益氣活血軟堅解毒方對荷瘤小鼠抑瘤作用及對生存期影響研究*

李東濤，吳志奎，呂新霞，陳玉英，裴迎霞，祁 鑫，孫桂芝

（1.濟南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院中醫(yī)科，青島 266071；2.中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院腫瘤科，北京 100053）

益氣活血軟堅解毒方對荷瘤小鼠抑瘤作用及對生存期影響研究*

李東濤1，吳志奎2，呂新霞2，陳玉英2，裴迎霞2，祁 鑫2，孫桂芝2

（1.濟南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院中醫(yī)科，青島 266071；2.中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院腫瘤科，北京 100053）

［目的］研究益氣活血軟堅解毒（YHRJ）方對荷瘤小鼠生存期的影響。［方法］抑瘤作用觀察：荷S180腹水瘤昆明鼠、荷H22昆明鼠與615小鼠，造模后隨機分成對照組、CTX（環(huán)磷酰胺）組、YHRJ等效劑量組、YHRJ高劑量組、YHRJ等效劑量組+CTX或順鉑（DDP）組、YHRJ高劑量組+CTX（或DDP）組，第2天開始用藥，于第13天拉頸處死動物，取出瘤組織，稱質量。生存期觀察：荷H22昆明鼠，截尾期為對照組出現第1只動物死亡為止，記錄小鼠存活時間。［結果］1）對荷S180昆明鼠：各用藥組腫瘤明顯縮小，YHRJ高劑量抑制率為64.22%，與生理鹽水及YHRJ等效劑量組相比，差異顯著；YHRJ高劑量+CTX組抑制率為80.10%，高于YHRJ等效劑量組及CTX組。2）對荷H22昆明鼠：除YHRJ等效劑量組外，其余各組抑瘤率均超過30%，抑瘤作用明顯（P<0.05），YHRJ高劑量組抑瘤率為51.36%。優(yōu)于其他各組。3）對荷H22615小鼠腫瘤：YHRJ等效劑量抑瘤率為47.15%，YHRJ高劑量+DDP組抑瘤率為80.60%，說明中藥對DDP有增效作用。4）對荷H22昆明鼠生存率影響：YHRJ高劑量組及各加DDP組荷瘤小鼠生存期及中位生存天數明顯延長，生存率明顯提高有統(tǒng)計學意義。［結論］益氣活血軟堅解毒方對小鼠S180腹水瘤、H22肝細胞癌腫瘤生長有抑制作用，并明顯延長荷H22昆明鼠生存期。

益氣活血軟堅解毒方；肝癌；抑瘤率；生存期；實驗研究

肝癌的治療歷來是中醫(yī)學研究的重點與難點。孫桂芝教授經過數十年的潛心研究，根據傳統(tǒng)中醫(yī)理論，從中醫(yī)整體觀出發(fā)，針對肝癌的病因病機擬訂了益氣活血軟堅解毒(抗癌)方，注重調動機體的抗病能力，調理氣血，培補臟器，協同化療，增效減毒，長期服用，有穩(wěn)定瘤體及減少腫瘤轉移和復發(fā)作用。為了深入研究其作用機制，本課題從體內抑瘤實驗及對生存期影響兩個方面研究其作用效果。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明鼠120只，雄性，體質量（20±1）g，二級動物，購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所。615小鼠 60 只，雄性，體質量（18±2）g，購自中國藥物及生制品檢定所，清潔級。

1.2 瘤株 小鼠S180腹水瘤株與H22肝癌瘤株，由廣安門醫(yī)院腫瘤實驗室提供。

1.3 藥物 益氣活血軟堅解毒（YHRJ）方水煎劑：組方為生黃芪、炒白術、三七、水紅花子、藤梨根、凌霄花、炮山甲、白花蛇舌草等，常規(guī)水提取，生藥濃度3.4 kg/L，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

陽性對照藥環(huán)磷酰胺（CTX）：南通精華制藥有限公司產品，用生理鹽水配成4 g/L的溶液，遮光保存。

陽性對照藥順鉑（DDP）：山東齊魯制藥廠產品，用生理鹽水配成0.1 g/L的溶液，遮光保存。

1.4 動物模型制備 S180腹水瘤：取生長狀態(tài)良好接種第7天的荷S180腹水瘤源小鼠，拉頸處死，在嚴格無菌條件下吸出腹水，生理鹽水洗滌，配成1×1010個/L單細胞懸液，在每只昆明鼠右腋部皮下接種0.2mL。H22肝癌：取生長狀態(tài)良好接種第7天的荷H22肝癌源小鼠，拉頸處死，在嚴格無菌條件下取出瘤組織，除去血塊及壞死組織，用機械剪碎法做成1×1010/L單細胞懸液，在每只昆明鼠或615小鼠右腋部皮下接種0.2mL。

1.5 分組及用藥 對荷S180昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察分組及用藥方法：造模后隨機分成6組，每組10只。1）對照組：每日灌服生理鹽水0.2mL。2）CTX組：按照80mg/kg劑量給小鼠腹腔注射，分2次，1周用完，以下各加用CTX者用法與此同。3）YHRJ等效劑量組（29.67 g/k g，約為人用量的10倍劑量）。4）YHRJ高劑量組（約為人用量的20倍劑量）。5）YHRJ等效劑量組+CTX組。6）YHRJ高劑量組+CTX組。

對荷H22昆明鼠與615小鼠腫瘤生長抑制作用觀察分組與用藥方法：造模后隨機分成6組，每組10 只。1）對照組：每日灌服生理鹽水 0.2mL。2）DDP組：按照lmg/kg劑量給小鼠腹腔注射0.2mLDDP，1 次/d，連用7 d。3）YHRJ等效劑量組（29.67 g/k g，約為人用量的10倍劑量）。4）YHRJ高劑量組（人用量的20倍劑量）。5）YHRJ等效劑量組+DDP組。6）YHRJ高劑量組+DDP組。

對生存期影響分組與用藥方法：與荷H22昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察同。

1.6 實驗周期 抑瘤率觀察：造模第2天開始用藥，于第13天拉頸處死動物，取出瘤組織，稱質量。

生存期觀察：造模第2天開始用藥，模型組和YHRJ組給藥直至對照組出現第一只動物死亡為止。記錄小鼠存活時間，計算各組平均生存時間和中位生存時間，按下列公式計算生命延長率：生命延長率=（治療組平均生存天數-模型組平均生存天數）/模型組平均生存天數×100%

1.7 統(tǒng)計方法 抑瘤率統(tǒng)計用SPSS10.0軟件對不同組別的數據進行多組之間比較方差分析。生存期統(tǒng)計用SPSS10.0進行Kaplan-Meier生存分析。

2 結果

2.1 益氣活血軟堅解毒方對荷S180昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察 見表1。

表1 益氣活血軟堅解毒方對荷S180昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

表1 益氣活血軟堅解毒方對荷S180昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

注：與生理鹽水組比較，*P<0.001;與YHRJ等效劑量組比較，▲P<0.05，#P<0.001。

組別生理鹽水組YHRJ等效劑量組YHRJ高劑量組YHRJ等效劑量+CTX組YHRJ高劑量+CTX組CTX組n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤質量（g）2.421±0.923 1.397±0.457*0.865±0.542*▲0.489±0.185*#0.482±0.186*#0.682±0.294*▲

結果顯示，與生理鹽水組比較，各用藥組腫瘤明顯縮小，YHRJ高劑量抑制率為64.22%，與生理鹽水及YHRJ等效劑量組相比，差異顯著YHRJ高劑量+CTX組抑制率為80.10%，高于YHRJ等效劑量組及CTX組。說明益氣活血軟堅解毒方有抑制荷S180昆明鼠腫瘤生長作用。

2.2 益氣活血軟堅解毒方對荷H22昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察 見表2。

表2 益氣活血軟堅解毒方對荷H22昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

表2 益氣活血軟堅解毒方對荷H22昆明鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

注：與對照組比較，*P＜0.05；＃P＜0.01。

組別生理鹽水組YHRJ等效劑量組YHRJ等效劑量組+DDP組YHRJ高劑量組YHRJ高劑量組+DDP組DDP組n 抑瘤率(%)13.83 34.34 51.36 38.19 41.86 10 10 10 10 10 10瘤質量（g）1.063±0.394 0.916±0.442 0.698±0.371*0.571±0.340#0.724±0.393*0.685±0.375*

結果顯示，除YHRJ等效劑量組外，其余各組抑瘤率均超過30%，抑瘤作用明顯，差顯顯著（P<0.05），YHRJ高劑量組抑瘤率為51.36%，優(yōu)于其他各組。說明益氣活血軟堅解毒中藥有抑制荷H22昆明鼠腫瘤生長抑制作用。

2.3 益氣活血軟堅解毒方對荷H22615小鼠腫瘤生長抑制作用觀察 見表3。

表3 益氣活血軟堅解毒方對荷H22 615小鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

表3 益氣活血軟堅解毒方對荷H22 615小鼠腫瘤生長抑制作用觀察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

注：與對照組比較，*P<0.001。

組別NS組YHRJ等效劑量組YHRJ等效劑量組+DDP組YHRJ高劑量組YHRJ高劑量組+DDP組DDP組n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤質量（g）1.035±0.221 0.547±0.311*0.355±0.250*▲0.596±0.235*#0.237±0.206*#0.413±0.202*▲

結果顯示：與對照組比較，各用藥組均有明顯抑制腫瘤生長作用，差異顯著（P<0.001），YHRJ等效劑量抑瘤率為47.15%，YHRJ高劑量+DDP組抑瘤率80.60%，說明中藥對DDP有增效作用。

2.4 益氣活血軟堅解毒方對荷H22昆明鼠生存期影響 見表4。結果顯示，與對照組相比，YHRJ高劑量組與各加DDP組荷瘤小鼠生存期及中位生存天數明顯延長，生存率明顯提高，以YHRJ高劑量+DDP組效果最為明顯，經統(tǒng)計分析具有顯著差異。

3 討論

中藥復方研究是中藥藥理研究的難點。但中藥復方的整體協同作用優(yōu)勢又是單體所無法替代的。孫桂芝教授臨床常用益氣活血軟堅解毒方為主治療肝癌，藥物組成主要有黃芪、白術、三七、水紅花子、炮山甲、藤梨根、白花蛇舌草等。其中黃芪、白術健脾益氣。黃芪多糖促進免疫細胞數量增長活性增強的藥理作用已為眾多研究實驗所證實[1]。白術可提高巨噬細胞的活性，調節(jié)淋巴細胞增殖功能，增強人體非特異性免疫功能,抑制癌細胞的生長，促進胃腸運動等作用[2-3]。田三七、水紅花子、炮山甲活血軟堅能降低血液黏度與止痛，對肝癌患者伴有的肝硬化也有較好調理作用[4-7]。藤梨根、白花舌蛇草解毒抗癌[8]。白花蛇舌草體外誘導人肝癌HEPG2細胞凋亡的作用[9]。通過實驗證明，以上述藥物組成的益氣活血軟堅解毒方對小鼠S180腹水瘤、H22肝細胞癌腫瘤生長有一定的抑制作用，與化療結合有增效作用，并具有明顯延長荷H22昆明鼠生存期作用。從實驗數據看，雖然中藥殺滅腫瘤的效力不及化療藥物，但其多靶點的綜合作用，保證了藥物長時間的持續(xù)發(fā)揮效力，延長帶瘤生存時間，改善了生存質量。從而證實了益氣活血軟堅解毒法在肝癌治療中的正確性與肝癌治療中堅持綜合治療的價值所在。

表4 益氣活血軟堅解毒方對荷H22昆明鼠生存率影響觀察Tab.4 Observation on the influence on survivalperiod

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Effectof YiqiHuoxue Ruanjian and Jiedu prescriptionson inhibition of tumor grow th and survivalperiod in tumor-bearingm ice

LIDong-tao1,Wu Zhi-kui1,LV Xin-xia2,etal
（1.Departmentof TraditionalChineseMedicine， Qingdao FirstSanatorium of Jinan Military Region， Qingdao 266071， China；2.Guanganmen HospitalofChinese Science Academy of TCM，Beijing100053 ，China）

[Objective]To study the inhibitory effecton growth of tumorand observe the influence on survivalperiod by using the decoction of YiqiHuoxue Ruanjian Jiedu(YHRJdecoction)in treating the transplanted carcinoma(S180and H22)inmice.[Methods]Themice transplanted with carcinoma(S180or H22)were random ly divided into six groups,including NScontrolgroup,CTX or DDPgroup,YHRJequivalent-dose group,YHRJhigh-dose group,YHRJequivalent-dose plus CTX(orDDP)group,YHRJhigh-dose plus CTX(or DDP)group.All themice in each group were administered from second day,and killed on the thirteenth day.At the same time the carcinomawas cut down and weighed.Observation of the survival time on KunmingMicewhich was transplanted with H22 carcinomawasended tillany one mice died in controlgroup.[Results]In the kunmingmodelmice(S180)theweightofcarcinoma in allmedication groupswas lower comparedwith NScontrolgroup.The inhibition rateof YHRJhigh-dosegroupwas64.22%,and therewasa significantdifferencewhen comparingwith NScontrolgroup and YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose plus CTX group was80.10%,better than YHRJequivalent-dose group and CTX(or DDP)group.In kunmingmodelmice(H22)the inhibition rate in allmedications groups washigher than 30%except for YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose group was 51.36%,whichwashigher than othergroups.In themodelmice(H22615)the inhibition rate of YHRJequivalent-dose group was 47.15%and thatof YHRJhighdose plusDDPgroup was80.60%.It indicated thatChinese herb could reinforce the curative effect.Observation of the influence on survivalperiod showed that the survival time and themean survival time in YHRJhigh-dose group and the groups added by DDPwere prolonged.The survival ratewasenhanced.[Conclusion]Itwasproved that the YHRJdecoction could inhibit the growth of transplanted carcinoma(S180orH22)inmice,and could prolong the survival time ofkunmingmodelmice.

YHRJdecoction;hepatocellular;carcinoma;survival time;experimental research

R285.5

A

1672-1519(2010)02-0141-03

國家科技計劃資助項目（C03050402）。

李東濤（1966－），男，博士后，副主任醫(yī)師，主要研究方向為中醫(yī)腫瘤臨床與基礎。

2009-11-13）