兔VX2腫瘤動(dòng)物模型的建立*

徐加菊,葉 欣

(1.泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271000； 2. 山東省立醫(yī)院腫瘤中心，山東 濟(jì)南 250021)

1 兔VX2動(dòng)物模型的建立

1.1 兔VX2肝癌動(dòng)物模型的建立

原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，全球發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，已超過(guò)62.6萬(wàn)/年,居于惡性腫瘤的第5位;死亡接近60萬(wàn)/年，位居腫瘤相關(guān)死亡的第3位。兔VX2肝癌模型從生長(zhǎng)特征、轉(zhuǎn)移及死亡、病理過(guò)程均與人肝癌相似,而且模型穩(wěn)定,具有復(fù)制性強(qiáng),種植成功率高、成型周期短等特點(diǎn),又適于被B超、CT 、MRI及血管造影發(fā)現(xiàn)和檢測(cè),可利用其進(jìn)行一系列肝癌的影像學(xué)、治療學(xué)及抗腫瘤藥物的藥代動(dòng)力學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究，是目前最大、最成熟和最常用的肝癌腫瘤模型[1]。

常用的兔VX2肝癌模型的建立方法包括經(jīng)皮穿刺及開腹兩種途徑,前者主要為超聲引導(dǎo)下或CT引導(dǎo)下經(jīng)皮瘤細(xì)胞懸液或經(jīng)皮穿刺小瘤塊注入兩種；后者包括直視下瘤細(xì)胞懸液注入或小瘤組織塊穿刺注入或開腹后局部肝臟包埋等三種。

1.1.1直視下瘤細(xì)胞注射法 由于注射時(shí)瘤細(xì)胞可進(jìn)入門靜脈或肝靜脈,造成肝內(nèi)多發(fā)結(jié)節(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,同時(shí)也由于局部的瘤細(xì)胞數(shù)量較少、較分散、容易受到機(jī)體免疫系統(tǒng)的清除,因而成瘤率低、成瘤時(shí)間長(zhǎng)。另外該方法需要對(duì)瘤細(xì)胞進(jìn)行分離、計(jì)數(shù),操作復(fù)雜且費(fèi)用較高,因此逐步被瘤塊注入法取代。

1.1.2直視下小瘤塊注入法或開腹后局部肝臟包埋 是直接將分離的瘤組織塊剪碎后直視下注入或包埋,由于該方法是將瘤塊直接注入或包埋入肝內(nèi),保證了腫瘤生長(zhǎng)所需要的細(xì)胞濃度,不易被機(jī)體的免疫系統(tǒng)所清除,提高了成瘤率,所成腫瘤多為單一病灶且形態(tài)規(guī)則,分葉少見,由于瘤塊較大,肝內(nèi)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移少見,所建模型較穩(wěn)定[2]。

朱光宇等[3]分別采用直視下瘤細(xì)胞懸液注射法、直視下瘤塊注入后用明膠海綿封堵穿刺通道法及直視下瘤塊注入后局部壓迫法建立兔VX2肝癌模型。肝臟總種植成功率為93.1%,三組成瘤率分別為79%、100%、100%。Lee KH等[4]采用開腹后直視下組織塊種植法建立兔肝VX2腫瘤,種植成功率100%。

1.1.3超聲引導(dǎo)下或CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺法 由于動(dòng)物損傷小、并發(fā)癥少，被國(guó)內(nèi)外大多數(shù)研究者采用，但前者中超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮瘤細(xì)胞懸液注入法操作時(shí)間長(zhǎng),成瘤率低,成瘤時(shí)間較長(zhǎng),其造價(jià)昂貴、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、易接種失敗及種植成功率低，易發(fā)生轉(zhuǎn)移和針道種植等缺陷，使其在研究中的應(yīng)用受到限制[5]。而超聲或CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺組織塊注射法復(fù)制VX2肝癌模型，具有接種簡(jiǎn)便、創(chuàng)傷小、無(wú)包裹粘連等優(yōu)點(diǎn)，成功率尤其孤立瘤灶發(fā)生率高，方法簡(jiǎn)單、易行，模型性質(zhì)穩(wěn)定，并發(fā)癥少，異位種植發(fā)生率低，在肝癌的基礎(chǔ)及臨床研究中將得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。

Kwang-Hun Lee[6]等報(bào)道在超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺注射瘤組織塊組和開腹組的成功率均為100%，但是前者的腫瘤的種植率為20.8%，而后者為8.3%。Shi DH等[7]采用CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺瘤組織塊法建立兔VX2肝癌模型(前期9只，后期20只)，成瘤率分別為88.9%，95%。

1.2 兔 VX2肺癌模型的建立

肺癌是嚴(yán)重威脅人類生命的惡性腫瘤,近數(shù)十年其發(fā)病率有明顯增高趨勢(shì)，目前全球肺癌平均發(fā)病率為20/10萬(wàn)人，中國(guó)22/10萬(wàn)人，死亡率位居各種癌癥之首。建立一種安全、方便、易行的肺癌模型,有利于其在腫瘤治療學(xué)、放射生物學(xué)、介入治療學(xué)和腫瘤影像學(xué)等基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用[8，9]。兔VX2腫瘤細(xì)胞株具有高侵襲性和高轉(zhuǎn)移特性的特點(diǎn),轉(zhuǎn)移部位主要是局部淋巴結(jié)和肺，可應(yīng)用于肺癌模型的建立。

1.2.1兔VX2肺癌模型的建立方法

同種移植性肺癌模型的建立方法有細(xì)胞懸液注射法、腫塊埋植法、CT或X線引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺瘤組織塊注射法、開胸瘤組織塊接種法。此外還有單細(xì)胞懸液耳緣靜脈注射等方法[10]。

1.2.1.1細(xì)胞懸液注射法 該方法接種簡(jiǎn)便、創(chuàng)傷小,但細(xì)胞懸液制備復(fù)雜,要求條件較高,移植成功率低,接種部位腫瘤早期生長(zhǎng)緩慢,且易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和胸壁種植,使其在某些研究中的應(yīng)用受到限制。馬連君等[11]采用組織塊懸液法和細(xì)胞懸液法兩種方法建立兔VX2肺癌模型,接種成功率分別為100%和48%,胸壁種植率分別為4%和20%。

1.2.1.2腫塊埋植法 成瘤確切,腫瘤易于單發(fā),非常適合腫瘤治療研究,但不足之處是：操作方法要求高,難度大。石毅等[12]采用切開埋植腫瘤法建立兔VX2肺癌模型，原位成瘤率為100%(13/13)。

1.2.1.3開胸瘤組織塊接種法 操作方法要求高,難度大。Tu M等[13]采用開胸暴露右肺下葉后,穿刺注入瘤組織塊法建立兔肺VX2腫瘤模,腫瘤成瘤率可達(dá)80%(24/30)。雖然開胸手術(shù)方法直接，但實(shí)驗(yàn)兔發(fā)生血胸、氣胸、呼吸衰竭、感染等并發(fā)癥的危險(xiǎn)性大，目前已較少應(yīng)用。

1.2.1.4CT或X線引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺瘤組織塊注射法 采用該方法建立兔VX2肺癌模型接種簡(jiǎn)便、創(chuàng)傷小;組織塊懸液制備簡(jiǎn)單,要求條件不高，成瘤率高,腫瘤性質(zhì)不變,存活時(shí)間長(zhǎng),轉(zhuǎn)移少,尤其適合大批量集中制作[9]。Hu XB等[14]采用CT引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺注射瘤組織塊的方法建立兔VX2肺癌模型，成瘤率均為100%。LI X等[15]在CT引導(dǎo)下將載有VX2腫瘤組織懸液的親水凝膠接種于右肺內(nèi)建立兔肺腫瘤模型，成功率為72.2%(26/36)。

1.2.1.5單細(xì)胞懸液耳緣靜脈注射法 吳安樂(lè)等[16]采用IV型膠原酶解離釋放細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)后制成細(xì)胞懸液，經(jīng)耳緣靜脈注射建立轉(zhuǎn)移性肺癌模型，成功率尚可，但是方法較繁瑣，要求控制瘤細(xì)胞數(shù)量以及易發(fā)生感染。該方法目前已不常用。

1.3 兔VX2腎癌模型的建立

腎癌發(fā)病率居泌尿系腫瘤的第二位,且有逐年增高的趨勢(shì)。兔腎VX2腫瘤是目前唯一能在較大動(dòng)物體內(nèi)建立的可移植性腎腫瘤模型。該模型的成功建立,為人類對(duì)腎癌的研究提供了穩(wěn)定的大型哺乳動(dòng)物模型，為研究人類腎癌影像診斷和實(shí)驗(yàn)性治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)[17]。

1.3.1兔VX2腎癌模型的制作方法

兔VX2腎癌模型制作的常用方法主要有超聲引導(dǎo)下腫瘤細(xì)胞混懸液接種法,超聲或CT引導(dǎo)下腫瘤組織混懸液接種法，手術(shù)直視下組織塊包埋法及組織塊接種法。

1.3.1.1超聲引導(dǎo)下或直視下腫瘤細(xì)胞混懸液注射法 采用腫瘤細(xì)胞或懸液直接種植較費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，且混懸液制備復(fù)雜,價(jià)格昂貴，易接種失敗及種植成功率低，易發(fā)生轉(zhuǎn)移和針道種植等缺陷，使其在研究中的應(yīng)用受到限制。

1.3.1.2超聲或CT引導(dǎo)下腫瘤組織混懸液注射法 超聲引導(dǎo)下組織塊注射法需一定的經(jīng)驗(yàn)技術(shù),并要求兩人協(xié)作下才能保證種植成功;盡管經(jīng)B超引導(dǎo)穿刺種植微創(chuàng)，但模型成瘤后其瘤體形態(tài)極不規(guī)則,容易沿穿刺針道、腹腔、腹膜后廣泛種植。田海燕等[18]采用超聲引導(dǎo)下組織懸濁液注射法建立兔腎VX2腫瘤模型,動(dòng)物成瘤率約為94%，腹壁轉(zhuǎn)移率約為71%。蔡宇紅等[19]采用CT引導(dǎo)下VX2腫瘤組織混懸液穿刺種植法(改良法)建立兔VX2腎癌模型，成瘤性高，100%。

1.3.1.3手術(shù)直視下組織塊接種法 手術(shù)直視下組織塊接種法的優(yōu)點(diǎn)在于暴露腎臟種植,只要一次進(jìn)針就可以接種成功,避免了超聲引導(dǎo)下多次反復(fù)進(jìn)針對(duì)腎臟造成的損傷，可直接用明膠海綿加壓種植點(diǎn)止血,在防止腎包膜下血腫發(fā)生的同時(shí),也降低了腎外種植的發(fā)生率。She JJ等[20]采取手術(shù)直視下VX2瘤塊種植法建立兔VX2腎癌模型，成瘤率100%。

1.3.1.4手術(shù)直視下腫瘤組織塊包埋法 孫業(yè)全等[21]采取手術(shù)直視下VX2腫瘤組織塊包埋法建立兔VX2腎癌模型,成瘤率90%。

1.4 兔VX2乳腺癌模型的建立

乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康和生命安全的惡性腫瘤，在女性腫瘤死亡中占首位。乳腺癌動(dòng)物模型對(duì)提高乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究水平具有重要意義。在乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究中,有研究[22]表明兔乳腺VX2移植癌模型與人乳腺癌的生物學(xué)特征相似,腫瘤生長(zhǎng)在乳腺組織內(nèi),主要轉(zhuǎn)移至腋淋巴結(jié)和肺,適用于乳腺癌的治療性研究，是進(jìn)行乳腺癌實(shí)驗(yàn)研究的理想動(dòng)物模型。

兔VX2乳腺癌模型的制作方法有組織塊懸液注射法及小組織塊移植法。兩種方法成瘤都很高，以后一種方法常用。Wang L等[23]采用組織塊懸液注射法建立兔轉(zhuǎn)移性乳腺癌模型,成功率21 /23(91%)。王玲等[24]采用小組織塊移植法建立兔乳腺VX2移植癌模型，成功率100%。

1.5 兔VX2骨腫瘤模型的建立

多次實(shí)驗(yàn)證明，VX2腫瘤對(duì)骨質(zhì)有局限性侵犯及破壞作用,應(yīng)用其作為瘤源可模仿人體溶骨性轉(zhuǎn)移瘤[25]。因此，建立一個(gè)制作方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定可靠的，更接近于人體骨腫瘤的生物學(xué)環(huán)境，與人類骨腫瘤相似的兔VX2骨腫瘤動(dòng)物模型，對(duì)于今后骨腫瘤診斷與治療的研究有重要意義。

兔VX2骨腫瘤動(dòng)物模型的制作方法：將VX2腫瘤種植入兔長(zhǎng)骨骨髓腔及脊椎骨髓腔內(nèi)可建立VX2骨腫瘤模型。孫誠(chéng)等[25]采用腫瘤組織懸液建立長(zhǎng)骨兔VX2腫瘤模型,接種成功率高。張小玲等[26]通過(guò)改良的種植方法(VX2腫瘤懸液經(jīng)脛骨近端關(guān)節(jié)面穿刺將腫瘤種植在脛骨中上段的骨髓腔內(nèi))建立兔VX2骨腫瘤模型,成功率100%。

1.6 其他

近年來(lái)VX2腫瘤被廣泛用于各臟器及器官腫瘤模型的建立，有作者嘗試建立兔VX2的口腔癌[27]、舌鱗癌移植瘤[28、29]、鼻咽VX2移植癌[30]、子宮癌[31]、胸膜癌[32]、直腸癌[33]、胰腺癌[34]、腦腫瘤[37]、上腔靜脈[35]、梨狀窩癌模型[36]，取得了較滿意的效果，為研究相關(guān)腫瘤的生物學(xué)行為提供了臨床依據(jù)，提供了較理想的大型動(dòng)物模型。

2 總結(jié)

兔VX2動(dòng)物模型為誘發(fā)性同種移植轉(zhuǎn)移性癌模型，其瘤源VX2腫瘤細(xì)胞株起源于Shope病毒誘發(fā)的兔乳頭狀瘤衍生的鱗癌。VX2瘤株在其生化學(xué)、形態(tài)學(xué)和生物學(xué)行為上與人類惡性腫瘤具有較高的相似性，而且不會(huì)產(chǎn)生特異性的抗體，能較好的體現(xiàn)原位癌的特點(diǎn)。近年來(lái)VX2腫瘤被廣泛用于各臟器及器官的腫瘤模型的建立，獲得了較滿意的效果，為研究相關(guān)腫瘤的生物學(xué)行為提供了臨床依據(jù)，提供了較理想的大型動(dòng)物模型。兔VX2腫瘤模型已被廣泛應(yīng)用于腫瘤影像、治療及藥物代謝等方面的研究,尤其是近年來(lái)在腫瘤微創(chuàng)實(shí)驗(yàn)方面的應(yīng)用，取得了較理想的效果。隨著認(rèn)識(shí)的不斷深入，兔VX2腫瘤模型將會(huì)被應(yīng)用于更多的領(lǐng)域。

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