復方牛蒡子含片體外抑菌作用研究＊

王麗萍，段曉穎，孫廣科

(河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥學部，河南 鄭州 450000)

復方牛蒡子含片由牛蒡子、金銀花、牡丹皮等組方，具有疏風散熱、解毒散結(jié)、消腫利咽等功效，主治急、慢性咽喉炎所致咽部疼痛、咽干、咽部異物感。筆者根據(jù)其功能主治，對其體外抑菌作用進行了研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料

SXK-103型超凈工作臺(安徽省蚌埠凈化設備廠);RCO-3000TVBB型CO2培養(yǎng)箱(美國熱電)。復方牛蒡子含片(由河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院提供，批號為070621，每g含原生藥3.57 g);咽炎含片(河北國金藥業(yè)有限公司，批號為0802131，每片相當于原生藥 2.69 g);肺炎鏈球菌 (31001-9a)、乙型溶血性鏈球菌(32210-4a)凍干菌粉均由中國藥品生物制品檢定所提供;金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26-003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]斜面保存菌種由河南省食品藥品檢驗所提供;營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號為060322)、血瓊脂基礎培養(yǎng)基(批號為070720)、pH=7.0氯化鈉-蛋白胨水緩沖液(批號為 060426)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號為060330)均由北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn);無菌脫纖維羊血(批號為080725，青島綠谷國際商貿(mào)有限公司)。

2 方法與結(jié)果[1-2]

2.1 菌液與藥物配制

2.1.1 菌種復壯

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌株接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，(35±1)℃培養(yǎng)20 h。取肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌菌株接種于10%無菌脫纖羊血肉湯培養(yǎng)基中，并于CO2培養(yǎng)箱中(35±1)℃培養(yǎng)20 h。

2.1.2 菌液活菌數(shù)計算

取經(jīng)復壯增菌培養(yǎng)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌懸液1 mL，用無菌生理鹽水按 1 ∶10 倍比分別稀釋至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，分別取各稀釋級菌液 0.1，0.2，0.5 mL，均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板上，(35±1)℃培養(yǎng)20 h，確定最終使用的菌液稀釋級與加菌液量:大腸埃希菌的稀釋級為10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量134 CFU/0.2 mL，金黃色葡萄球菌的稀釋級為10-5，加菌量0.1 mL，平均含活菌量236 CFU/0.1 mL。按上述方法將肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌分別稀釋至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，均勻涂布于血瓊脂平板(含10%無菌脫纖羊血)上，(35±1)℃培養(yǎng)20 h，確定最終使用的菌液稀釋級與加菌液量:肺炎鏈球菌的稀釋級為10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量106 CFU/0.2 mL;乙型溶血性鏈球菌稀釋級為10-6，加菌量0.2 mL，平均含活菌量80 CFU/0.2 mL。

2.1.3 藥物配制

稱取復方牛蒡子含片適量，以pH=7.0的氯化鈉-蛋白胨水緩沖液為稀釋劑，依次制成含生藥質(zhì)量濃度分別為2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的藥液;稱取咽炎含片適量，按以上述方法配制成含生藥質(zhì)量濃度依次為2 500，2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的藥液。

2.1.4 含藥平皿制備

分別取上述供試品藥液2 mL，加入無菌平皿內(nèi)，立即加入溫度為45～50℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基18 mL，即刻搖勻，供檢測大腸埃希菌及金黃色葡萄球菌試驗用;分別取上述供試品藥液2 mL，加入血瓊脂培養(yǎng)基(含10%無菌脫纖羊血)18 mL，即刻搖勻，供檢測肺炎鏈球菌及乙型溶血性鏈球菌試驗用;則制成的平皿中含生藥質(zhì)量濃度依次為 200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L 的復方牛蒡子含片含藥平皿。取咽炎含片按上述方法制備含藥平皿，則各平皿的最終質(zhì)量濃度分別為 250，200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L(含生藥質(zhì)量濃度)。

2.2 菌株接種與培養(yǎng)

分別將稀釋各菌液均勻涂布于不同質(zhì)量濃度的含藥平皿內(nèi);另設不含藥物上述各菌種對照平皿，不接種菌液的各藥物對照平皿，及不含藥物的空白對照平皿，均置(35±1)℃培養(yǎng)20 h。結(jié)果不含藥物的各菌種對照平皿中，陽性菌生長良好;不接種菌液的各藥物對照皿和空白對照皿均無菌生長;含藥平皿中菌落形態(tài)與陽性對照平皿相同。以平皿內(nèi)無某一菌株生長的最低藥物濃度為該藥物對某一菌株的最低抑菌濃度(MIC)，結(jié)果見表1。

表1 復方牛蒡子含片體外抑菌試驗結(jié)果

3 討論

選擇引起急性咽炎的常見致病菌進行抑菌試驗[3]，結(jié)果表明，復方牛蒡子含片對肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用均好于咽炎含片，其中對金黃色葡萄球菌高度敏感，較咽炎含片抑菌效果尤為顯著。

牛蒡苷、苷元及牛蒡子水煎液在體外對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌等8種細菌有較明顯的抑菌作用[4]。而復方牛蒡子含片中牛蒡子作為一種較好的抑菌中藥，在其他藥物的協(xié)同作用下，對急性咽炎常見病菌均有不同程度的抑菌作用，這為本品治療急性咽炎提供了依據(jù)。

[1]陳 奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:262-264.

[2]徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:1 647-1 663.

[3]謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應用[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:675.

[4]李大亮，宋 楊，周慧華，等.牛蒡子水煎液及牛蒡苷、牛蒡苷元體外抗菌實驗研究 [J].黑龍江醫(yī)藥，2004，17(6):433-436.