P-ERK在宮頸上皮內(nèi)腫瘤診斷中的應(yīng)用

李 靜 許穎思

宮頸上皮內(nèi)腫瘤(CIN)是宮頸癌的早期病變,準(zhǔn)確的診斷對(duì)于治療和預(yù)后具有重要的意義,我們探討發(fā)現(xiàn) P-ERK在宮頸上皮內(nèi)腫瘤診斷中具有重要的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料

收集我院宮頸錐切病例 104例,年齡 36～62歲,患者均經(jīng)病理組織學(xué)確診,其中宮頸鱗狀上皮化生 38例,宮頸上皮內(nèi)腫瘤 I級(jí) 20例,宮頸上皮內(nèi)腫瘤 2級(jí) 22例,宮頸上皮內(nèi)腫瘤 3級(jí)/原位癌 24例。

1.2 免疫組織化學(xué)法

采用采用 MaxvisionTM免疫組化法,按照免疫組化試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。和 P-ERK為工作液,由美國(guó)基因公司提供,具體步驟:① 4μm連續(xù)切片,裱于涂有 APES的載玻片上,70℃烤片 2h;②二甲苯脫蠟,梯度酒精入水;③ 3%過(guò)氧化氫室溫孵育 30m in,消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;④抗原修復(fù):切片浸于pH 6.0檸檬酸溶液中,電飯鍋中煮沸 5min,保溫 10min,自然冷卻;⑤ PBS洗,5m in×2次;⑥加入適當(dāng)稀釋倍數(shù)的一抗,4℃冰箱 12 h;⑦復(fù)溫,PBS洗去一抗;⑧加 Maxvision試劑,室溫作用1 h;⑨ PBS洗 2次;⑩ DAB顯色,蘇木精復(fù)染,酒精脫水,二甲苯透明,封片,光鏡下觀察抗原在癌組織中表達(dá)。

1.3 結(jié)果判斷

隨機(jī)選擇 4個(gè)高倍視野,記數(shù) 400個(gè)細(xì)胞,根據(jù)著色強(qiáng)度及顯色癌細(xì)胞比例進(jìn)行半定量分為 -、+、++、+++四級(jí)。①按切片中細(xì)胞顯色有無(wú)及著色深淺評(píng)分:無(wú)顯色為 0分,淡黃色為 1分,棕黃色為 2分,棕褐色為 3分。②根據(jù)顯色癌細(xì)胞的比例記分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為 1% ～25%,計(jì) 1分,26%～49%計(jì) 2分,50%～75%計(jì) 3分,76% ～100%計(jì) 4分。每例積分 =① ×②。按積分高低分:0～4分為陰性,4分以上為陽(yáng)性,結(jié)果由兩位病理醫(yī)師分別診斷,不同結(jié)果討論決定,保證結(jié)果的客觀性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用卡方檢驗(yàn)和等級(jí)秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

宮頸鱗狀上皮化生組 38例,6例 P-ERK表達(dá)陽(yáng)性,陽(yáng)性表達(dá)率為15.7%;宮頸上皮內(nèi)腫瘤 66例,P-ERK表達(dá)陽(yáng)性 38例,陽(yáng)性表達(dá)率為 57.6%;兩組比較具有非常顯著性意義(χ2=17.5,P=0.00003,P＜0.01),而宮頸上皮內(nèi)腫瘤 1、2、3級(jí)間陽(yáng)性表達(dá)率比較無(wú)顯著性意義(u=0.02,P＞0.05),見表 1。

表1 P-ERK在宮頸鱗狀上皮化生和上皮內(nèi)腫瘤組織中的表達(dá)(例,%)

3 討論

宮頸鱗狀上皮內(nèi)腫瘤(CIN)是非常常見疾病,易發(fā)展為宮頸癌,常易誤診,我們應(yīng)用P-ERK檢測(cè)兩組病變,為確診兩組病變提供客觀證據(jù)。

ERK為脯氨酸導(dǎo)向的絲/蘇氨酸激酶,磷酸化的 ERK(PERK)才具有使脯氨酸相鄰的絲/蘇氨酸磷酸化的活性[1]。ERK的活化是將信號(hào)從細(xì)胞膜表面受體轉(zhuǎn)導(dǎo)至核的關(guān)鍵,其上游通路 Ras-Raf-MEK可促使ERK向P-ERK的轉(zhuǎn)化平時(shí) ERK位于胞質(zhì)內(nèi),一旦被激活,可迅速穿過(guò)核膜,再激活轉(zhuǎn)錄因子和(或)P70核蛋白體S6激酶[2],并調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性,這些轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)一步調(diào)節(jié)各自的靶基因轉(zhuǎn)錄,引起相應(yīng)蛋白的表達(dá)或活性改變,最終可影響細(xì)胞代謝和功能,產(chǎn)生特定生物學(xué)效應(yīng),同時(shí)P-ERK進(jìn)入核內(nèi)后,可以啟動(dòng)一些基因的表達(dá),其產(chǎn)物以異二聚體或同二聚體形式結(jié)合成核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-l(AP-1),該因子與myc基因旁的特異的 DNA序列結(jié)合,從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄,最信號(hào)共同誘導(dǎo)Cyclin D 1的表達(dá)和活性,促進(jìn)細(xì)胞周期由G期向S期轉(zhuǎn)化,加速DNA合成,導(dǎo)致細(xì)胞的異常增生,修復(fù)能力增強(qiáng),導(dǎo)致細(xì)胞進(jìn)入永生化,形成腫瘤。

我們研究發(fā)現(xiàn),pERK在宮頸上皮內(nèi)腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于不成熟鱗狀上皮化生,為診斷上皮內(nèi)腫瘤提供依據(jù),還發(fā)現(xiàn)宮頸上皮內(nèi)各級(jí)間其陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)顯著意義,但隨著級(jí)數(shù)增高而增高,可能是樣本含量過(guò)小導(dǎo)致,有待進(jìn)一步研究。

[1] Mizumoto Y,Kyo S,Moil N,et al.Activation of ERKl/2 occurs independently of KBAS or BBAF status in endomatral cancer and isassociated with favorable prognosis〔J〕.Cancer Sci,2007,98(5):652.

[2] Ebisuy AM,Kondoh K,Nishida E.The duration,magnitude and compartmentalization of ERK MAP kinase activity:mechanisms for providing signaling specificity〔J〕.JCell Sci,2005,118:2997.