頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定倍他米松磷酸鈉原料藥中3種有機(jī)溶劑殘留量

趙佳麗，章展煌，徐宏祥

（浙江嘉興市食品藥品檢驗(yàn)所，嘉興市 314001）

倍他米松磷酸鈉是一種腎上腺皮質(zhì)激素藥，為《中國藥典》2005年版[1]收載品種，其原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載殘留溶劑檢測項(xiàng)目，文獻(xiàn)也未見有關(guān)該原料藥有機(jī)溶劑殘留量檢測方法報道。為了提高本品質(zhì)量及用藥安全，筆者認(rèn)為應(yīng)制定殘留溶劑的檢驗(yàn)方法。有關(guān)殘留溶劑測定方法有直接進(jìn)樣法[2]和頂空進(jìn)樣法[3，4]等，筆者根據(jù)《中國藥典》2005年版二部殘留溶劑測定法[1]的要求，采用頂空進(jìn)樣法，建立了以正丙醇為內(nèi)標(biāo)的毛細(xì)管氣相色譜法測定倍他米松磷酸鈉中的3種有機(jī)溶劑殘留量的方法。結(jié)果表明，該方法簡單、靈敏、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

6890N毛細(xì)管氣相色譜儀，包括HP7694E頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測器（FID）、HP化學(xué)工作站（美國Aglient公司）；BP211D電子分析天平（北京賽多利斯有限公司）。

倍他米松磷酸鈉原料藥3批（批號：080305、080312、080316，含量：99.5%、98.9%、100.2%）為某藥廠提供；四氫呋喃、無水乙醇和正丙醇均為分析純；甲醇為色譜純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與色譜

色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細(xì)管柱（30 m×0.320 mm，0.25 μm）；固定液：聚乙二醇（分子量為20000）；柱溫：60 ℃；進(jìn)樣口溫度：180℃；FID檢測口溫度：250℃；氮?dú)饬魉伲?.0 mL·min－1；分流進(jìn)樣，分流比：10∶1；頂空溫度：80 ℃；平衡時間：30 min；進(jìn)樣時間：1.0 min。結(jié)果四氫呋喃、甲醇、乙醇與內(nèi)標(biāo)正丙醇的分離良好，各峰分離度均大于1.5。色譜詳見圖1。

2.2 測定方法

圖1 氣相色譜圖1.四氫呋喃；2.甲醇；3.乙醇；4.正丙醇Fig 1 GC chromatogram1.furanidine；2.methanol；3.ethanol；4.n-propanol

精密稱取正丙醇適量，用水稀釋制成2.24 mg·mL－1的溶液，作為內(nèi)標(biāo)貯備液；精密量取內(nèi)標(biāo)貯備液3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另精密稱取四氫呋喃71.8 mg、甲醇300.1 mg、無水乙醇496.6 mg，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液與內(nèi)標(biāo)貯備液各3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密量取5 mL，置于10 mL頂空取樣瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液；另精密稱取供試品0.3 g，置于10 mL頂空取樣瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5 mL，加蓋密封，振搖使溶解，作為供試品溶液。各取對照品溶液與供試品溶液于80℃加熱30 min，照《中國藥典》2005年版二部附錄殘留溶劑測定法[1]，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

2.3 線性范圍

精密量取上述對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)貯備液3 mL，加水至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置于10 mL頂空取樣瓶中，加蓋密封，依法測定。以對照品各峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比（Y）為縱坐標(biāo)，濃度X（mg·mL－1）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得四氫呋喃、甲醇和乙醇的回歸方程分別為Y＝25.30X+0.0352（r＝0.9993）、Y＝1.922X+0.0106（r＝0.9999）、Y＝3.936X+0.0119（r＝1.000），三者檢測濃度線性范圍分別為0.0144～0.0718、0.060～0.300、0.0993～0.497 mg·mL－1。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，重復(fù)測定6次，計(jì)算對照品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的平均比值，結(jié)果四氫呋喃、甲醇、乙醇分別為1.006、0.3602、1.1960；RSD分別為0.53%、0.30%、0.48%（n＝6），表明精密度良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對照品溶液，分別于0、2、4、6、8 h取樣測定，得各峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值無明顯差別，RSD＝0.20%，表明溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 最低定量限試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對照品貯備液，用水逐級稀釋成每1 mL中含四氫呋喃0.287、0.0144、0.0072 μg，甲醇0.730、0.365、0.182 μg和乙醇0.398、0.199、0.0995μg的3種不同濃度的混合溶液，依法測定，按S/N＝10計(jì)算最低定量濃度，結(jié)果四氫呋喃為0.0573μg·mL－1，甲醇為0.486 μg·mL－1，乙醇為0.145 μg·mL－1。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的樣品（批號為080305）0.3 g，共6份，置于10 mL頂空取樣瓶中，分別精密加入對照品溶液（精密量取“2.2”項(xiàng)下對照品貯備液和內(nèi)標(biāo)貯備液各3 mL，加水稀釋至50 mL）5 mL，加蓋密封，振搖使溶解，依法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，得回收率四氫呋喃為103.7%（RSD＝2.62%，n＝6）、甲醇為95.8%（RSD＝1.21%，n＝6）、乙醇為95.0%（RSD＝0.87%，n＝6）。

2.8 樣品中溶劑殘留量測定

精密稱取批號為080305、080312、080316的倍他米松磷酸鈉原料藥0.3 g，依法進(jìn)行測定。結(jié)果，3批均未檢出四氫呋喃；批號為080316樣品檢出甲醇?xì)埩袅繛?.062%；3批樣品中均檢出乙醇，殘留量分別為0.281%、0.301%、0.183%。

3 討論

溶劑的選擇：倍他米松磷酸鈉易溶于水，且被測溶劑四氫呋喃、甲醇和乙醇均與水混溶，故選擇水作溶劑。

內(nèi)標(biāo)物與色譜柱的選擇：由于四氫呋喃、甲醇和乙醇均為極性溶劑，根據(jù)“相似相溶”的原理，采用極性色譜柱可增加極性溶劑的保留值。筆者曾分別以丙酮、正丙醇作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行測試，結(jié)果，丙酮的保留時間與甲醇、乙醇較為接近，三者之間難分離；而正丙醇的保留時間較長，并通過適當(dāng)提高柱溫，改善了各組分的分離情況。表明內(nèi)標(biāo)物以正丙醇為好。

頂空平衡時間和溫度選擇：取對照品溶液3份，分別在70、80、85℃下加熱平衡30 min后進(jìn)樣測定。結(jié)果3種被測溶劑和內(nèi)標(biāo)正丙醇的峰面積均隨平衡溫度升高而增大；另取對照品溶液2份，分別在80℃加熱30、45 min后進(jìn)樣測定，結(jié)果在平衡30、45 min時測得3種被測溶劑和正丙醇的峰面積基本不變。故選擇加熱溫度為80℃，平衡時間為30 min。采用頂空進(jìn)樣法，除了能提高檢測靈敏度外，還可減少樣品對色譜柱的污染；同時降低頂空加熱溫度，可減少水氣對固定相聚乙二醇的影響，延長柱子使用壽命，且色譜系統(tǒng)穩(wěn)定。

溶劑限度的擬定：根據(jù)《中國藥典》2005年版二部的規(guī)定，四氫呋喃、甲醇為二類溶劑，限度分別為0.071%、0.3%；乙醇為三類溶劑，限度為0.5%。在此要求下，本研究中3批原料藥的有機(jī)溶劑殘留量均合格。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：621、附錄54.

[2]張 軍，孫會敏，李 科.氣相色譜法測定阿德福韋酯的10種殘留溶劑[J].藥物分析雜志，2005，25（6）：660.

[3]魏京京，張啟明，朱維華.毛細(xì)管氣相色譜測定27種常用有機(jī)溶劑[J].藥物分析雜志，2006，26（8）：1171.

[4]欒成章，祝 波，王尊文，等.頂空氣相色譜法測定夫西地酸中有機(jī)溶劑殘留量[J].中國藥房，2006，17（7）：535.