不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間連翹中連翹酯苷 A的含量測定

靖 會 李教社 楊銀京 西安醫(yī)學院藥學院(西安 710021)

連翹為木犀科連翹屬植物連翹(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果實,主產(chǎn)于我國山西、河南、陜西、山東等地。連翹有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效,主治溫熱、丹毒、斑疹、癰瘍腫毒、瘰疬、小便淋閉等癥,現(xiàn)代臨床上多用于治療呼吸道感染、急性腎炎、肝炎、腦膜炎等疾病。現(xiàn)代藥理研究表明,連翹中含有的連翹酯苷 A(Forsythoside A)具有極強的抗菌及抗病毒活性,為其主要有效成分之一。連翹根據(jù)其果實成熟程度,商品有青翹和老翹之分。本研究對不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間的連翹中連翹酯苷 A的含量進行了對比,為探索最佳藥材采收期及擴大藥用資源提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥 1.1 儀器 美國 TSP2000高效液相色譜儀,UV100紫外檢測器,ANAST AR色譜工作站(奧康科技有限公司),HS6150D超聲儀(天津恒奧科技發(fā)展有限責任公司),AE240型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥 連翹酯苷 A對照品(自制,光譜學數(shù)據(jù)與文獻報道一致,歸一化法測定其質(zhì)量分數(shù)＞98%)。連翹(老翹和青翹)、連翹心、連翹葉、連翹花,分批采自陜西省黃龍縣及陜南漢中地區(qū),經(jīng)西安交通大學醫(yī)學院郭增軍副教授鑒定為木犀科連翹屬植物連翹Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實、種子、葉及花。乙腈為色譜純,水為三蒸水,其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果[1]

2.1 色譜條件 色譜柱:TIANHE C18(150mm× 4.6mm,5 μ m);流動相:乙腈∶水∶醋酸 (15∶ 85∶0.2);流速:1.0m L? min-1;檢測波長:332nm;柱溫:室溫。對照品及樣品色譜圖見圖 1。

圖1 對照品及樣品的色譜圖 A對照品 B老翹 C青翹 D連翹心 E連翹葉 F連翹花 1連翹酯苷 A

2.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末(80目)約0.1g,精密稱定,置 25mL量瓶中,加入 50%甲醇溶液20m L,超聲 1h,取出,放至室溫,加 50%甲醇溶液至刻度,搖勻,用 0.45 μ m微孔濾膜過濾,即得。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取連翹酯苷 A對照品 8.10mg,置 10m L量瓶中,用 50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,配成 0.810g? L-1的對照品溶液。

2.4 線性關系的考察 精密吸取對照品溶液5mL置 10mL量瓶中,用 50%甲醇溶液定容至刻度,得濃度為 0.405g? L-1的對照品溶液,由此稀釋得系列標準溶液,分別進樣 20 μL,測定峰面積。以進樣濃度(g? L-1)為橫坐標,峰面積為縱坐標,測得回歸方程為:Y=1 038 545.97-7 923.47,r=0.999 9,線性范圍0.010～ 0.810g? L-1。

2.5 精密度試驗 取同一份對照品溶液,重復進樣 5次,測得峰面積的 RSD為 0.50%。

2.6 重復性試驗 取同一批藥材樣品 5份,分別制備供試品溶液進行測定,其結(jié)果的 RSD為 0.67%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 對同一供試品溶液,分別于0,1,2,4,6,8,10,12,24h進樣,峰面積的 RSD為 1.80%,表明供試品溶液在 24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品 5份,各約 0.05g,分別精密加入對照品溶液(0.385g? L-11)1mL,按 2.1項制備供試品溶液進行測定,結(jié)果連翹酯苷 A的回收率為 100.5%,RSD為 1.61%(n=5)。

2.9 樣品的測定 取連翹各部位的粉末,按 2.2項下操作,測定,計算連翹酯苷 A的含量。結(jié)果見表 1。

3 討 論 3.1通過比較發(fā)現(xiàn),不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間連翹中連翹酯苷 A的含量均不同,在 0.99%～ 6.97%之間。不同部位相比較,連翹葉中連翹酯苷 A的含量最高,青翹、連翹花、連翹心中連翹酯苷 A的含量均較高,老翹中連翹酯苷 A的含量較低;青翹中連翹酯苷 A的含量明顯高于老翹。不同產(chǎn)地相比較,陜北黃龍地區(qū)產(chǎn)老翹、連翹花中連翹酯苷 A的含量低于陜南漢中地區(qū),而連翹心中連翹酯苷 A的含量高于陜南。不同采集時間相比較,青翹中連翹酯苷A的含量逐漸下降,以六月為最高;連翹葉中連翹酯苷A的含量逐漸下降,以五月為最高。

3.2 連翹秋季果實初熟尚帶綠色時采收,除去雜質(zhì),蒸熟,曬干 ,習稱“青翹”;果實熟透時采收,曬干,除去雜質(zhì),習稱“老翹”。連翹種子稱為“連翹心”。青翹與老翹在藥典中均作為藥用。對連翹酯苷 A含量的分析結(jié)果可指導連翹藥材的采收,提示在使用連翹時無需去心,并提示青翹的抗菌效價高于老翹。

表1 不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間連翹中連翹酯苷 A的含量測定結(jié)果

3.3 我國長期以連翹果實入藥,含量測定結(jié)果表明其葉子、花、種子也有很高的藥用價值,可進一步開發(fā)利用。此結(jié)果對擴大藥用資源有一定的指導意義。

3.4 含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)五月份采集的連翹葉中連翹酯苷 A含量最高。同時有文獻報道[5],連翹苷在連翹葉中的含量以五月份最高。說明連翹葉中的有效成分在五月份達最高,民間采集幼嫩的連翹葉作為保健茶原料是有一定科學依據(jù)的。

[1] 靖 會,李教社,曹 蔚,等.高效液相色譜法測定連翹中連翹酯苷的含量[J].西北藥學雜志,2003,18(4):156-157.

[2] 朱鳳云,姬曉敏,陳志紅,等.連翹葉采收期探討 [J].中藥材,2002,25(8):547.