干擾素對MCF-7乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用

石利濤，楊宗偉，孫立新，宋有鑫，王志學(xué)

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院）

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐漸上升趨勢。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個多基因、多階段的變化過程，是由基因和環(huán)境因素聯(lián)合作用而導(dǎo)致的疾病。近年來，有文獻(xiàn)報道腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞的異常增生和分化有關(guān)。干擾素是一類重要的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，可通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤活性，尤其對腫瘤的增殖抑制作用非常明顯[1]。本實驗觀察了單獨或聯(lián)合應(yīng)用IFN-γ與IFN-α2b對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖抑制作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 重組人IFN-γ，上?？寺∩锔呖萍夹g(shù)有限公司；重組人IFN-α2b，北京遠(yuǎn)策藥業(yè)有限責(zé)任公司；MTT，華美生物技術(shù)有限公司，用PBS配制成濃度為5mg/ml；RPMI Medium 1640培養(yǎng)基，GIBCOBRL公司；胎牛血清，北京元亨圣馬生物技術(shù)研究所；MCF-7乳腺癌細(xì)胞，南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) MCF-7乳腺癌細(xì)胞以2×104/ml接種于培養(yǎng)瓶中，內(nèi)含RPMI-1640培養(yǎng)液（含10%胎牛血清），置于37.0℃，5%CO2飽和濕度恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長，每3-4天傳代一次。待細(xì)胞長到貼壁80%-100%時，用0.25%胰蛋白酶消化2-3min，吹打制成細(xì)胞懸液，以2×105/ml的細(xì)胞密度接種到96孔板。生長12h后分別加入相應(yīng)處理因素后，分別再培養(yǎng)24h、48h和72h。到時間后吸棄原培養(yǎng)液，加入無血清培養(yǎng)液0.1ml/孔，同時每孔加MTT（5mg/ml）20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h，再加入DMSO 150μl/孔，振蕩10min（120-140r/min），酶標(biāo)儀（波長490nm）測定每孔的光密度值。

1.3 分組及處理 實驗時每種處理設(shè)6個復(fù)孔。實驗組1：500U/ml IFN-γ處理組，實驗組2：500U/ml IFN-α2b處理組，實驗組3：500U/ml IFN-α2b和500U/ml IFN-γ聯(lián)合處理組；以RPMI-1640培養(yǎng)液（含10%胎牛血清）代替藥物作為對照組。

2 結(jié)果

MTT法結(jié)果顯示：作用24h，各實驗組OD值與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）；作用48h，實驗組1及實驗組3的OD值明顯低于對照組（P＜0.05），二者比較無明顯差別（P＞0.05）；作用72h，實驗組3的OD值明顯低于對照組（P＜0.05），實驗組1、實驗組2與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。實驗組1、實驗組2，作用48h的OD值明顯低于24h及72h（P＜0.05），作用24h與72h比較差異無顯著性（P＞0.05）；實驗組3，隨作用時間的延長，OD值逐漸下降，不同作用時間之間比較差異顯著（P＜0.05）。見附表。

附表 MTT法MCF-7乳腺癌細(xì)胞的OD值（±s）

附表 MTT法MCF-7乳腺癌細(xì)胞的OD值（±s）

與同時間點對照組比較：*P＜0.05；與本組24h、72h比較：#P＜0.05；與本組24h、48h比較：△P＜0.05

組別處理24h 處理48h 處理72h對照組1.00±0.041.00±0.211.00±0.11實驗組10.92±0.040.69±0.12*#0.91±0.21實驗組21.08±0.090.81±0.04#1.09±0.10實驗組31.01±0.050.69±0.06*0.38±0.41*△

3 討論

手術(shù)、化療、放療、內(nèi)分泌治療及免疫治療是乳腺癌的主要治療方法，雖然對乳腺癌有一定的治療作用，但療效仍不能令人十分滿意，因此探討更有效的治療方法顯得十分重要。干擾素有很強(qiáng)的增殖抑制作用。李雪梅等檢測干擾素-γ對MGC-803胃癌細(xì)胞株的影響發(fā)現(xiàn)，在1250-10000U/ml范圍內(nèi)，干擾素-γ對MGC-803胃癌細(xì)胞均有抑制作用，并可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，且呈時間、濃度依賴性[2]。有學(xué)者檢測干擾素-α對白血病U937細(xì)胞的生長抑制率時發(fā)現(xiàn)，低于5×106U/L的IFN對細(xì)胞的生長無明顯抑制作用，10×106U/L以上的藥物濃度，隨著藥物作用時間的延長，細(xì)胞生長抑制率逐漸升高[3]。干擾素作為一種有肯定療效的抗腫瘤藥物，對大多數(shù)腫瘤具有明顯的治療作用，但關(guān)于干擾素對乳腺癌治療效果的研究較少。

本研究通過觀察干擾素-γ、干擾素-α2b及二者聯(lián)合應(yīng)用對MCF-7乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用，探討了干擾素對乳腺癌的治療效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二者單獨用藥時，24h時并未起作用，48h時作用顯著，提示48h可能是干擾素單獨用藥的最佳作用時間；72h時作用效果不明顯，可能是由于時間過長藥物作用效果減弱。干擾素-γ與干擾素-α2b聯(lián)合用藥時，48h的作用效果接近或達(dá)到單獨用藥，72h時效果明顯且強(qiáng)于單獨用藥，提示二藥聯(lián)合應(yīng)用除了二藥簡單的相加作用外，一種藥物還可能提高另一種藥物的血藥濃度或增加腫瘤細(xì)胞對另一種藥物的敏感性。

惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程是細(xì)胞過度增殖和凋亡受到抑制的過程[4]，細(xì)胞基因調(diào)控異常，使細(xì)胞過度增殖或凋亡減弱是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制[5]。由于IFN-α2b與IFN-γ活化的信號通路和靶基因部分重疊，因此具有一些共同的生理活性；但由于它們作用于不同的位點、結(jié)合于不同的受體故又有各自不同的功能。由于不同藥物作用的速度和持續(xù)時間不同，單次給藥時，隨著作用時間延長，藥物可能作用減弱；以適當(dāng)?shù)乃幬餄舛嚷?lián)合用藥時，一種藥物可能提高另一種藥物的細(xì)胞內(nèi)藥物濃度或增加腫瘤細(xì)胞對另一種藥物的敏感性。干擾素單獨、聯(lián)合應(yīng)用或與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用治療腫瘤效果的研究對臨床應(yīng)用有較好的指導(dǎo)意義。

[1]張濟(jì)，陳漢春.干擾素誘導(dǎo)腫瘤凋亡的分子機(jī)制[J].中華腫瘤防治雜志，2005,12（13）：1025-1029.

[2]李雪梅，孫抒，王建光，等.γ-干擾素對MGC-803胃癌細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡作用及其機(jī)制研究[J].臨床醫(yī)學(xué)，2005，25（1）：68-71.

[3]申加英，楊萍，劉志梅，等.IFN-α對U937細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡及其作用機(jī)制探討[J].臨床血液學(xué)雜志，2005，S1（1）：37-39.

[4]Meyn RE, Stephens LC, Hunter NR, et al. Kinetics of cisplatin-induced apoptosis in murine mammary and ovarian adenocarcinomas[J].Int J Cancer,1995,60（5）:725-729.

[5]Ssholz M, Cinatl J. Fas/FasL interaction: an ovel immune therapy approach with immobilized biologicals [J].Med Res Rev, 2005, 25（2）: 331-342.