13批不同產(chǎn)地杜仲藥材質(zhì)量檢測分析

孔 強， 呂文海

（山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東濟南 250355）

杜仲是杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的干燥樹皮。具補肝腎、強筋骨、安胎、降血壓之效。系中藥中“三木資源”之一，生產(chǎn)周期長，市場需求量大。由于野生資源瀕于枯竭，市售杜仲藥材主為栽培品，多數(shù)生長年限短，產(chǎn)地加工不規(guī)范，致使杜仲藥材質(zhì)量嚴重下降。本實驗以2005版《中國藥典》［1］為據(jù)，以外觀性狀、醇溶性浸出物、松脂醇二葡萄糖苷含量（Pinoresino diglucoside，PDG）為指標，結(jié)合紫外譜線組鑒別，對13批不同產(chǎn)地杜仲藥材進行質(zhì)量調(diào)查分析，以期引起對杜仲藥材質(zhì)量的重視，為控制其質(zhì)量提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 供試藥材 13批杜仲藥材分別來自四川、貴州、河南、陜西、湖北、安徽等杜仲的主要產(chǎn)區(qū)。經(jīng)山東中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室周鳳琴教授鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的干燥樹皮。

1.2 儀器與試劑 Agilent 1100高效液相色譜儀;日立UV3010紫外可見分光光度計;PDG對照品（批號111537-200501，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實驗內(nèi)容及結(jié)果

2.1 外觀性狀鑒別 觀察杜仲藥材的顏色、氣味，測其長、寬度，浸潤后刮去栓皮層，用游標卡尺測量厚度，計算其栓皮所占比例，結(jié)果見表1。13份市售杜仲藥材顏色、氣味基本符合2005版《中國藥典》要求，凈制后藥材厚度遠達不到《中國藥典》3～7 mm的要求，均低于下限3 mm?！吨兴幉漠a(chǎn)銷》［2］載對杜仲按形狀劃分的等級要求為:特等，整張長70～80 cm，寬50 cm以上，厚7 mm以上;一等，整張長40 cm，寬40 cm以上，厚5 mm以上;二等，整張長40 cm以上，寬40 cm以上，厚3 mm以上;三等，最薄不少于2 mm;低于三等要求者統(tǒng)稱為捆仲。由表1可看出僅有陜西略陽杜仲符合三等杜仲的要求，其余12批杜仲均為捆仲。目前市售杜仲藥材普遍生長年限短，皮薄，達不到《中國藥典》相關(guān)性狀的基本要求。

表1 13批杜仲藥材質(zhì)量檢測結(jié)果

2.2 醇溶性浸出物測定 參照《中國藥典》2005年版（一部）杜仲項下要求，按“浸出物測定法”（附錄ⅩA）項下“醇溶性浸出物測定法（熱浸法）”，以75%乙醇為溶媒，測定供試藥材的醇溶性浸出物含量。結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，13批杜仲藥材醇溶性浸出物含量均符合藥典不低于11.0%的規(guī)定，但不同產(chǎn)地藥材間含量在11.1% ～18.1%之間，差別較大。河南南陽1高出《中國藥典》規(guī)定值的65%，陜西漢中樣品僅為11.1%。杜仲藥材厚度與生長年限密切相關(guān)。實驗提示，杜仲藥材醇溶性浸出物含量與凈制后藥材厚度等無相關(guān)性，但醇溶性浸出物含量與凈制工藝中是否傷水密切相關(guān)，規(guī)定杜仲藥材浸出物含量可以有效控制凈制過程。

2.3 松脂醇二葡萄糖苷含量測定 按《中國藥典》2005年版一部杜仲項下要求，按“高效液相色譜法”（附錄Ⅵ）測定供試藥材的松脂醇二葡萄糖苷的含量。

2.3.1 供試品溶液的制備 取供試杜仲適量，剪成直徑小于2 mm的碎片，揉成絮狀，取2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷100 mL，加熱回流6 h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇100 mL，加熱回流6 h，提取液回收甲醇，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取松脂醇二葡萄糖苷對照品5.05 mg，加甲醇定容至10 mL量瓶，搖勻。

2.3.3 色譜分析條件 色譜柱:Phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）;流動相:甲醇-水（28 ∶72）;流速:1 mL/min;柱溫:25 ℃;進樣量:5 μL;檢測波長:277 nm。結(jié)果見表1。

實驗結(jié)果表明，9份杜仲藥材所含松脂醇二葡萄糖苷超過藥典所規(guī)定的0.1%的要求。四川4份樣品均符合藥典規(guī)定;陜西杜仲與河南南陽兩份樣品中松脂醇二葡萄糖苷含量是藥典規(guī)定的兩倍多;但河南西峽杜仲卻僅為藥典規(guī)定含量的40%;湖北兩個產(chǎn)地杜仲均未達到藥典規(guī)定。貴州、安徽杜仲與藥典規(guī)定較為接近。不同產(chǎn)地杜仲藥材中松脂醇二葡萄糖苷含量在0.04%～0.29%之間。

3 13批不同產(chǎn)地杜仲的紫外譜線組法鑒別

鑒于中藥以多組分、多靶點作用于病理性機體，發(fā)揮綜合治療和調(diào)理作用的特點，為評價杜仲多成分的整體質(zhì)量，對其進行了紫外譜線組［3］的測定。紫外譜線組法是從中醫(yī)用藥的整體觀出發(fā)，遵照物質(zhì)“相似相溶”原理，創(chuàng)立的多組分整體水平上控制中藥內(nèi)在質(zhì)量的一種方法。該方法采用指紋譜線組合技術(shù)測繪出水、無水乙醇、氯仿及石油醚4種不同極性溶媒對供試藥材提取液的紫外吸收曲線，并組成紫外譜線組，可反映供試品中多組分部分指紋圖譜特征。

3.1 供試液制備 分別取13批不同產(chǎn)地的杜仲生品，粉碎成絲團狀，均勻稱取4份（每份2.0 g）置100 mL錐形瓶中，精密加入水、無水乙醇、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）20 mL，超聲5 min過濾，制成原試液，濃度0.1 g/mL。根據(jù)吸收度測定需要稀釋供試液，稀釋倍數(shù)分別為:水溶液（200倍）、無水乙醇液（100倍）、乙酸乙酯液（50倍）、石油醚液（10倍）。用日立UV3010紫外分光光度計分別測定4種供試液從190～400 nm的紫外吸收曲線，并組成紫外譜線組。4種供試液最大吸收波長見表2。

表2 13批杜仲藥材紫外譜線組圖的峰位值

實驗表明，13個產(chǎn)地杜仲藥材的紫外譜線組基本一致，水提液最大吸收峰峰位值199（±2）nm，無水乙醇液202（±1）nm，乙酸乙酯液251（±1）nm，石油醚220（±1）nm，提示紫外譜線組可作為杜仲真?zhèn)舞b別的專屬性依據(jù)之一。四川萬源產(chǎn)杜仲紫外譜線組圖譜見圖1。

圖1 四川萬源產(chǎn)杜仲紫外譜線組圖譜

4 討論

4.1 實驗證明，供試杜仲藥材厚度均達不到《中國藥典》2005版要求，反映了杜仲生長年限短，質(zhì)量下降的現(xiàn)實。商品學意義上的杜仲等級分類已不復存在，國內(nèi)藥材市場流通的杜仲主為統(tǒng)貨，并有枝皮、嫩皮進入市場，質(zhì)量嚴重下降，應引起有關(guān)部門的關(guān)注。歷版《中國藥典》對杜仲性狀的描述均依據(jù)傳統(tǒng)藥材分級標準。建議對《中國藥典》杜仲性狀項進行必要的修訂，使其接近藥材實際。

4.2 由于杜仲含橡膠絲，飲片切制不適用于現(xiàn)行切藥機械，人工切制中，為節(jié)省成本，飲片規(guī)格多為3 cm×3 cm的塊片，體積為《中國藥典》2005版要求規(guī)格的9倍，不利于藥效成分的溶出。文獻報道，將其制成0.5 cm寬的橫絲片最有利于總成分的煎出［4］。因此規(guī)范杜仲飲片規(guī)格，有利于資源的合理利用，應引起人們足夠的重視。

4.3 13批杜仲藥材醇溶性浸出物含量均符合藥典規(guī)定，松脂醇二葡萄糖苷含量低于《中國藥典》要求者為30.8%，不同產(chǎn)地藥材中松脂醇二葡萄糖苷的含量與杜仲藥材性狀、厚度相關(guān)性不大，含量差異可能與采收后的產(chǎn)地加工方法和貯存條件有關(guān)。采收后的杜仲若不及時進行處理使酶失活，可導致貯藏過程中木質(zhì)素糖苷的含量降低。

4.4 松脂醇二葡萄糖苷是已知杜仲中具有降血壓功效的藥效成分，與其補肝腎、強筋骨的作用有無相關(guān)性目前尚無研究定論，因此，對杜仲藥材多成分、多層次的綜合整體特征分析，是研究杜仲藥材應關(guān)注的重點之一。本實驗對供試13批不同產(chǎn)地杜仲藥材進行了紫外譜線測定，證明了該方法在確定杜仲藥材特征方面的專屬性，杜仲藥材其它相關(guān)指紋圖譜方法的建立，正在進行中。

4.5 紫外譜線組法中，樣品的提取的規(guī)定溶劑為水、無水乙醇、氯仿、石油醚，因氯仿可以溶解杜仲膠，使提取液成為膠狀，無法過濾，實驗用與氯仿極性相近的乙酸乙酯代替。另外，紫外譜線組對樣品提取的常規(guī)方法為溫浸1～6 h，為縮短提取時間，借用超聲提取技術(shù)，分別測試了4種溶劑對供試飲片冷浸2 h、超聲提取5 min、對其吸收峰峰位值的影響。測定結(jié)果表明超聲提取5 min與冷浸2 h在峰位值、峰數(shù)目及峰形上無明顯差異，若做定性分析，超聲提取5 min即可，提取時間縮短為冷浸法的1/24，方便實用。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:114.

［2］王惠清.中藥材產(chǎn)銷［M］.成都:四川科技出版社，2007.

［3］袁久榮.中藥鑒別紫外譜線組法及應用［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999.

［4］李 川，江文君.不同炮制方法對杜仲總成分煎出率的影響［J］.中藥材，1989，12（2）:29.