胃癌組織中 PTEN的表達(dá)與幽門螺旋桿菌感染的關(guān)系

延安大學(xué)附屬醫(yī)院(延安 716000)馬 鵬 談曉紅 馮義朝

張力蛋白同源、第 10染色體丟失的磷酸酶基因(Phosphatase and tension homology deletedon chromosome ten,PTEN),是目前發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,參與細(xì)胞凋亡調(diào)控[1]。幽門螺桿菌(HP)是胃癌重要的致癌因素已受到越來越多的資料的證實(shí),但其確切的致癌機(jī)制尚不明確。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)探討胃癌組織中PTEN的表達(dá)與幽門螺旋桿菌感染的關(guān)系。

材料和方法

1 材 料 2003～ 2005年我院普外科術(shù)后胃癌大體標(biāo)本 80例,其中男 56例,女 24例,年齡 23～ 72歲 (平均54歲 )。均經(jīng) HE染色,病理確診并分型,其中高-中分化腺癌為32例,低分化腺癌48例。癌旁組織為與癌組織最遠(yuǎn)處,也經(jīng)病理確診并分型,其中腸化生26例,胃炎 54例,所有患者受檢前均未經(jīng)放化療等治療。所有患者術(shù)前均禁食 10h后于胃鏡直視下取標(biāo)本,取胃組織 3塊,并經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)檢查,以確定有無 HP感染,之后再用于組織學(xué)檢查。所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片厚 4mm.常規(guī) HE染色及甲苯胺藍(lán)染色,根據(jù)組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)診斷胃炎組織、腸化生組織、胃癌組織和有無 HP感染。PTEN單克隆抗體(濃縮液)、(S-P)試劑盒及(DAB)購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

2 方 法 標(biāo)本經(jīng) 10%甲醛固定,石蠟包埋,4 μ m厚的石蠟切片 65℃烘烤,脫蠟,3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶,微波修復(fù)抗原,10%正常山羊血清封閉,PTEN單克隆兔抗體(1∶50)4℃過夜孵育,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,加生物素標(biāo)記鼠抗人 IgG藥置于室溫下 30min,沖洗,辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素室溫下孵育30min,沖洗后DAB顯色,蘇木素染色,封片。光鏡觀察。用已知陽性胃癌切片作陽性對照,用 PBS代替一抗作陰性對照。采用快速尿素酶試驗(yàn)、甲苯胺藍(lán)染色組織病理學(xué)檢查兩種方法檢測 HP感染情況。

3 結(jié)果判斷 PTEN染色定位在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽性。由兩位病理科醫(yī)師隨機(jī)選擇5個有代表性的視野計(jì)數(shù)200個細(xì)胞,按陽性細(xì)胞占同類記數(shù)細(xì)胞的百分比將免疫組化結(jié)果分為陰性,即百分比＜10%;陽性即百分比＞10%。 HP感染情況采取快速尿素酶試驗(yàn)和甲苯胺藍(lán)染色組織病理學(xué)檢查兩種方法檢測,以結(jié)果一致者作為研究樣本,實(shí)驗(yàn)結(jié)果拍攝成像。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用χ2檢驗(yàn)對免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析處理,以P＜0.05為差異具有顯著意義。

結(jié) 果

1 PTEN在胃癌及癌旁組織中PT EN的表達(dá):胃癌組織 PTEN的表達(dá)在 80例胃癌組織中有 37例PTEN陽性,陽性率46.3%。80例癌旁組織中有69例PTEN陽性,陽性率為86.3%,二者之間有顯著性差異(P＜0.01)。

2 胃癌中 HP感染和 PT EN表達(dá)的關(guān)系:在 HP陽性和 HP陰性胃癌中,PTEN表達(dá)陽性率分別為 38.9%和52.3%,HP陽性者PTEN蛋白表達(dá)雖然低于HP陰性者,但二者之間無顯著差異(P＞0.05)

討 論

PTEN作為一種抑癌基因,參與細(xì)胞凋亡調(diào)控[1]。近年研究發(fā)現(xiàn),其表達(dá)與一些惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展、生物學(xué)行為和預(yù)后有密切的關(guān)系[2,3],但對PT EN在胃癌中的表達(dá)卻有不一致的報(bào)道[4,5]。本研究顯示:PTEN在癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織,二者之間有顯著性差異,提示:在胃癌組織中 PT EN表達(dá)下調(diào),在由胃炎組織或腸化生組織向癌組織進(jìn)化演變中,抑癌基因PTEN的缺失會導(dǎo)致其對腫瘤的抑制作用的減弱,說明 PTEN基因與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

幽門螺桿菌(HP)是重要的致癌因素已受到越來越多的資料的證實(shí)[6,7]。當(dāng)幽門螺桿菌感染后,宿主細(xì)胞對 HP產(chǎn)生的反應(yīng)分為速發(fā)性和遲發(fā)性兩類,遲發(fā)性反應(yīng)多數(shù)涉及到基因表達(dá)的變化[8]。近期一些研究者應(yīng)用cDNA array分析了HP誘導(dǎo)的胃上皮細(xì)胞基因表達(dá)譜的變化。Chiou等報(bào)道,在HP的刺激下,胃癌細(xì)胞株有21個基因上調(diào)和17個基因下調(diào)[9]。所以對基因表達(dá)變化的進(jìn)一步研究,將有助于了解宿主細(xì)胞的抵抗策略和適應(yīng)性變化的根本機(jī)制,從而為干預(yù)有關(guān)環(huán)節(jié),減輕宿主細(xì)胞對H.pylori的易感性提供新的思路。本研究顯示:PT EN的陽性表達(dá)在 HP陽性的組織中與 HP陰性組織中分別為38.9%及52.3%,HP陽性者PTEN蛋白表達(dá)雖然低于 HP陰性者,但二者尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示:PTEN在胃癌中的表達(dá)變化可能與HP感染無明顯相關(guān)性,HP的致癌機(jī)制中可能沒有抑癌基因PT EN的參與。其結(jié)果與周慶華[10]等研究不同,可能與樣本量的大小、檢測前是否服用過抗 HP的藥物等因素有關(guān)。關(guān)于PTEN與 HP感染的關(guān)系,文獻(xiàn)報(bào)道甚少,其他抑癌基因和癌基因與 HP在胃癌的關(guān)系研究亦鮮有報(bào)道,因此,HP感染導(dǎo)致胃癌的途徑有很多種[11,12],能否通過對抑癌基因 PTEN的影響而致癌,還需進(jìn)一步研究。

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