蓖麻油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

聞娣娣， 錢曉燕， 王小平， 楊世林， 朱永明*

（1.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，江蘇蘇州 215123;2.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)中心，江蘇蘇州 215123）

蓖麻油為大戟科植物蓖麻Ricinus communisL.的成熟種子經(jīng)榨取并精制得到的脂肪油。蓖麻油其主要成分為蓖麻油酸（順式-12-羥基十八碳-9-烯酸，分子式C18H34O3），含量最高，其他還有棕櫚酸、硬脂酸、蓖麻油酸、油酸、亞油酸等脂肪酸［1，2］。蓖麻油經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，它是藥用瀉劑，有潤腸通便之功效，用于腸燥便秘;還用作助染劑、潤滑劑、增塑刑、乳化刑和制造涂料、油漆、皂類及油墨的原料［3，4］。近年來，人們采用蓖麻油煎蛋的方法取得了較好的引產(chǎn)效果。作為控制蓖麻油質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，在《中國藥典》2005版Ⅰ部中缺乏專屬性較強(qiáng)的鑒別項(xiàng)目和主要成分的含量測定方法，難于對蓖麻油的質(zhì)量進(jìn)行有效控制。因此，針對其不足，借鑒相關(guān)資料［5-10］，我們以TLC和GC法對蓖麻油進(jìn)行了研究，為蓖麻油質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器、試劑和材料

儀器:日本島津GC-2010氣相色譜儀（FID檢測器）;AT-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱（30.0 m×0.32 mm×0.5 μm，中科院蘭州化學(xué)物理研究所）;市售硅膠G薄層板（批號20080622，青島海洋化工廠）;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）;微量天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

試劑:氫氧化鉀、甲醇、氯化鈉、無水硫酸鈉、石油醚 （60－90℃）、乙醚、甲酸、乙酸、乙酸乙酯（AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;三氟化硼乙醚溶液（化學(xué)純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;正己烷（HPLC，批號08060366，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

材料:5個(gè)批次市售蓖麻油樣品（批號080503、080505、080512、080601、20080505）;蓖麻油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，批號066K1223，美國SIGMA公司提供）。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

取蓖麻油約40 mg置于50 mL的圓底燒瓶中，加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液5 mL，在60℃水浴中攪拌回流30 min，至油滴全部消失，皂化完全。再加入4 mL三氟化硼-甲醇（1∶3，V/V）于圓底燒瓶中，攪拌回流5 min，充分甲酯化反應(yīng);冷卻到室溫后，精密加入正己烷5 mL，充分振搖，再加入飽和氯化鈉溶液適量，待溶液分層后取上清液（正己烷層）于10 mL具塞試管中，加適量無水硫酸鈉除去痕量的水，此正己烷溶液作為供試品溶液。另取蓖麻油酸甲酯對照品，加正己烷制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照《中國藥典》2005年Ⅰ版附錄ⅥB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，分別以A1石油醚（60－90℃）-乙醚-甲酸（110∶45∶5）和A2正己烷-乙醚-乙酸（100∶35∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，碘顯色。供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

圖1 蓖麻油中蓖麻油酸的薄層鑒別

島津 GC-2010氣相色譜儀，GC-Solution工作站;色譜柱:AT-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱（30.0 m×0.32 mm×0.5 μm）;柱溫為恒溫220℃，保持30 min;進(jìn)樣口（SPL）溫度為260℃，檢測器（FID）溫度為280℃;載氣為高純N2，純度≥99.999%，流量為2.50 mL/min;氫氣（輔助氣）:40.0 mL/min;空氣（助燃?xì)猓?400.0 mL/min;分流比為10∶1;進(jìn)樣量1 μL。在上述色譜條件下，蓖麻油酸甲酯得到很好的分離，空白溶液、蓖麻油酸甲酯對照品及蓖麻油供試品的圖譜見圖2。

圖2 空白溶液（A）、蓖麻油酸甲酯對照品（B）和蓖麻油供試品（C）的GC圖

2.2.2 對照品溶液的制備

精密吸取蓖麻油酸甲酯對照品適量，以正己烷溶解成0.658 48 mg/mL溶液，密封，置4℃冰箱保存，備用。

2.2.3 供試品溶液的制備

精密稱取蓖麻油約40 mg置于50 mL的圓底燒瓶中，加入0.5 mol/L KOH-甲醇溶液5 mL，在60℃水浴中攪拌回流30 min，至油滴全部消失，皂化完全。再加入4 mL三氟化硼-甲醇（1∶3，V/V）于圓底燒瓶中，攪拌回流5 min，充分甲酯化反應(yīng);冷卻到室溫后，精密加入正己烷5 mL，充分振搖，再加入飽和氯化鈉溶液適量，待溶液分層后取上清液（正己烷層）于10 mL具塞試管中，再加適量無水硫酸鈉除去痕量的水，精密量取上述溶液1 mL，置10 mL量瓶中，用正己烷稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取蓖麻油酸甲酯對照品適量，按2.2.2項(xiàng)下方法配制成含蓖麻油酸甲酯0.082 31、0.164 62、0.329 24、0.658 48、0.823 1、1.316 96 mg/mL的6種濃度溶液。照《中國藥典》2005版Ⅰ部附錄ⅥE氣相色譜法試驗(yàn)，分別吸取1 μL進(jìn)樣，按2.2.1項(xiàng)方法測定，以峰面積（Y）對濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y=1 465 432.83X－36 249.5，r=0.999 7。結(jié)果表明，在濃度0.082 31～1.316 96 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取濃度為0.164 62、0.658 48、1.316 96 mg/mL的蓖麻油酸甲酯對照品溶液，每個(gè)濃度3份，按2.2.1項(xiàng)下方法，精密吸取1 μL進(jìn)樣，每份重復(fù)進(jìn)針3次，經(jīng)計(jì)算高、中、低濃度峰面積RSD結(jié)果均較好，平均峰面積RSD為0.59%，表明精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取蓖麻酸樣品（批號080505），按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，配置成濃度為0.950 4 mg/mL的供試液，精密吸取1 μL，按2.2.1項(xiàng)下方法測定，分別于0、1、2、4、6、8 h 進(jìn)樣，峰面積分別為802 765、811 352、809 121、816 760、824 297、826 947、805 906，得到其峰面積RSD=1.12%，結(jié)果表明在8 h內(nèi)供試品溶液呈穩(wěn)定狀態(tài)。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批蓖麻油樣品5份（批號080505），按2.2.3項(xiàng)下方法制備得到供試品溶液，精密吸取1 μL，按2.2.1項(xiàng)下方法測定，重復(fù)進(jìn)樣5次，峰 面 積 分 別 為 104 729、102 350、104 719、104 073、102 632，計(jì)算峰面積RSD為1.1%，結(jié)果表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，取080505批次的蓖麻酸 （含蓖麻油酸61.43%）約20 mg，共6份，精密稱定，精密量取濃度為1.646 2 mg/mL的蓖麻油酸甲酯對照品溶液10 mL，6份，分別加入上述6份樣品中，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取此溶液1 μL進(jìn)樣，按2.2.1項(xiàng)下方法測定，計(jì)算，得蓖麻油酸甲酯的平均回收率為97.24%，RSD為1.24%（n=6），表明該測定方法可靠。結(jié)果見表1。

表1 蓖麻油酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 The recovery rate of ricinoleic acid（n=6）

2.2.9 樣品含量測定

取5個(gè)批次的蓖麻酸樣品（批號 080503、080505、080512、080601、20080505），按2.2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批平行做三份，按照上述2.2.1項(xiàng)氣相色譜條件進(jìn)行測定，取1 μL供試液注入氣相色譜儀，測定峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蓖麻酸中蓖麻油酸的含量，結(jié)果見表2。

表2 蓖麻酸中蓖麻油酸的含量（n=3）Tab.2 The ricinoleic acid contents in Castor Oil（n=3）

3 討論

3.1 本試驗(yàn)所建立的薄層鑒別法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。TLC法考察了兩種展開劑石油醚（60～90℃）-乙醚-甲酸（110 ∶45 ∶5）和正己烷-乙醚-乙酸（100∶35∶3）均得到了理想的分離效果;通過碘、磷鉬酸、硫酸乙醇三種顯色劑比較，碘顯色簡便，不需要加熱處理，并且斑點(diǎn)清晰，分離度好。

3.2 文中采用固定柱溫220℃，系統(tǒng)分離度好，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間也縮短為19 min左右。

3.3 麻油酸的含量計(jì)算 蓖麻油中的蓖麻油酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸等脂肪酸一般以脂肪酸甘三酯形式存在，本試驗(yàn)將各脂肪酸甘三酯經(jīng)皂化、甲酯化后測定其衍生物脂肪酸甲酯的含量。蓖麻油酸的分子量298;蓖麻油酸甲酯的分子量為312。故計(jì)算樣品中蓖麻油酸的含量時(shí)需乘以系數(shù)0.955（298/312）。

3.4 通過GC-MS聯(lián)用技術(shù)，經(jīng)質(zhì)譜庫檢索結(jié)合人工譜圖識別鑒定出樣品中其它峰從左到右依次為棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞麻酸甲酯、花生酸甲酯、二十碳一烯酸甲酯。按照面積歸一化法計(jì)算，蓖麻油的主要成分為蓖麻油酸，含量達(dá)80%以上，占絕大部分，作為蓖麻油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù);其它脂肪酸不到20%，其中油酸、亞油酸含量變化范圍分別為3.55% ～4.57%和4.70% ～5.46%;少量的棕櫚酸、硬脂酸和脂酸含量變化范圍分別為0.98% ～1.24%和0.92% ～1.12%;極少量的花生酸、二十烷一烯酸含量變化范圍分別為0.40% ～0.53%和0.21% ～0.43%。

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