鹽酸特比奈芬軟膏含量反相HPLC法測定

王思斯 朱玲 楊云霞

(四川大學(xué)基礎(chǔ)與法醫(yī)學(xué)院藥理教研室,四川 成都 610041)

特比萘芬是一種丙烯酮類廣譜、高效抗真菌藥。具有抑菌和殺菌作用,其作用機(jī)制為選擇性抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化酶,使真菌細(xì)胞膜形成受阻,起到抑菌的作用。本文用反相HPLC方法測定其軟膏的含量,以檢測其質(zhì)量穩(wěn)定性等指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Water 1525型高效液相色譜儀;Water 2487型雙波長紫外檢測器;Water 2487型自動(dòng)進(jìn)樣器。乙晴ACN(色譜純,Korea SK);異丙醇、磷酸二氫鉀均為分析純,鹽酸特比奈芬對(duì)照品(Pharmcia),鹽酸特比奈芬軟膏：每 g含量為 10mg。

1.2 樣品含量測定方法

1.2.1 樣品含量測定色譜條件 色譜柱：Capcell-pak C18(5μ m,4.6×150mm,Shiseido);流動(dòng)相 ：0.05M KH2PO4/乙晴=(30/70);檢測波長為 225nm;進(jìn)樣量 10μ l;流速 1.0ml?min-1;柱溫 25℃。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 精密稱取鹽酸特比奈芬標(biāo)準(zhǔn)品適量,按照倍量稀釋的方法用異丙醇溶液稀釋,濃度分別為0.1,1,5,10,25,50,100,200mg?100ml-1,作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2.2 對(duì)照品溶液(STD)的配制 精密稱取鹽酸特比奈芬對(duì)照品10mg,加異丙醇至100ml,作為對(duì)照品溶液。

1.2.2.3 供試樣品溶液(SA)的配制 取1g鹽酸特比奈芬軟膏,加異丙醇至100ml即得,進(jìn)樣前用微孔濾膜(0.45μ m)濾過。

1.2.3 線性關(guān)系測定 用UV2000型自動(dòng)進(jìn)樣器,注入液相色譜儀,進(jìn)樣量10μ l,記錄色譜圖。以鹽酸特比奈芬峰面積為縱坐標(biāo),藥物濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。

1.2.4 儀器精密度試驗(yàn) 取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%=S/X)。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液,間隔2h進(jìn)樣一次,共計(jì)8h,計(jì)算所測峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)。

1.2.6 回收率試驗(yàn) 取鹽酸特比奈芬對(duì)照品溶液,進(jìn)樣6次,測定峰面積,計(jì)算回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.7 樣品含量測定 精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ l,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,用峰面積計(jì)算含量并進(jìn)行含量分析。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系測定結(jié)果

鹽酸特比奈芬色譜圖見圖1。以鹽酸特比奈芬峰面積為縱坐標(biāo),藥物濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,得回歸方程與濃度的線性關(guān)系為：y=12686x-15626,r=0.9999。結(jié)果表明,鹽酸特比奈芬分離好,在9min時(shí)出峰,峰形對(duì)稱、無拖尾。鹽酸特比奈芬的進(jìn)樣濃度在0.1～200mg?100ml-1范圍內(nèi),峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

圖1 鹽酸特比奈芬反相HPLC色譜圖

2.2 儀器精密度試驗(yàn) 同一標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%為0.51%,結(jié)果表明儀器具有良好的精密度。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一供試品溶液,間隔2h進(jìn)樣一次,共計(jì)8h,所測峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.46%,結(jié)果表明該溶液在9h內(nèi)具有良好穩(wěn)定性。

2.4 回收率試驗(yàn) 鹽酸特比奈芬對(duì)照品溶液,進(jìn)樣6次的峰面積、回收率以及RSD%結(jié)果見表1。結(jié)果表明鹽酸特比奈芬在該色譜條件下回收率良好。

2.5 樣品含量測定 鹽酸特比奈芬軟膏色譜圖顯示在9min時(shí)出峰,峰形對(duì)稱、無拖尾。用峰面積計(jì)算含量并進(jìn)行含量分析。表2為樣品含量測定結(jié)果,顯示樣品含量測定平均為100.75%(100.23%～101.02%),符合含量規(guī)定(95%～105%)。

表1 鹽酸特比奈芬回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

表2 鹽酸特比奈芬樣品含量測定

3 討論

特比萘芬是一種丙烯酮類廣譜、高效抗真菌藥。具有抑菌和殺菌作用,其作用機(jī)制為選擇性抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化酶,使真菌細(xì)胞膜形成受阻,起到抑菌的作用[1]。特比奈芬獨(dú)特的殺菌作用機(jī)制和能在皮膚角質(zhì)層內(nèi)長時(shí)間保持較高治療濃度的特點(diǎn)決定了特比奈芬短期治療可以到達(dá)理想的真菌治愈率,同時(shí)可以提高患者的依從性,減少復(fù)發(fā)。本文用反相HPLC方法測定其軟膏的含量,考察鹽酸特比萘芬軟膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2-4]。

鹽酸特比萘芬軟膏的含量測定采用外標(biāo)法,可達(dá)到滿足藥品含量測定的精確要求。我們的測定方法顯示鹽酸特比萘芬的進(jìn)樣濃度在 0.1～200mg?100ml-1范圍內(nèi),峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,可以滿足靈敏度的要求。

1 蘇愛蓮.特比萘芬乳膏與維A酸膠囊聯(lián)合治療馬拉色菌毛囊炎[J].山東醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào),2009,31(5)：389-391.

2 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[S].

3 Nevenka KE,Jerej K,M arink DK.The development of the method for the determination of terbinafine in cat's plasma and hair[J].Pflugers Arch,2000,440(5 Suppl)：R168-R170.

4 Kovarik JM,Mueller EA,Zehender H,et al.Multiple-dose pharmacokinetics and distribution in tissue of terbinafine and metabolites[J].Antimicrob Agents Chemother,1995,39(12)：2738-2741.