丹頂鶴人工授精的研究

何相寶，呂文鵬，李曉敏

（哈爾濱北方森林動物園，黑龍江 哈爾濱 150322）

丹頂鶴（Crus japonensis）屬鶴型目、鶴科鳥類，主要分布于我國東北地區(qū)及俄羅斯、日本和朝鮮，是我國一級保護動物。據(jù)估計，目前全世界丹頂鶴野外數(shù)量為2 500只左右，人工飼養(yǎng)數(shù)量約1 800只。關(guān)于丹頂鶴人工孵化和人工育雛的研究較多[1，2]，但對丹頂鶴進行人工授精的研究則較少[3]。人工授精技術(shù)的應(yīng)用不僅彌補了自然授精的不足，同時對人工飼養(yǎng)下丹頂鶴的種群增殖，基因保存及遺傳多樣性有著重要的意義。本文對丹頂鶴的人工授精技術(shù)進行了系統(tǒng)的研究，以求為丹頂鶴的人工增殖提供科學的依據(jù)。

1 人工授精前的準備

首先，選擇的雄鶴應(yīng)是體質(zhì)健康，羽毛豐滿，繁殖期頭部裸露皮膚呈鮮紅色，并有性行為表現(xiàn)的。采精的雄鶴和輸精的雌鶴要單籠飼養(yǎng)在較安靜的籠舍內(nèi)，避免外界干擾?；\舍不宜太大以便捕捉。采精和輸精前1天種鶴要停喂飼料和飲水，防止采精時污染精液。器材有集精杯（小量杯）、1 mL卡介苗注射器（1次性塑料注射器更好）、針頭、恒溫干燥箱、生物顯微鏡、蒸餾水、生理鹽水、脫脂棉等。人工授精器材不能用消毒液浸泡消毒，因消毒液如殘留在器具上能殺死精子。應(yīng)用清水或蒸餾水清洗干凈后，高壓滅菌消毒、干燥后備用。操作人員在采精（輸精）前要用碘溶液洗手消毒，防止疾病的傳播。

2 采精

2.1 采精方法

采精需要3人或2人進行。捕捉鶴時操作人員要精力集中，動作靈敏準確，以防止鶴及操作人員受到傷害。第1操作人員首先抓住鶴頭下方的頸部及一側(cè)翅膀的肱骨部位，然后倒跨在鶴的背上，使鶴背向操作者，夾在操作者雙腿間，將鶴固定住，鶴的雙翅放在兩腿外側(cè)，任其放松。按摩先從鶴體兩側(cè)開始，雙手從上往下按摩其背及股骨的外側(cè)。重復按摩幾次后，鶴表現(xiàn)出尾羽向上翹，泄殖孔外翻和收縮，并發(fā)出“咕咕、咕咕”低沉的叫聲。這時第2操作者站在鶴的尾部右側(cè)用手輕輕撫摸鶴的腹部幾次，然后將右手拇指與食指分開放在泄殖孔的下部，雙手指放在泄殖孔的周圍，同時輕輕向中間擠壓，鶴精液即排出。第3操作人立即用集精杯對準泄殖孔下部收集精液，再將泄殖孔殘留的精液刮入杯內(nèi)。在采精過程中要避免精液被糞尿污染，保證精液質(zhì)量。

2.2 采精時間

在人工飼養(yǎng)條件下，丹頂鶴的采精時間為每年的4月初至6月中旬；每次采精應(yīng)在上午6：00-9：00時進行，此時是鶴類發(fā)情的最佳時期。同時為了避免精液被污染，應(yīng)在喂食前采精。

2.3 精液品質(zhì)的評定

精液質(zhì)量是影響人工授精效果的重要因素，也是人工授精成功的關(guān)鍵。采到精液后，1～2 min內(nèi)完成檢測，觀察精液的濃度、色澤及清潔度。質(zhì)量好的精液呈半透明或灰白色，黏稠狀。如混有糞尿，則呈黃色。較稀薄的精液，質(zhì)量不佳。評定品質(zhì)時可取一滴精液（該精液是用1 mL卡介苗注射器按1∶10生理鹽水或經(jīng)稀釋液稀釋的精液），滴在載玻片上，用低倍鏡（400倍）檢查精子所占的百分比。

精液品質(zhì)標準分為 5個等級，用 A、B、C、D、E 來代表不同密度的呈直線前進的精子和污染程度。A級：精子密集，80%以上精子呈直線運動，無雜質(zhì)。B級：精子間稍有空隙，70%以上的精子呈直線運動，偶見畸形精子及極少雜質(zhì)。C級：精子間隙稍大，50%以上的精子呈直線運動，有少量畸形精子及少量糞尿雜質(zhì)成分。D級：精子量少，精子運動不活潑，畸形精子及雜質(zhì)較多。E級：偶見精子緩慢活動，雜質(zhì)極多。

2.4 精液稀釋與稀釋劑

一般人工授精多采取輸新鮮精液，采完精液立即輸精。所以多用生理鹽水或5%葡萄糖溶液做稀釋液。稀釋液的用量，可根據(jù)采到精液量的多少來決定稀釋液用量，一般為2～10倍。稀釋時，用消毒過的1 mL的卡介苗注射器注入2～10倍的稀釋液，抽吸2～3次，使精子均勻混入在稀釋液內(nèi)備用。

目前，用于鶴類的人工授精及精液的冷凍保存的稀釋液有美國帕圖克森特中心使用的貝茨維爾家禽精液稀釋液，簡稱BPSE液。另外，還有醋酸鹽（Acetate）稀釋液。

3 輸精及精液保存

3.1 輸精

輸精時采用A、B、C級精液，D級和E級不可用。輸精需兩人操作，用采精的方法捕捉保定雌鶴。當雌鶴出現(xiàn)類似雄鶴的反應(yīng)時，在泄殖孔的右上方可看到輸卵管末端開口（鮮紅海綿狀的組織）。右手將稀釋好精液的輸精器輕輕插入輸卵管口1～5 cm，然后將精液緩慢的推入，使輸卵管有足夠的時間接受輸入的精液并能吸入深處。關(guān)于給雌鶴進行輸精的部位正確與否，是提高人工授精成功率的關(guān)鍵。根據(jù)實踐證明，將精液輸?shù)酱弃Q輸卵管內(nèi)比輸?shù)叫怪城皇芫室?，每?天輸精1次（每周輸3次），在產(chǎn)卵的當天（最好產(chǎn)完卵后不超過12 h）就輸精，可保證較高的受精率。

3.2 精液的保存

3.2.1 冷凍保存技術(shù) 冷凍技術(shù)是將精液由液態(tài)變成固態(tài)。冷凍精液應(yīng)選擇無糞尿污染的精液，精子活力在0.7以上，精液量不能少于0.02 mL。稀釋液采用BPSE液，保護液選用二甲基亞礬（DMSO），分別以2%、4%、6%和8%的不同濃度，按稀釋后精液1∶2的比例做活力比較試驗。

3.2.2 精液的液態(tài)保存 將釋稀的精液在2～5℃低溫下保存，稱為液態(tài)保存。具體地說，精液液態(tài)保存方法是選擇一種精液稀釋液稀釋精液，然后將裝稀釋精液的容器用棉花包裹，放入2～5℃電冰箱中或盛有冰的保溫瓶中保存。實際工作中通常選用BPSE稀釋液，保存時間一般不超過24 h。

4 注意事項

要進行人工授精前的馴化工作。種鶴經(jīng)過馴化，方便捕捉，人工授精時比較配合，減低了鶴的應(yīng)激反應(yīng)，減少對鶴可能造成的傷害，有利于提高人工授精的質(zhì)量。

采精前一定讓鶴保持安靜，因受驚后往往采不到精液。大風、陰雨天停止采精。

采精人員須固定，不要經(jīng)常更換。因每個人的手勢和力度有所不同，更換人員易引起種雄鶴應(yīng)激而影響精液質(zhì)量，按摩刺激時應(yīng)適度。

[1] 李擁軍.丹頂鶴人工孵化的研究[J].中國家禽，2004，24（2）:19-20.

[2] 陳浩.丹頂鶴雛鶴的飼養(yǎng)技術(shù)[J].中國畜牧雜志，2002，（38）1:52-53.

[3] 謝高基.丹頂鶴人工授精的探索 [J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2005，276（1）:56-57.