抗環(huán)瓜氨酸肽等四種抗體聯(lián)合檢測在早期類風濕關節(jié)炎診斷中的研究

陳宜恒

(附屬菏澤市立醫(yī)院風濕科,山東 菏澤 274030)

抗環(huán)瓜氨酸肽等四種抗體聯(lián)合檢測在早期類風濕關節(jié)炎診斷中的研究

陳宜恒

(附屬菏澤市立醫(yī)院風濕科,山東 菏澤 274030)

目的探討抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、抗角蛋白杭體(AKA)、抗核周因子(APF)和抗Sa抗體在類風濕關節(jié)炎(RA)早期診斷的臨床價值,并分析其臨床相關因素。方法對542例RA患者隨訪1年,采用間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測抗CCP抗體、AKA抗體,間接免疫熒光法(IIF)檢測APF與Sa,魏氏法測定紅細胞沉降率(ESR),記錄患者的晨僵時間、關節(jié)腫脹數(shù)、關節(jié)壓痛數(shù)、不同關節(jié)受累及DAS28評分。結果4種抗體均陽性的早期RA為99%;任2種及2種以上抗體陽性的早期RA敏感性為83.0%,特異性為65.9%;Sa抗體/抗CCP抗體陽性的患者診斷為早期RA的敏感性77.8%,特異性80.5%;抗體均陽性和任1.2.3種抗體陽性及4種抗體全陽性患者的多關節(jié)腫脹及多個小關節(jié)受累的比率分別為48%、57%、59%、70%、70%和71%、71%、72%、76%、82%,抗體均陽性的患者中肘關節(jié)受累比例最大,占72%;關節(jié)腫脹及多個小關節(jié)受累在早期類風濕關節(jié)炎中占比例最大。結論4種抗體聯(lián)合檢測可提高RA早期診斷的特異性。

關節(jié)炎,類風濕;抗體;診斷

類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以多關節(jié)炎癥為特征的系統(tǒng)性自身免疫病。盡管對RA已有幾十年的研究及一系列診斷標準,但由于疾病早期與其它類型關節(jié)炎較難區(qū)別,導致對RA的早期診斷非常困難。有資料表明在疾病早期給予系統(tǒng)治療會明顯改善患者預后,所以尋找一種能準確診斷早期RA的方法是當務之急。本研究旨在通過患者血清抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體及Sa抗體陽性情況來評估早期RA診斷的臨床價值,同時結合紅細胞沉降率(ESR)、晨僵時間、關節(jié)腫脹數(shù),關節(jié)壓痛數(shù),不同關節(jié)受累及DAS28評分,進行臨床相關因素分析,以期為早期RA的診斷提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 研究對象是我院2001年8月～2009年8月在風濕科門診及住院的542例RA患者,女性390例,男性152例,年齡16～78歲,平均(47±12)歲 ?；颊呔哂嘘P節(jié)炎臨床表現(xiàn),尚不滿足美國風濕病協(xié)會1987年RA的診斷標準,且排除其它風濕性疾病。

1.2 實驗方法 1)抗CCP抗體采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗。實驗中所采用的抗原是人工合成的CCP,由荷蘭學者2000年根據(jù)聚角蛋白微絲蛋白的CDNA序例合成由21個氨基酸組成的環(huán)瓜氨酸肽,樣本的OD值是陰性對照的正(負)三倍為陽性。2)AKA檢測是間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。已知AKA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將AKA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B和酶結合物同時作用。產生顏色,顏色的深淺和樣品中AKA的濃度呈比例關系。3)APF檢測。采用間接免疫熒光法做定性分析,試劑由德國歐蒙公司提供,血清作1:20稀釋觀察5個視野,核周均質周形橢圓形熒光顆料為陽性細胞,＞5個細胞為APF陽性,＜2個為陰性,2～5個為可疑,于德國LEICA熒光顯微鏡下觀察結果。4)Sa抗體,新鮮人胎盤行勻漿后離心,取上清,加入DE52陰離子交換劑,攪拌,用不同洗脫液洗脫再行透析冷凍干燥,-20℃保存,用20mg胎盤提取物(Sa抗原)溶于180/ulDSD-PAGE樣品緩沖液中,沸水中煮3 min,加樣。在10%的Tris甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠中電泳,將分離的蛋白轉移至硝酸纖維膜上,所有待測血清均用緩沖液1:40稀釋,與硝酸纖維膜孵育1 h。洗滌后,加入1:1000稀釋的辣根過氧化物酶標準記的鼠抗人IgG結合物,洗滌后加入底物溶液(OPD-H2O2),反應10 min,加入終止液,觀察結果,出現(xiàn)分子量為50.000與55000的2條印跡帶者被判為陽性,標準Sa抗原和標準Sa抗體陽性血清均由加拿大Menard HA教授提供。5)ESR用魏氏法測定、

1.3 臨床參數(shù) 1)晨僵時間。2)關節(jié)腫脹數(shù)和關節(jié)壓痛數(shù),關節(jié)計數(shù)28個包括雙側近端,指間關節(jié)掌指導關節(jié),雙腕、雙肘、雙肩和雙膝關節(jié)。3)DAS28評分。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0軟件進行分析。

2 結果

2.1 不同抗體陽性對早期RA診斷的意義 從聯(lián)合檢測抗體的個數(shù)來看,4種抗體均陽性的患者RA的陽性率最高,說明4種抗體聯(lián)合監(jiān)測可以提高早期RA診斷的特異性。

陽性抗體與早期 RA診斷分布:抗CCP抗體陽性者24例,其中早期RA 18例,占75.00%;AKA 陽性者0;APF陽性者4例,其中早期RA 2例,占50.00%;Sa抗體陽性者46例,其中早期RA 38例,占83.00%;Sa/APF陽性者12例,其中早期RA 8例,占67.00%;Sa/AKA陽性者6例,其中早期 RA 4例,占67.00%;APF/AKA陽性者0;APF/抗CCP抗體陽性者6例,其中早期 RA 4例,占67.00%;AKA/抗CCP抗體陽性者0Sa/APF/AKA陽性者8例,其中早期RA 6例,占 75.00%;Sa/APF/抗 CCP抗體陽性者106例,其中早期RA 104例,占98.00%;Sa/AKA/抗CCP抗體陽性者14例,其中早期RA 12例,占86.00%;APF/AKA/抗CCP抗體陽性者4例,其中早期 RA 2例,占50.00%;Sa/APF/AKA/抗CCP抗體陽性者142例,其中早期RA 140例,占99.00%;

4種抗體聯(lián)合監(jiān)測診為RA分布:抗體陰性者58例,其中早期 RA 20例,占34.00%;任意1種抗體陽性者74例,其中早期RA 58例,占 78.00%;任意2種抗體陽性者136例,其中早期RA 118例,占87.00%;任意 3種抗體陽性者132例,其中早期 RA 124例,占94.00%;4種抗體陽性者142例,其中早期 RA 140例,占 99.00%。

2.2 早期RA臨床相關因素分析 見表3。分析比較ESR、晨僵時間、關節(jié)腫脹數(shù)、關節(jié)壓痛數(shù),不同關節(jié)受累及ADS28評分,關節(jié)腫脹數(shù)、小關節(jié)受累數(shù)均與抗體陽性個數(shù)相關。在抗體陽性的患者中,抗體個數(shù)越多,壓痛關節(jié)數(shù)達3個以上所占比例越多;3種以下抗體陽性的關節(jié)炎患者有70%關節(jié)受累呈對稱性,3種抗體陽性的患者中有80%呈對稱性,在不同抗體個數(shù)中,4個抗體均陽性的患者的掌指關節(jié)、近端指間關節(jié)、肩關節(jié)、膝關節(jié)受累的比例最高;從DAS28評分中可以看出4種抗體全陽性,病情緩解的比例是最低,活動障礙的比例最高。

表3 多個臨床相關因素與抗體陽性個數(shù)百分率關系

3 討論

RA不可逆性關節(jié)損害往往發(fā)生在病變的前2年,循證醫(yī)學證實,前 3～4個月是治療的窗口期,早期診斷,早期治療起著非常重要的作用,而目前早期診斷仍是世界性難題。

在我國的RA的發(fā)病率約為0.33%～0.38%,2年內即可出現(xiàn)不可逆的關節(jié)破壞,2年致殘率為50.0%,因此早期診斷、早期治療可大大減少致殘率的發(fā)生。目前常采用的仍是美國風濕病學會1987年修訂的RA分類標準,該標準主要依靠臨床表現(xiàn)、X線片以及RF檢測,而符合該診斷標準的患者已基本進入RA中的晚期,因而影響了治療效果。近年在RA的遺傳標志、自身抗體方面的研究取得了較大進展,相繼發(fā)現(xiàn)了一些對RA較為特異的自身抗體。我們也進行了相關抗體研究,優(yōu)選了CCP抗體ADF、AKA及Sa抗體,通過較大規(guī)模的臨床研究取得了一定成效。通過這四種抗體的聯(lián)合檢測,在提高診斷的敏感性同時保證一定的特異性,為早期RA的診斷提供特異性指標,必要時早期給予積極治療。

[1] Girdlli F,Foschi FG,BedeschiE,et al,Is anti-cyclic itrullin-ated peptide a useful laboratory test for the diaghosis of rheumatoid arthritis[J].Allerg Immunol,2004,36:127-130.

[2] 董巍,張劍波,胡雪,等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體測定對類風濕關節(jié)炎診斷的臨床價值[J].實用醫(yī)院臨床雜志,2005,1:84-86.

[3] 田昕,畢黎琦,栗占國.抗瓜氨酸化Ⅱ型抗原抗體的檢測及其與類風濕關節(jié)炎的相關性研究[J].中華醫(yī)學雜志,2006,86:2334.

[4] 牛紅青,李小峰,張莉蕓,等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體與類風濕關節(jié)炎疾病活動及骨侵蝕關系的研究[J].中華風濕病學雜志,2008,12(9):603.

R446.62;R593.22

A

1008-4118(2010)01-0005-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2010.01.05

2010-03-01