滴眼劑中幾種常用抑菌劑的兔眼刺激性實(shí)驗(yàn)

梁光江，王延?xùn)|，葉成添，唐細(xì)蘭

（中山大學(xué)中山眼科中心，廣州市 510060）

滴眼劑是指由藥物與適宜輔料制成的無(wú)菌水性或油性澄明溶液、混懸液或乳狀液，供滴眼用的液體制劑，也可以將藥物以粉末、顆粒、塊或片狀形式包裝，另備溶劑，在臨用前配成澄明溶液或混懸液[1]。為了保證滴眼劑的無(wú)菌性和防止滴眼劑發(fā)生微生物污染，可以往滴眼劑中添加抑菌劑或?qū)⒌窝蹌┲瞥刹缓志鷦┑膯蝿┝堪b滴眼劑。雖然近年來(lái)，不含抑菌劑的單劑量包裝滴眼劑被越來(lái)越多的廠家所開(kāi)發(fā)，但是基于藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)的考慮，多劑量、添加抑菌劑的可重復(fù)使用的滴眼劑仍然在滴眼劑中占據(jù)重大地位。但是，近年來(lái)有關(guān)滴眼劑中抑菌劑的刺激性反應(yīng)及對(duì)眼組織損害的報(bào)道[2]開(kāi)始不斷增多。有報(bào)道[3]指，對(duì)動(dòng)物眼給予含抑菌劑的滴眼劑后，有角膜上皮細(xì)胞的微小突起消失的異常情況出現(xiàn)。另有國(guó)外學(xué)者進(jìn)行了一項(xiàng)針對(duì)長(zhǎng)期使用抗青光眼眼用制劑的患者的實(shí)驗(yàn)[4]，實(shí)驗(yàn)分為使用含抑菌劑和不含抑菌劑2組，結(jié)果表明，使用含抑菌劑的患者，其眼睛發(fā)生疼痛、不適、流淚等眼部刺激性反應(yīng)的機(jī)率明顯比使用不含抑菌劑的患者高。本實(shí)驗(yàn)即通過(guò)觀察常用幾種抑菌劑單次給藥、多次給藥對(duì)兔眼的刺激性反應(yīng)，研究其刺激性，為滴眼劑的制劑處方設(shè)計(jì)中選擇合適的抑菌劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

成年新西蘭大白兔，體質(zhì)量2～3 kg，♀♂兼用，形體健康，無(wú)病理體征，經(jīng)檢查兩眼均屬正常，結(jié)膜無(wú)充血，角膜透明無(wú)上皮脫落及損傷，符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要求。由廣東省醫(yī)用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK（粵）2005-0058。

1.2 試藥

試藥0.03%羥苯乙酯、0.002%硫柳汞、0.01%氯己定（洗必泰）、2%硼酸、0.5%三氯叔丁醇、0.01%苯扎氯銨、0.01%苯扎溴銨、0.9%生理鹽水，均由中山大學(xué)中山眼科中心制劑室制備，規(guī)格：每支10 mL。

1.3 儀器

SL-7F型裂隙燈顯微鏡（日本Topcon公司）。

1.4 單次給藥刺激性實(shí)驗(yàn)

采用同體自身對(duì)照，每組選用家兔5只，實(shí)驗(yàn)前24 h內(nèi)在裂隙燈顯微鏡下對(duì)每只家兔作雙眼檢查（包括使用熒光素鈉檢查），并記錄角膜、虹膜及結(jié)膜情況。因?yàn)榈窝垡旱氖褂脛┝慷际?次2滴約0.1 mL左右，所以將試藥0.1 mL滴入左側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，右側(cè)用0.9%生理鹽水作對(duì)照，輕合眼瞼10 s，在給藥后的1、2、4、24、48、72 h觀察眼部情況，并按表1進(jìn)行眼刺激反應(yīng)評(píng)分。

1.5 多次給藥刺激性實(shí)驗(yàn)

采用同體自身對(duì)照，每組選用家兔5只，給藥方法及劑量與單次給藥相同，每天滴眼4次，每次間隔3 h，連續(xù)使用14 d，并在每日給藥前以及最后一次給藥后的1、2、4、24、48、72 h觀察眼部情況，并按表1進(jìn)行眼刺激反應(yīng)評(píng)分。

1.6 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

參照《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[5]課題研究組評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。在實(shí)驗(yàn)中，按表1的要求將每個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)每只家兔的眼角膜、虹膜、結(jié)膜和分泌物的刺激反應(yīng)分值相加得總積分，再將同組的積分總和除以觀察時(shí)間點(diǎn)數(shù)，即可得到其眼刺激性反應(yīng)的平均分值。并按表2判斷其刺激程度。

2 結(jié)果

表1 眼刺激反應(yīng)主分值標(biāo)準(zhǔn)Tab 1 Score standard of eyes stimulation response

表2 眼刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Tab 2 Evaluation standard of eyes stimulation response

2.1 單次給藥刺激性實(shí)驗(yàn)

各抑菌劑單次給藥后眼刺激性結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各抑菌劑單次給藥后眼刺激性結(jié)果Tab 3 Results of eyes stimulation response with single dose of bacterial inhibitors

由表3可見(jiàn)，單次給藥后，0.9%生理鹽水對(duì)照組眼刺激反應(yīng)平均分值均為0；0.002%硫柳汞在給藥組中眼刺激反應(yīng)平均分值最低，為0.20，其次為0.01%苯扎氯銨0.32、0.01%苯扎溴銨0.36、0.01%氯己定0.60、0.5%三氯叔丁醇1.20，0.03%羥苯乙酯和2%硼酸眼刺激反應(yīng)平均分值最高，分別為3.88和6.32。根據(jù)眼刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，除了2%硼酸和0.03%羥苯乙酯屬于輕度刺激性外，其余均屬于無(wú)刺激性。

2.2 多次給藥刺激性實(shí)驗(yàn)

各抑菌劑多次給藥后眼刺激性結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各抑菌劑多次給藥后眼刺激性結(jié)果Tab 4 Results of eyes stimulation response with multiple dose of bacterial inhibitors

由表4可見(jiàn)，多次給藥后，0.9%生理鹽水對(duì)照組眼刺激反應(yīng)平均分值均為0；在給藥組中，0.002%硫柳汞眼刺激反應(yīng)平均分值最低，為0.49，其次為0.01%苯扎氯銨0.79、0.01%苯扎溴銨0.84、0.01%氯己定3.83、0.5%三氯叔丁醇3.91，0.03%羥苯乙酯和2%硼酸眼刺激反應(yīng)平均分值最高，分別為6.51和10.84。根據(jù)眼刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，2%硼酸屬于中度刺激性，0.03%羥苯乙酯、0.01%氯己定和0.5%三氯叔丁醇屬于輕度刺激性，0.002%硫柳汞、0.01%苯扎氯銨、0.01%苯扎溴銨應(yīng)該屬于無(wú)刺激性。

3 討論

抑菌劑的濃度，筆者選用了滴眼劑在制備過(guò)程中比較常用的濃度。通過(guò)單次給藥、多次給藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不難看出，滴眼劑中常用幾種抑菌劑對(duì)眼睛的刺激性由小到大排列依次為硫柳汞、苯扎氯銨、苯扎溴銨、氯己定、三氯叔丁醇、羥苯乙酯、硼酸。多次給藥后，因?yàn)橛盟幋螖?shù)增多，所以眼刺激反應(yīng)平均分值明顯高于單次給藥組。這也和我院眼用制劑使用抑菌劑的實(shí)際情況基本相符。

硫柳汞屬于一種有機(jī)汞，長(zhǎng)期以來(lái)一直被廣泛用做生物制品及藥物制劑包括許多疫苗的防腐劑。它能抑制細(xì)菌的巰基酶系統(tǒng)，使細(xì)菌蛋白凝固，具有強(qiáng)烈的殺菌、抑菌作用，水中易溶（1∶1），作用強(qiáng)，在酸性溶液中有殺菌作用，在中性和堿性溶液中均有抑菌作用[6]。由于其使用濃度低，常用濃度為0.001%～0.002%，而且其水溶液pH值為6～8，與人正常淚液的pH值十分相近，因此一般對(duì)眼睛沒(méi)有刺激性。

苯扎氯銨、苯扎溴銨同為季銨鹽類殺菌劑，可使菌體蛋白或蛋白脂類凝固，阻止細(xì)胞的代謝，殺菌力強(qiáng)，因此廣泛用于表面消毒、防腐和去垢等。它們都極易溶于水，用作防腐劑時(shí)一般都使用低濃度溶液（常用濃度為0.01%），在本實(shí)驗(yàn)中單次給藥、多次給藥后的刺激性都比較小，僅次于硫柳汞，文獻(xiàn)報(bào)道[7]其對(duì)皮膚和黏膜的刺激性也比較小，是一種優(yōu)良的皮膚、黏膜用和眼用制劑防腐劑。

氯己定常用其醋酸鹽，具有相當(dāng)強(qiáng)的廣譜抑菌、殺菌作用，是一種毒性、腐蝕性和刺激性都低的安全消毒劑[8]。在所有的抑菌劑中抑菌效力最為突出，盡管其極難溶于水，但是使用濃度非常低，即使稀釋到微量也有很強(qiáng)的抑菌作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其單次給藥時(shí)無(wú)刺激性，而長(zhǎng)期使用則具有輕度刺激性。

三氯叔丁醇在堿性溶液中不穩(wěn)定，在酸性溶液中較穩(wěn)定，加熱能促進(jìn)其分解。另有報(bào)道[7]，三氯叔丁醇眼用可引起眼部刺激。在本實(shí)驗(yàn)中，其刺激性與氯己定相當(dāng)，也是單次給藥時(shí)無(wú)刺激性，長(zhǎng)期使用時(shí)才具有輕度刺激性。

羥苯乙酯主要作用于細(xì)胞膜及競(jìng)爭(zhēng)輔酶。在酸性環(huán)境中抑菌作用最好，但是其水溶性差，一般需要加熱溶解，但是加熱會(huì)令其酚基離解，pH值升高。在本實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)其刺激性偏大，單次給藥和多次給藥均具有輕度刺激性。

硼酸具有酸化、弱殺菌作用，但是由于其2%溶液pH值為4～6，且偏高滲、有收斂作用，故對(duì)眼睛刺激性較大，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，單次給藥時(shí)其已具有輕度刺激性，而多次長(zhǎng)期使用則有中度刺激性。

總的來(lái)說(shuō)，常用幾種抑菌劑的眼刺激性差異的原因主要是與各自的理化性質(zhì)有關(guān)，如水溶性、pH值、使用濃度等。硫柳汞、苯扎氯銨、苯扎溴銨以其高效、穩(wěn)定、低毒、低刺激性的特點(diǎn)，成為滴眼劑抑菌劑首選。而刺激性相對(duì)大的氯己定、三氯叔丁醇、羥苯乙酯則為次要選擇。硼酸因其刺激性較大，現(xiàn)已很少單獨(dú)作為抑菌劑來(lái)應(yīng)用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅠG.

[2]寧黎麗.眼用制劑研發(fā)過(guò)程中應(yīng)關(guān)注抑菌劑的合理使用和質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42（23）：1836.

[3]Sasaki H，Tei C，Yamamura K，et al.Effect of preservatives on systemic delivery of insulin by ocular instillation in rabbits[J].J Pharm Pharmacol，1994，46（11）：871.

[4]Pisella PJ，Pouliquen P，Baudouin C.Prevalence of ocular symptoms and signs with preserved and preservative free glaucom medication[J].Br J Ophthalmol，2002，86（4）：418.

[5]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究等16個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則的通知[EB/OL].http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0055/10368.html.2005-3-18.2009-2-9.

[6]莊 越.實(shí)用藥物制劑技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：346.

[7]侯惠民.藥用輔料應(yīng)用技術(shù)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2001：358、362～363.

[8]顧德鴻.醫(yī)用消毒學(xué)[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，1991：266.