抗宮炎軟膠囊水蘇堿供試液提取純化的方法

，，

(1.佳木斯大學(xué)繼續(xù)教育學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

抗宮炎軟膠囊中共有紫珠、益母草等3味藥組成,選擇君藥紫珠中的黃酮類(lèi)控制本品質(zhì)量，專(zhuān)屬性差。選擇臣藥益母草中含量較高的鹽酸水蘇堿，作為控制質(zhì)量的指標(biāo)性成分，具有可控性和專(zhuān)屬性。

1 儀器與試藥

1.1 藥品 益母草藥材,購(gòu)自安徽亳州樂(lè)爾康藥業(yè)有限公司，經(jīng)佳木斯藥檢所檢測(cè)(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄Ⅵ D方法)[1]確定為質(zhì)量合格藥材。鹽酸水蘇堿對(duì)照品(批號(hào)110712-200508)；由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 島津LC-10AT vp高效液相色譜儀，島津SPD-10A vp紫外檢測(cè)器，浙江大學(xué)N2000色譜工作站；島津AX200電子分析天平。

2 測(cè)定方法

2.1 方法 按高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥD)[1]測(cè)定。

2.1.1 色譜條件 以氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(82∶18)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為192 nm；柱溫：22℃。理論塔板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.1.2 溶液的制備 (1)對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 mL含鹽酸水蘇堿40 μg的溶液，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液的制備：①供試品提取液的制備:取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲提取1 h，放冷,用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，得濾液；②供試品提取液的純化：精密量取上述濾液25 mL至中性氧化鋁柱上(4 g，100～200目，柱內(nèi)徑1.5 cm，濕法裝柱，甲醇預(yù)洗),用100 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干,殘?jiān)昧鲃?dòng)相分次溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，即得。

2.2 結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 抗宮炎軟膠囊10批樣品含量測(cè)定結(jié)果

本品每粒含益母草以鹽酸水蘇堿(C7H13NO2·HCL)計(jì)，不得少于0.80 mg[2-3]。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

3.1.1 提取方法的考察 方法1:取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，得濾液，照測(cè)定方法項(xiàng)下的純化方法處理，測(cè)定含量。方法2:取本品內(nèi)容物1 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加乙醇50 mL,回流提取顏色至無(wú)色(約6 h)，濾過(guò)，得濾液，照測(cè)定方法項(xiàng)下的純化方法處理，測(cè)定含量。結(jié)論：兩種提取方法的結(jié)果相近，由于連續(xù)回流提取法時(shí)間長(zhǎng)，超聲提取法省時(shí)省力，因此選用精密加入乙醇50 mL,稱(chēng)定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，得濾液的提取方法。

3.1.2 提取時(shí)間的考察 分別精密稱(chēng)取本品內(nèi)容物1 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)量，分別超聲30，40，50，60，70 min。放冷后，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，照含量測(cè)定項(xiàng)下供試品制備方法和色譜條件，制備樣品并測(cè)定。結(jié)果超聲處理60，70 min，含量無(wú)明顯變化，故確定提取時(shí)間為60 min。

3.1.3 提取溶劑用量的考察 分別精密稱(chēng)取本品內(nèi)容物1 g,分別加入30，40，50，60 mL甲醇，超聲60 min，照供試品配制方法配制，同上法測(cè)定。

3.1.4 提取液純化方法的考察 方法1：精密量取提取液25 mL置蒸發(fā)皿中，加活性炭0.5 g，置水浴中加熱約30 s，攪拌，濾過(guò)，乙醇多次洗滌蒸發(fā)皿,合并濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相分次溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中,流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。方法2:將提取液濃縮至約5 mL，轉(zhuǎn)移至活性炭-中性氧化鋁層析柱(中性氧化鋁4 g，濕法裝柱，上覆層析用活性炭0.4 g，95%乙醇預(yù)洗)上，用100 mL乙醇洗脫(約需時(shí)12～14 h)，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。方法3：將提取液濃縮并至約25 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。方法4:精密量取提取液25 mL至中性氧化鋁柱上(4 g，100～200目，柱內(nèi)徑1.5 cm，濕法裝柱，甲醇預(yù)洗)，用100 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相分次溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，即得。結(jié)果：方法1和方法4含量結(jié)果較方法2和方法3高；方法1、方法3簡(jiǎn)單易行、雜質(zhì)較多、對(duì)含量測(cè)定有干擾；方法2重現(xiàn)性較差、含量變化較大、加樣回收率較低、時(shí)間長(zhǎng)；方法4雜質(zhì)較少，含量較高。因此，采用方法4純化提取液。

3.2 結(jié)論 采用取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1 g,精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲提取1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，得濾液，精密量取上述濾液25 mL至中性氧化鋁柱上(4 g,100～200目，柱內(nèi)徑1.5 cm，濕法裝柱，甲醇預(yù)洗)，用100 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相分次溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度,搖勻的方法制備供試品溶液[4-5]。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中國(guó)藥典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:附錄Ⅵ D.

[2]王勝偉,朱利敏.HPLC法測(cè)定鮮益母草中鹽酸水蘇堿的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2006,23(1):15.

[3]嚴(yán)優(yōu)芍,李衛(wèi)民,高英,等.HPLC法測(cè)定益母草不同制劑中水蘇堿[J].中草藥,2006,37(1):70.

[4]姜舜堯.益母草藥材中水蘇堿的高效液相色譜分析法分析[J].藥物分析雜志,2001(4):50.

[5]任江劍.HPLC法測(cè)定鮮益母草中鹽酸水蘇堿含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(3):98.