復(fù)方金銀花對雛雞法氏囊強(qiáng)毒抑制效果觀察試驗(yàn)

馮善祥

（菏澤學(xué)院動物科學(xué)系，山東 菏澤 274000）

雞傳染性法氏囊?。↖BD）是雞的主要疫病之一[1]，常用抗血清和卵黃抗體治療[2]。由于制備、保存和運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)的影響，抗血清和卵黃抗體治療IBD往往存在效果不確定或有傳播其它疾病的危險[3]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品

1.1.1 供試藥品

金銀花復(fù)方制劑方由金銀花、連翹、黃連、梔子、黃芩、芍藥、玄參、浙貝母、桔梗、甘草10味中藥組成（均購于菏澤市藥材公司）。

1.1.2 對照藥品

1.1.2.1 中藥對照組

扶正解毒散，由板藍(lán)根、黃芩、淫羊藿三味中藥組成，功能、適應(yīng)癥與本品相似，按2005版《中國獸藥典》標(biāo)準(zhǔn)上用量為每只雞0.5～1.5 g（按每只雞1 g應(yīng)用）。

1.1.2.2 西藥對照組

利巴韋林，批號200509049，遼寧制藥總廠生產(chǎn)，用生理鹽水配成1%濃度的溶液備用。按常規(guī)劑量每1L水加利巴韋林0.1 g。

1.1.3 疫苗

法氏囊D78凍干疫苗，購自英特威公司，批號:B001AM01。

1.2 種毒

法氏囊標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒BC-6/85株，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，TCID50=105.5/0.1mL。

1.3 抗原與血清

法氏囊AGP診斷抗原與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清（AGP效價為1:128）購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.4 試驗(yàn)動物與分組

?

1日齡海蘭褐雛雞，在嚴(yán)格消毒環(huán)境下飼養(yǎng)2周，稱重，選擇體重、大小均勻一致、健康的雛雞240只，公母各半。按照公母各半簡化分層的方法，隨機(jī)分為8組（見表1），除疫苗對照組按法氏囊常規(guī)免疫程序免疫外，其他各組不免疫法氏囊疫苗，其它疫苗按常規(guī)免疫程序按時免疫、平時加強(qiáng)消毒，各組隔離飼養(yǎng)。除疫苗對照組外，各組在試驗(yàn)前抽血進(jìn)行法氏囊母源抗體AGP試驗(yàn)，抗體陰性后開始試驗(yàn)。除試驗(yàn)所需藥物外，飼料中不添加其他任何抗菌藥物和抗病毒藥物。

1.5 給藥方法

按照表1方法，疫苗對照組于14日齡按常規(guī)劑量滴口免疫法氏囊D78凍干苗，各受試藥物組和藥物對照組（中藥對照組、西藥對照組）從22日齡開始給藥，連用5 d。以0.01 mol·L-1（pH7.2）PBS緩沖液對IBDV強(qiáng)毒BC-6/85作1:100稀釋，除健康對照組外，各組于24日齡點(diǎn)眼、滴鼻攻毒，0.2mL/只。在試驗(yàn)期間，各組隔離飼養(yǎng)，所用的飼料、飲水和用具嚴(yán)格分開，避免交叉污染。

1.6 臨床觀察與記錄

感染后，每日3次觀察雞只的健康狀況、飲水、采食及糞便情況，記錄各組雞的發(fā)病和死亡情況，并對病死雞剖檢、進(jìn)行病理檢查。感染后第11天（即34日齡）結(jié)束試驗(yàn)，稱重（稱重前12h停飼停水），全部剖殺試驗(yàn)雞，進(jìn)行病理檢查、抗原檢測和法氏囊病變指數(shù)計算（法氏囊濕重（mg）/體重（g））。

1.7 判定標(biāo)準(zhǔn)與相關(guān)指標(biāo)的計算

1.7.1 保護(hù) 攻毒后，未出現(xiàn)臨床癥狀，精神、采食、飲水、糞便等未見異常；試驗(yàn)結(jié)束后剖檢未發(fā)現(xiàn)法氏囊眼觀病變，法氏囊等組織AGP檢測抗原陰性為受到保護(hù)。法氏囊眼觀病變和抗原AGP檢測有一項為陽性，則判斷為未受保護(hù)。

保護(hù)率=每組未發(fā)病雞數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.7.2 發(fā)病 精神沉郁、采食量減少、排白色水樣稀便，打堆、害冷。法氏囊有眼觀病變或AGP檢測法氏囊抗原為陽性。

發(fā)病率=每組發(fā)病雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.7.3 有效 未發(fā)病及有臨床癥狀但未死亡者為有效。

有效率=每組存活雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.7.4 死亡率 凡在試驗(yàn)期間，試驗(yàn)雞出現(xiàn)典型法氏囊病癥狀并死亡，尸檢發(fā)現(xiàn)法氏囊腫大或萎縮等典型病變，且法氏囊等組織AGP檢測陽性，判定為法氏囊病毒感染死亡，根據(jù)死亡數(shù)計算各組死亡率。

死亡率=每組死亡雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.8 血清學(xué)確診

取病死雞和試驗(yàn)結(jié)束后的剖殺雞的法氏囊、胸腺和脾臟，磨碎，反復(fù)凍融，浸出液作為抗原，與法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陽性血清作瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，24～72 h觀察，出現(xiàn)明顯的沉淀線，即確診為試驗(yàn)雞感染IBDV。

1.9 數(shù)據(jù)分析 將各組的試驗(yàn)數(shù)據(jù)以X2檢驗(yàn)及方差分析進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀與病理變化

2.1.1 臨床癥狀 試驗(yàn)雞攻毒48 h后陸續(xù)發(fā)病，陰性對照組第4天開始死亡，死亡高峰集中出現(xiàn)在接種后5～7 d之間，以后逐漸減少，第9天不再死亡。主要癥狀為精神沉郁，羽毛逆立無光澤，縮頸垂羽、排白色水狀糞便，食欲嚴(yán)重下降或廢絕。在此期間大部分發(fā)病雞因脫水、消瘦而死亡。而健康對照組雞在精神、食欲、活動、糞便等方面均未見異常，其他各組也分別有不同程度的發(fā)病率和死亡率，但癥狀較陰性對照組輕，病變也不典型。

2.1.2 病理變化 陰性對照組最嚴(yán)重，病死雞出現(xiàn)典型的法氏囊病病變，雞體嚴(yán)重脫水，法氏囊腫大，部分雞只法氏囊外觀呈紫葡萄狀，漿膜面可見淡黃色膠凍樣水腫液，黏膜出血，有乳白色滲出物，胸腿肌有出血斑或出血條紋，腺胃和肌胃交界處有出血斑，腎臟腫大，有尿酸鹽沉積，呈花斑腎病變。脾、盲腸扁桃體腫大。其他各試驗(yàn)組發(fā)病雞病程較長，癥狀沒有陰性對照組典型，可見法氏囊腫或萎縮，內(nèi)有干絡(luò)樣滲出物，機(jī)體嚴(yán)重脫水，腎臟有尿酸鹽沉積，其他器官病變不明顯。剖殺健康對照組雞，各組織器官未見異常。

2.2 金銀花復(fù)方制劑抑制IBD強(qiáng)毒感染的結(jié)果 結(jié)果（表2）表明，西藥對照組與中藥對照組相比在有效率、保護(hù)率上差異均不顯著（p>0.05）；金銀花復(fù)方高、中劑量組與藥物對照組（西藥對照組及中藥對照組）相比在有效率和保護(hù)率上差異顯著（p<0.05）；金銀花復(fù)方制劑高、中劑量組與疫苗對照組在各項指標(biāo)上差異都不顯著（p>0.05），但藥物中劑量組在保護(hù)率上略遜于疫苗對照組，而藥物高、中劑量組在有效率方面略好于疫苗對照組。

2.3 法氏囊組織中的抗原檢測 結(jié)果（表3）表明，在保護(hù)率方面藥物高、中劑量組與疫苗對照組間差異不顯著（p>0.05），金銀花復(fù)方制劑高劑組、疫苗對照組顯著高于低劑量組、藥物對照組（p<0.05），而中劑量組顯著高于低劑量組和藥物對照組（p<0.05）；中藥對照組與西藥對照組間差異不顯著（P>0.05）。

?

?

2.4 法氏囊病變指數(shù) 剩余成活雞的法氏囊病變指數(shù)結(jié)果（表4）表明:金銀花復(fù)方制劑各組對法氏囊有不同程度的保護(hù)作用，與陰性對照組、疫苗對照組相比差異顯著（p<0.05），疫苗對照組又與陰性對照組差異顯著（p<0.05），說明疫苗免疫雖然可以在一定程度上抵御法氏囊強(qiáng)毒的攻擊，但強(qiáng)毒本身對法氏囊也有一定程度的損傷。金銀花復(fù)方制劑高、中劑量組與藥物低劑量組、藥物對照組差異顯著（p<0.05），此結(jié)果說明隨著金銀花復(fù)方制劑劑量的增加，其抗病毒作用增強(qiáng)，對法氏囊的保護(hù)作用越來越明顯。金銀花復(fù)方制劑高、中劑量組與健康對照組間差異不顯著（p>0.05），表明金銀花復(fù)方制劑中等劑量即可提供足夠的抗病毒作用。

?

3 討論與結(jié)論

3.1 法氏囊病毒感染雞后，主要損害法氏囊等免疫器官，使B淋巴細(xì)胞缺失，導(dǎo)致免疫抑制，使雞對多種病原易感性增加和對多種疫苗免疫應(yīng)答下降[4]。金銀花復(fù)方制劑中的金銀花、連翹、黃芩可增加動物體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，刺激T、B淋巴細(xì)胞的功能，誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，從而起到抗病毒和抑菌的作用；桔梗能激活巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞，增強(qiáng)免疫功能；甘草具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的作用，且體外增強(qiáng)作用隨劑量的增加而增加[5]。因此，本試驗(yàn)所用金銀花復(fù)方制劑可以明顯的減弱IBDV強(qiáng)毒對雛雞法氏囊等免疫器官的損害，對法氏囊強(qiáng)毒感染雛雞具有明顯的保護(hù)作用[6]。

3.2 根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，法氏囊病屬熱毒侵襲所致。熱為陽邪，易傷陰液，故表現(xiàn)飲欲增加；由于熱入血分，迫血妄行，致使肌肉等處出血，又因熱邪化火生風(fēng)，風(fēng)助火勢，上擾神明，故病雞昏睡，精神不振；熱毒耗灼腎陰，故見腎石；熱毒易耗津傷血，從而導(dǎo)致本源枯竭，故發(fā)病急，死亡快。防治該病應(yīng)以清熱解毒、燥濕止瀉、涼血生津、瀉火為主，該方中金銀花、黃連、連翹以清熱解毒、殺菌消炎為主，黃芩、桔梗、梔子可清熱涼血、瀉火解毒、宣肺排膿、止咳平喘，而甘草起調(diào)和諸藥，增加藥效的作用[7]。本試驗(yàn)研究表明金銀花復(fù)方制劑可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，降低法氏囊強(qiáng)毒感染雛雞的發(fā)病率和死亡率，有很強(qiáng)的保護(hù)作用。

3.3 用疫苗預(yù)防法氏囊病效果較好，但由于病毒變異和超強(qiáng)毒的存在，免疫失敗時有發(fā)生，法氏囊卵黃抗體與抗血清對法氏囊病療效確切，但也存在著血清型不符和外來病原污染等問題，而中藥由于安全、綠色、作用機(jī)制獨(dú)特，作用廣泛，在病毒病防治上具有特有的優(yōu)勢，在病毒性疾病多發(fā)季節(jié)或易感日齡進(jìn)行預(yù)防性投藥和在發(fā)生疾病時進(jìn)行治療可以降低死亡率，減少經(jīng)濟(jì)損失，而發(fā)生免疫失敗時用疫苗緊急接種幾乎不能取得較好的效果，這時用抗病毒中藥不失為一種較好的補(bǔ)救措施。本試驗(yàn)表明，金銀花復(fù)方制劑高、中劑量組無論在保護(hù)率，還是在有效率方面都優(yōu)于藥物對照組和藥物低劑量組，與疫苗對照組相當(dāng)，且對法氏囊強(qiáng)毒感染引起的法氏囊萎縮具有一定保護(hù)作用，用于雞傳染性法氏囊病的預(yù)防具有明顯效果，建議臨床使用劑量和方法為:混飼，每只雞1g，連用5d。

[1]何秀苗，陽秀英，韋平.傳染性法氏囊病及其病原分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（2）:48-51.

[2]黃宇翔，李洪彬，劉力威，等.傳染性法氏囊?。↖BD）防治試驗(yàn)研究—1復(fù)方中草藥煎劑及卵黃抗體防治效果比較 [J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2006（2）:11-13.

[3]王尚榮.不同中草藥組方對人工感染雞傳染性法氏囊病的療效觀察[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（3）:151-157.

[4]劉玉鋒，余銳萍，李慧姣，等.IBDV強(qiáng)毒株感染SPF雞后法氏囊淋巴細(xì)胞的凋亡及調(diào)控機(jī)制[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，9（3）:45-48.

[5]侯玉慧，杜愛芳，胡松華.復(fù)方黃芩對雛雞免疫功能的增強(qiáng)作用[J].中國獸醫(yī)雜志，2006，42（3）:31-32.

[6]張玉楊，肖治軍，郭成留，等.IBD細(xì)胞適應(yīng)毒對雞法氏囊重與體重比值的影響 [J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（12）:91-92.

[7]張麗云，吉淑娟.瘟囊克注射液對人工感染傳染性法氏囊病和雞新城疫的療效試驗(yàn)[J].河北北方學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版，2007，23（3）:35-38.