其呈黃色粉末狀，易潮解，每次臨用前用蒸餾水配成混懸液備用。

1.2 細胞培養(yǎng) 人肺腺癌細胞株A549(中山醫(yī)科大學動物實驗中心提供)。實驗設置4組:對照組(A)、低劑量組(B)、中劑量組(C)和高劑量組(D)。將液氮保存的A549細胞凍存管放入37℃恒溫箱中，融化后低速離心，去上清，PBS液漂洗一次，接種于培養(yǎng)瓶中，使用10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，放置于5%CO2，恒溫37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞生長達到對數(shù)生長期后，取對數(shù)生長細胞進行實驗。將細胞懸液調(diào)整為了5×105/ml，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔2 ml。實驗各組含不同濃度的JCL(低劑量組0.01 mg/ml，中劑量組0.02 mg/ml，高劑量組0.04 mg/ml)，對照組不加藥，每組設6個平行孔。

1.3 細胞生長曲線繪制 采用細胞計數(shù)法與給藥第1～7天每日檢測各組細胞濃度。每孔重復檢測三個樣本，取均數(shù)記錄為每天的數(shù)據(jù)。

1.4 凋亡指數(shù)檢測 采用原位末端標記法(TUNEL法)，檢測腫瘤細胞凋亡，檢測程序按TUNEL試劑盒說明書進行，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替TUNEL反應液作陰性對照。

2 結果

細胞生長曲線(圖1、2):給藥組生長曲線明顯較對照組平緩，并與給藥劑量呈顯著相關性。

A549細胞體外培養(yǎng)

各組生長曲線比較

凋亡指數(shù)(AI)=(凋亡細胞數(shù)/瘤細胞總數(shù))×100%。凋亡細胞形態(tài)要符合下述特點:①單個細胞;②胞質(zhì)呈桔紅色且收縮;③胞核致密深染色或為核碎片;④周圍無炎癥反應及壞死。JLC對A459細胞凋亡指數(shù)的影響從實驗結束后的可見:給藥組凋亡指數(shù)明顯高于對照組，凋亡指數(shù)與給藥劑量呈正相關，差異有統(tǒng)計學意義見表1。

通過以上結果發(fā)現(xiàn)，JLC對肺癌A549細胞的增殖能力有顯著抑制作用并能誘導腫瘤細胞凋亡，作用呈劑量相關性。

3 討論

金龍膠囊是我國第一個正式批準使用的鮮動物藥制劑，以守宮、白花蛇等為原料，經(jīng)超低溫破碎及凍融處理，使細胞內(nèi)各種有效成分充分釋放，并在低溫下迅速進行生化技術處理而制成。臨床廣泛用于肺癌、乳腺癌、肝癌、宮頸癌、白血病等的治療［3］。金龍膠囊的抗癌原理，目前認為是使Th細胞上調(diào)，Ts細胞下調(diào)，提高抗癌免疫力，其功效為補益氣血，破瘀散結，解毒通絡［4］。

表1 JLC對A549細胞凋亡指數(shù)的影響

化療是治療晚期惡性腫瘤的重要手段之一，但化療的嚴重毒副作用往往是患者難以堅持治療的主要原因。金龍膠囊能增加巨噬細胞產(chǎn)生TNF的能力，具有提高免疫功能和抗腫瘤的雙重作用［5］。同時有藥理學研究證明，金龍膠囊可減輕CTX對肝臟及造血系統(tǒng)的毒性反應［6］。國內(nèi)多家綜合性醫(yī)院聯(lián)合對300例原發(fā)性肝癌患者進行了雙盲、對照試驗，結果同樣證實金龍膠囊能提高患者CD4+T細胞，降低CD8+T細胞，其在免疫調(diào)節(jié)方面有非常有效地作用。同時大量臨床研究表明，金龍膠囊具有抑制腫瘤生長、抑制腫瘤復發(fā)轉移、合并放化療解毒增效，腫瘤鎮(zhèn)痛，增強機體免疫功能，增強機體抗病能力等功效。本研究從細胞學角度對JLC在肺癌的治療進行了初步探索，結果發(fā)現(xiàn)一定濃度的JLC有顯著的抑瘤殺瘤作用，并有顯著的劑量相關性。由此，我們可以預見金龍膠囊在肺癌治療領域將有光明的前景，但是中成藥成分復雜，治療機理多樣，還需要研究者們不斷地深入探討。

［1］程艷紅.生者尤良 金龍無量-我國首例抗癌鮮動物藥金龍膠囊上市后再評價獲突破性進展.首都醫(yī)藥，2004，13:44-45.

［2］林顯敢，謝德榮，姚和瑞，等.金龍膠囊對晚期非小細胞肺癌患者CD4/CD8和自然殺傷細胞活性的影響.新醫(yī)學，2003，34:8-9.

［3］趙冬梅，石永進，關大創(chuàng)，等.“金龍膠囊”抑制HL-60細胞生長并誘導細胞凋亡.中國醫(yī)藥學報，2002，17(6):346-348.

［4］賈立群，李學，萬冬桂，等.金龍膠囊的免疫雙向調(diào)節(jié)作用.北京醫(yī)學，2005，27(9):550-552.

［5］郝仙娣，周哲，李樹新.金龍膠囊抑瘤及配合化療減毒作用的觀察.中國腫瘤臨床與康復，1998，5(增刊):40-42.

［6］郝仙娣，周哲，李樹新.金龍膠囊對荷瘤小鼠免疫功能影響的研究.中國腫瘤臨床與康復，1998，5:37-39.