基質(zhì)金屬蛋白酶-9及基質(zhì)金屬蛋白酶-2與卵巢上皮性癌血管生成的關(guān)系

孫麗君 武軍 李長江

新生血管不僅為腫瘤細(xì)胞的增殖提供養(yǎng)分，而且是腫瘤細(xì)胞進一步侵襲的重要途徑。近年來研究表明基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprotein，MMPs)在腫瘤血管生成中起重要作用［1］。本文采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法檢測卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表達(dá)，探討其與局部血管生成的關(guān)系，為臨床上進一步了解卵巢上皮性癌腫瘤血管生成情況提供幫助。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集河北省唐山市人民醫(yī)院1990至2005年卵巢上皮性癌初次手術(shù)切除標(biāo)本存檔蠟塊75例(卵巢上皮性癌組)，年齡36～62歲，平均年齡48歲;術(shù)前未做過任何化療和放療。按WHO分類標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)分類，漿液性癌27例，粘液性癌19例，子宮內(nèi)膜樣癌16例，透明細(xì)胞癌13例。按照FIGO分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期17例，Ⅲ期23例，Ⅳ期16例。隨機選取同期卵巢良性腫瘤樣本15例作為卵巢良性腫瘤組，年齡21～70歲，平均年齡39歲;因其他婦科良性疾病而行手術(shù)治療并在術(shù)中進行卵巢活檢的樣本12例作為對照組，年齡38～58歲，平均年齡46歲。

1．2 試劑 即用型鼠抗人MMP-9及MMP-2單克隆抗體(克隆號56-2A4)、SP免疫組化超敏染色試劑盒、二氨基聯(lián)苯氨(DAB)，均由美國Maxim公司生產(chǎn)，購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1．3 方法 采用免疫組化SP法檢測卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表達(dá)情況，步驟按說明書操作。MMP-9及MMP-2免去抗原修復(fù)步驟。MMP-9及MMP-2用DAB顯色。用已知陽性片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替第一抗體作為陰性對照。

1．4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) MMP-9及MMP-2的判斷標(biāo)準(zhǔn)參照江忠清等［2］的方法。

1．5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 10．0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料以ˉx±s表示，兩變量間的關(guān)系用線性相關(guān)分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織的表達(dá) MMP-9在正常組陽性表達(dá)2例，陽性率16．67%，良性組陽性表達(dá)8例，陽性率54．45%，惡性組陽性表達(dá)62例，陽性率82．67%，MMP-2在正常組陽性表達(dá)2例，陽性率16．67%，良性組陽性表達(dá)6例，陽性率40．00%，惡性組陽性表達(dá)67例，陽性率89．33%，從正常卵巢組織到卵巢良性腫瘤組再到卵巢上皮性癌組，MMP-9及MMP-2陽性表達(dá)率顯著升高(P ＜0．05)。

2．2 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組的表達(dá)與MVD的關(guān)系 在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當(dāng)MMP-9呈陰性表達(dá)時，MVD良性組中為(29±13)條，惡性組中為(39±18)條，當(dāng)MMP-9呈陽性表達(dá)時，MVD良性組中為(33±6)條，惡性組中為(38±10)條，當(dāng)MMP-9呈強陽性表達(dá)時，MVD良性組中為(51±12)條，惡性組中為(48±11)條。在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當(dāng)MMP-2呈陰性表達(dá)時，MVD良性組中為(21±10)條，惡性組中為(32±14)條，當(dāng)MMP-2呈陽性表達(dá)時，MVD良性組中為(32±5)條，惡性組中為(38±11)條，當(dāng)MMP-2呈強陽性表達(dá)時，MVD良性組中為(45±11)條，惡性組中為(47±11)條，由此可見，在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當(dāng)MMP-9及MMP-2呈陽性表達(dá)時，MVD顯著升高(前者 P ＜0．01，后者 P ＜0．05)。線性相關(guān)分析顯示MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌組中表達(dá)與MVD顯著正相關(guān)(r=0．286，P ＜0．05)。

3 討論

MMPs是蛋白水解酶中較為重要的一類，腫瘤細(xì)胞能分泌血管生成因子，如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)等，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生MMPs［1］，可見腫瘤細(xì)胞除能分泌MMPs外，還通過分泌促血管生成因子間接促進血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生MMPs，降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(BM)［3，4］，進而促進腫瘤新生血管的生成，MMP-9(92 kDa 4型膠原酶/明膠酶B)是MMPs中分子量最大的酶，以酶原形式分泌，需經(jīng)活化后才能發(fā)揮作用，其主要功能就是降解4、5型膠原和明膠，與腫瘤血管生成和侵襲轉(zhuǎn)移能力有關(guān)［5］。MMP-2是分子量為72 KDa的4型膠原酶，主要作用底物為4、5型膠原，主要由腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和炎性細(xì)胞分泌，研究表明其在腫瘤介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)降解中起關(guān)鍵作用［6］。而基底膜和基質(zhì)的降解對血管生成所必須的內(nèi)皮細(xì)胞遷移極為重要，MMP-2被認(rèn)為是腫瘤血管生成關(guān)鍵因素之一［7］。MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌的表達(dá)與局部腫瘤血管生成的關(guān)系，國內(nèi)少見報道。本文資料顯示，從正常卵巢組織到卵巢良性腫瘤組再到卵巢上皮性癌組，MMP-9及MMP-2陽性表達(dá)率顯著升高(P ＜0．05)。王喜梅等［8］報道，在卵巢上皮性癌中MMP-9陽性表達(dá)率顯著升高(P＜0．05)。本文結(jié)果與王喜梅等［8］及國外研究［7］的相符，進一步證實了MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌中過度表達(dá)，促進腫瘤性血管生成。故作者認(rèn)為，卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2表達(dá)高者，其腫瘤血管生成能力顯著增強。由此可見，卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2表達(dá)增強，可能與卵巢上皮性癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，檢測卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2的表達(dá)有助于進一步了解其腫瘤血管生成情況，有一定的應(yīng)用價值。

綜上所述，血管生成與婦科腫瘤發(fā)生發(fā)展及治療關(guān)系密切。明確卵巢上皮性癌中VEGF調(diào)節(jié)機制，特別是針對MMP-9及MMP-2與VEGF及其受體的研究，為臨床上進一步了解卵巢上皮性癌腫瘤血管生成情況提供幫助，為通過抑制血管生成過程從而達(dá)到抑制癌瘤生長和轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。

1 Folkman J．Tumor angiogenesis:therapeutic implication．N Engl J Med，1971，285:1182-1186．

2 江忠清．宮頸癌MMP-9表達(dá)與腫瘤血管生成，癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系．癌癥，2003，22:178-184．

3 Chambers AF，Matrisian LM．Changing views of the role of Matrix metalloproteinases in metastasis．J Natl Cancer Inst，1997，89:1260-1270．

4 Ray JM，Stetle-Stevenson WG．The role of matrix metalloproteinases and their inhibitors in tumer invasion，metastasis and angiogenesis．Eur Respir J，1994，7:2062-2072．

5 Aznavoorian S，Murph AN，Stetler-Stevenson WG，et al．Molecular aspects of tumer cell invasion and metastasis．Cancer，1993，71:1368-1383．

6 封國生，譚毓銓．基質(zhì)金屬蛋白酶及4型膠原酶在胃癌中表達(dá)及其意義．中華外科雜志，2000，38:775-777．

7 Rothenberg ML，Nelson AR，Hande KR．New drugs on the horizon:matrix metallop roteinase inhibitors．Stem Cells，1999，17:237-240．

8 王喜梅，孫雷，鄭仁恕，等．應(yīng)用組織微陣技術(shù)研究MMP-9與TIMP-1在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義．腫瘤防治研究，2005，32:484-486．