算盤子提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

黃愛軍

恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)

算盤子(Glochidionpuberum)是大戟科(Euphorbiaceae)算盤子屬(Glochidion)植物，俗名野南瓜、柿子椒、小孩拳等。全草可入藥，味苦、澀，性涼；有清熱利濕、祛風(fēng)活絡(luò)的功能；用于治療痢疾、腸炎等疾病[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，從該屬植物中分離得到的化學(xué)成分有生物堿類、三萜類、黃酮類、甾體類、環(huán)丁烯內(nèi)脂類、木脂素類、酚酸類等。藥理研究該屬植物具有抗菌消炎、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用[2]。本實(shí)驗(yàn)采用角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎實(shí)驗(yàn)，觀察算盤子提取物的抗炎作用，并檢測炎癥局部組織中組胺含量，以進(jìn)一步了解算盤子抗炎機(jī)制；通過熱刺激小鼠疼痛實(shí)驗(yàn)觀察算盤子提取物的鎮(zhèn)痛作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 算盤子提取物 取干燥算盤子根適量，粉碎后用80%的乙醇加熱回流提取三次，合并三次濾液并濃縮至2 g/ml備用。

1.1.2 試劑與儀器 阿司匹林片，批號：060807，舒泰神(北京)藥業(yè)有限公司；角叉菜膠，批號：110H3367，Sigma公司生產(chǎn)，臨用前以生理鹽水配成1%的濃度；磷酸組胺，臨用前以生理鹽水配制成0.2 μg/ml組胺標(biāo)準(zhǔn)液備；過氯酸，青島正業(yè)試劑儀器有限公司；GJ一8402型熱板測痛儀，深圳瑞沃德生命科技公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取清潔級SD大鼠，雄性，體重160～180 g；清潔級昆明種小鼠，雌性，體重18～22 g，均由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn) 按文獻(xiàn)[3]將大鼠隨機(jī)分為6組，即對照組，算盤子提取物大、中、小劑量組，模型組和阿司匹林組，每組10只。算盤子提取物大、中、小劑量組分別灌服4.8、2.4、1.2 g/kg濃度 (按體表面積計(jì)，分別相當(dāng)于人用等效劑量的4倍、2倍和1倍)的算盤子提取物，阿司匹林組灌服阿司匹林0.2 g/kg，對照組和模型組灌胃等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃8 d。于末次灌胃前，先測量各組大鼠足跖周長，灌胃后1 h于大鼠右后足跖皮下注入1%角叉菜膠0.1 ml/只致炎，致炎后的2、4、6 h分別測定大鼠右足跖周長，計(jì)算腫脹度值(腫脹度值=致炎后足跖周長-致炎前足跖周長)。

1.2.2 炎癥組織中組胺含量的測定 待測完大鼠足跖周長6 h后，將大鼠斷頸椎處死，于踝關(guān)節(jié)上方0.5 cm處將致炎腫脹足剪下，蒸餾水洗凈泥沙，拭盡水液待測。對照組大鼠取相同側(cè)關(guān)節(jié)按同樣方法取標(biāo)本測定。將炎足剪碎稱重，按重量體積加入9倍體積容量的0.4 mol/L的過氯酸中，用高倍勻漿機(jī)勻漿，放置1 h后，離心。按文獻(xiàn)[4]方法測定足組織浸泡液中OD值并計(jì)算組胺含量。組胺含量(μg/ml)=(T樣本-T樣本空白)/(T標(biāo)準(zhǔn)-T標(biāo)準(zhǔn)空白)×0.2×1/組織重量(g)。

1.2.3 熱刺激小鼠疼痛實(shí)驗(yàn) 篩選合格小鼠：熱板溫度恒定在(55+0.5)℃10 min后，取小鼠進(jìn)行篩選，凡舔后足時(shí)間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用。選合格小鼠50只，隨機(jī)分為算盤子提取物大、中、小劑量組，對照組和阿司匹林組。每組10只，測其正常痛閾值，作為該鼠給藥前痛閾值。算盤子提取物大、中、小劑量組分別灌服4.8、2.4、1.2 g/kg濃度的算盤子提取物，按小鼠體重1 ml/100 g計(jì)算灌胃藥液量，阿司匹林組灌服阿司匹林0.2 g/kg，對照組灌胃等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃8 d。末次給藥后30、60、90 min分別測定小鼠痛閾值。

2 結(jié)果

2.1對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響算盤子提取物大、中兩個(gè)劑量組能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎后的2、4、6 h腫脹，小劑量組能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎后的4、6 h腫脹，其腫脹率明顯低于模型組；與阿司匹林組比較，算盤子提取物各個(gè)劑量組均無差異性(P>0.05)。結(jié)果見表1。

表1 算盤子提取物對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響

2.2對大鼠炎癥組織液中組胺含量的影響算盤子提取物大、中、小三個(gè)劑量組均能明顯降低大鼠炎癥組織液中組胺含量，與模型組比較差異顯著(P<0.05或P<0.01)；與阿司匹林組比較，算盤子提取物各劑量組均無顯著性差異。結(jié)果見表2。

2.3對熱刺激小鼠疼痛反應(yīng)的影響算盤子提取物大、中兩個(gè)劑量組能明顯提高熱刺激小鼠給藥后30、60、90 min的痛閾值，小劑量組能明顯提高熱刺激小鼠給藥后60、90 min的痛閾值，與阿司匹林組比較，算盤子提取物各劑量均無明顯差異。結(jié)果見表3。

表2 算盤子提取物對大鼠炎癥組織液中組胺含量的影響

3 討論

炎癥是指具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛[6]。炎癥是機(jī)體常見而又重要的基本病理過程，在炎癥早期，血管受到刺激，血管內(nèi)皮間隙擴(kuò)大，血管壁通透性增強(qiáng)，白細(xì)胞和蛋白質(zhì)等滲出到組織間隙，造成組織腫脹。因此，腫脹是炎癥早期的重要指標(biāo)。在炎癥晚期和慢性炎癥期，由于內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和實(shí)質(zhì)細(xì)胞等增生，形成肉芽組織增生。本文采用炎癥腫脹模型觀察了算盤子提取物對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響，在本實(shí)驗(yàn)劑量下，算盤子提取物能對炎癥早期的組織腫脹有顯著的抑制作用。

表3 算盤子提取物對熱刺激小鼠疼痛反應(yīng)的影響

組胺是自體活性物質(zhì)之一， 在體內(nèi)由組氨酸脫羧基而成，以皮膚、支氣管黏膜、腸黏膜和神經(jīng)系統(tǒng)中含量較多[5]。當(dāng)機(jī)體受到理化刺激或發(fā)生過敏反應(yīng)時(shí)，可導(dǎo)致組胺釋放，與組胺受體結(jié)合而產(chǎn)生生物效應(yīng)，成為機(jī)體在炎癥狀態(tài)下的致炎和致痛炎癥介質(zhì)，并能導(dǎo)致疼痛的產(chǎn)生，加重炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在檢測大鼠炎癥組織液中組胺含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)算盤子提取物大、中、小三個(gè)劑量組均能明顯降低大鼠炎癥組織液中組胺水平，提示算盤子提取物的消炎作用可能與降低炎癥部位組胺含量有關(guān)。

疼痛是由于痛覺感受器受到刺激而產(chǎn)生興奮，沖動(dòng)經(jīng)傳入神經(jīng)纖維到達(dá)大腦某些神經(jīng)細(xì)胞， 或中樞通路的某一水平受損時(shí)所產(chǎn)生的一種不舒適的感覺。引起疼痛的原因眾多，本文采用熱刺激致痛法觀察到， 算盤子提取物對熱刺激引起的疼痛可明顯地延長反應(yīng)潛伏期。

本研究采用抗炎和鎮(zhèn)痛模型證實(shí)了算盤子提取物有很好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，并且發(fā)揮藥效時(shí)間短，作用持續(xù)時(shí)間長，存在一定的劑量效應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)對算盤子提取物僅采用80%的乙醇加熱回流三次的傳統(tǒng)方法，故在以后的工作中擬對算盤子提取物、有效部位和化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化和鑒定，確定算盤子抗炎、 鎮(zhèn)痛的有效成分， 進(jìn)一步探討其抗炎、 鎮(zhèn)痛機(jī)制及其在體內(nèi)的代謝規(guī)律，為算盤子的進(jìn)一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

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