高效液相色譜法測(cè)定康糖膠囊中丹酚酸B含量

黃勝春，葛朝霞

（湖南省邵陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所，湖南 邵陽(yáng) 422001）

康糖膠囊是由生地黃、丹參、三七、葛根和黃連等中藥組成的醫(yī)院制劑，具有滋陰補(bǔ)腎、清熱消渴的功效，可降低血糖和尿糖，用于治療消渴癥引起的多食、多飲多尿、四肢無(wú)力等癥[1]。但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有定量指標(biāo)，不能很好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。筆者用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其臣藥丹參的有效成分丹酚酸B的含量，結(jié)果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-20 A型高效液相色譜儀（島津）；AG 135型電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）。丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111562-200605）；康糖膠囊（湖南省邵陽(yáng)市第二人民醫(yī)院）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：UltimateMXB-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -乙腈 -冰醋酸 -水（30∶10∶1∶59）；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取在五氧化二磷中干燥12 h的丹酚酸B對(duì)照品0.010 63 g，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（106.3 μg/mL）。取康糖膠囊10粒的內(nèi)容物，研細(xì)混勻，取約4.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液[2]。取除丹參外的處方量藥材，按所確定的制備工藝制備缺丹參的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，注入色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，供試品溶液色譜中丹酚酸B峰與雜質(zhì)峰完全分離，陰性對(duì)照品溶液色譜中在與丹酚酸B對(duì)照品峰相應(yīng)位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液（106.3 μg/mL）2，4，6，8，10，12 μL，依法進(jìn)樣測(cè)定，以丹酚酸B的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X）、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=7.26 ×105X-3.01 ×104，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，丹酚酸 B 進(jìn)樣量在0.212 6～1.275 6 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.95%（n=5）。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別精密吸取同一供試品溶液 10 μL，于 0，1，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，測(cè)定丹酚酸B峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=1.17%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品約4.0 g，共5份，依法測(cè)定其丹酚酸B含量。結(jié)果平均含量為0.29 mg/g，RSD=1.03%（n=5）。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（0.29 mg/g）約2.0 g，精密稱定，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入丹酚酸B對(duì)照品溶液（106.3 μg/mL）4.0，5.0，6.0 mL，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 丹酚酸B加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

曾試用HPLC法測(cè)定方中君藥生地黃中梓醇的含量，但因影響因素較多、其他成分干擾較明顯、峰分離不完全而放棄，改測(cè)臣藥丹參的有效成分丹酚酸B含量，獲得了滿意效果。

表2 樣品中丹酚酸B含量測(cè)定結(jié)果

曾分別考察用超聲法和加熱回流法[3-5]提取丹酚酸B，結(jié)果含量分別為0.26 mg/g和0.29 mg/g，表明用加熱回流法提取樣品，丹酚酸B含量較高。曾用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果峰形寬、拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，將甲酸改為冰醋酸，能獲得良好的色譜行為。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：52.

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[3]楊廣德，賀浪沖，李永茂.丹參有效部位指紋圖譜定性和有效成分定量分析方法研究[J]. 藥物分析雜志，2003，23（6）:409-413.

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