LightCycler480實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用

孫秋影,盧長(zhǎng)春,魏 強(qiáng),龐淑芬

(黑龍江省血液中心,黑龍江哈爾濱 150056)

輸血相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制已經(jīng)成為全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn),新技術(shù)的引進(jìn)是進(jìn)一步提高血液安全性的重要一環(huán)。應(yīng)用PCR進(jìn)行早期篩查主要是因?yàn)镻CR的高靈敏和短的窗口期。核酸檢測(cè)(NAT)是直接檢測(cè)病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱,靈敏度高,可檢出標(biāo)本中極微量的核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短病毒檢測(cè)“窗口期”,提高輸血安全性。

我站應(yīng)用 LC480系統(tǒng)進(jìn)行的 96或 384個(gè)樣本快速循環(huán)擴(kuò)增PCR反應(yīng)。通過(guò)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增時(shí)的熒光,可對(duì)產(chǎn)生的結(jié)果定量檢測(cè)和同時(shí)進(jìn)行分析。

LC 480儀器是一種具有實(shí)時(shí)在線檢測(cè)綜合能力的快速熱循環(huán)儀。安裝后能實(shí)施條件一致的 PCR,例如,同時(shí)擴(kuò)增和檢測(cè)靶核酸。通過(guò)加入雙鏈DNA特異性熒光染料或熒光基團(tuán)標(biāo)記的序列特異性寡核苷酸探針檢測(cè)靶核酸。這兩種途徑都能在擴(kuò)增時(shí)測(cè)量PCR產(chǎn)物,為定量 PCR的基礎(chǔ)。

我站采用了 HBV/HCV/HIV三聯(lián)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR),應(yīng)用DP1000上海科華生物工程有限公司的核酸提取儀,8人份血樣混合提取核酸,應(yīng)用 LightCycler·480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行HBV、HCV、HIV三聯(lián)檢測(cè),LightCycler·480PCR儀基于實(shí)時(shí)熒光 PCR反應(yīng)原理,能對(duì)靶核酸進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)。該儀器靈敏準(zhǔn)確自動(dòng)化程度高,操作維護(hù)簡(jiǎn)單方便,可檢出標(biāo)本中極微量的病毒核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短血液中病毒檢測(cè)的“窗口期”,極大提高了血液制品的安全的性,保證了輸血安全。應(yīng)用PCR進(jìn)行早期篩查主要是因?yàn)镻CR的高靈敏和短的窗口期,方法學(xué)能夠互補(bǔ),與酶免檢測(cè)互補(bǔ),可以避免亞型或免疫沉寂引起的漏檢。

為迎接 2009年在哈爾濱市召開(kāi)的世界大學(xué)生冬季運(yùn)動(dòng)會(huì),我站在 2008年應(yīng)用了核酸檢測(cè)技術(shù),為大冬會(huì)篩檢部分全血及成分血,為我省輸血事業(yè)的發(fā)展作出了貢獻(xiàn)。目前全國(guó)采供血機(jī)構(gòu)的血液制品傳染病指標(biāo)的檢測(cè)主要是使用ELISA方法,但受方法學(xué)的限制,其病毒檢測(cè)“窗口期”再縮短已經(jīng)很難,通過(guò)引進(jìn)病毒核酸檢測(cè)技術(shù)(NAT),將會(huì)大大減少輸血感染疾病的發(fā)生。衛(wèi)生部也在討論使用 ELISA和NAT兩種方法對(duì)發(fā)往臨床的血液制品進(jìn)行檢測(cè)。我站具有前瞻性,應(yīng)用此技術(shù),對(duì)推動(dòng)和提高采供血機(jī)構(gòu)的檢測(cè)能力具有重要影響。

我站于 2008年 2月至 2009年 3月正式應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù),開(kāi)展了部分全血及成分血的病毒核酸篩查工作,并在世界大學(xué)生冬季運(yùn)動(dòng)會(huì)期間,作為供血單位。我站為大冬會(huì)儲(chǔ)備的血液制品全部經(jīng)過(guò)核酸檢測(cè),使大冬會(huì)儲(chǔ)備血液制品與北京奧運(yùn)會(huì)的儲(chǔ)備血液制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一致。通過(guò)為世界性運(yùn)動(dòng)賽事提供醫(yī)療保障,大大提高了我站的檢測(cè)水平和能力。該技術(shù)的引進(jìn)及應(yīng)用有助于快速、準(zhǔn)確的篩查出標(biāo)本中極微量的核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短病毒檢測(cè)“窗口期”,提高輸血安全性,具有極好的社會(huì)效益。