子宮內(nèi)膜癌中c-erbB-2 p53 p73的表達(dá)及臨床意義

張潔 褚彩娟 張曉麗 張?zhí)m英

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)為女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一，占婦科腫瘤的20%～30%，近年來的發(fā)病率和病死率均有上升。如何能夠早期診斷及有效治療子宮內(nèi)膜癌，對提高子宮內(nèi)膜癌患者生存率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究通過對子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜非典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織中癌基因c-erbB-2及抑癌基因p73、p53的表達(dá)水平，探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，研究三者與子宮內(nèi)膜癌的病理分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移等的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 對象 選自2007年10月～2009年4月于濰坊市益都中心醫(yī)院婦科住院及門診患者，年齡35～71歲，中位年齡52歲。20例正常子宮內(nèi)膜組織、27例子宮內(nèi)膜不典型增生及39例子宮內(nèi)膜癌病例，所有診斷均經(jīng)病理證實(shí)；臨床及病理資料完整且術(shù)前均未接受化療、放療及激素類藥物治療。按FIGO(2000年)子宮內(nèi)膜癌分期，I期16例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例。組織學(xué)分類：高分化腺癌(G1)16例，中分化腺癌(G2)8例，低分化癌(G3)15例。肌層浸潤深度＜1/2者13例，≥1/2者26例。

1.2 方法 取各組標(biāo)本的石蠟切片，應(yīng)用S-P免疫組織化學(xué)方法，測定標(biāo)本中C-erbB-2、P53、P73蛋白的表達(dá)情況，并將其與手術(shù)-病理分期以及肌層浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等高危因素進(jìn)行相關(guān)性分析。c-erbB-2、p53抗體鼠抗人單克隆抗體、p73抗體，購自武漢博士德生物工程有限公司；用PBS液取代第一抗體標(biāo)記作陰性對照，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判定 c-erbB-2基因的蛋白產(chǎn)物位于細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)，低倍鏡(×100)下選擇染色最滿意處后在高倍鏡(×400)下任選10個視野，計數(shù)陽性細(xì)胞百分比，平均每高倍鏡視野的陽性染色細(xì)胞數(shù)按百分比計數(shù)為0、＜50%、50%～75%、≥75%分別歸為“-”、“+”、“++”、“+++”四組。將“-”和“+”判定為陰性表達(dá)組，將“++”“+++”判定為陽性表達(dá)組。

結(jié)果判定P73蛋白陽性為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均見棕褐色顆粒，P53蛋白陽性為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒，少數(shù)細(xì)胞質(zhì)可有微弱表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0處理數(shù)據(jù)，采用x2檢驗(yàn)或四表格確切概率法，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜組織中癌基因c-erbB-2的表達(dá) 研究表明，c-erbB-2在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜非典型增生組織中均有表達(dá)，但陽性表達(dá)率較低，分別為5.0%和14.41%；而在子宮內(nèi)膜癌中，c-erbB-2的陽性表達(dá)率為53.85%，明顯高于正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜不典型增生。x2值=10.28，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

在低分化的子宮內(nèi)膜癌組織c-erbB-2蛋白的表達(dá)高于高分化組(x2=7.496，P＜0.05)。手術(shù)-病理分期Ⅲ期和Ⅳ期子宮內(nèi)膜癌患者組織中c-erbB-2的陽性表達(dá)明顯高于I期和Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者(x2=6.990，P 0.01)，差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。c-erbB-2蛋白在肌層浸潤＜1/2的子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與在肌層浸潤≥1/2癌組織中的表達(dá)率有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(x2=9.882，P 0.01)。c-erbB-2表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組織中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性與陰性之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=8.414，P＜0.01)。

2.2 p53基因在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況及p53表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)-病理之間的關(guān)系 本研究結(jié)果顯示，p53在正常子宮內(nèi)膜組織中無表達(dá)，在子宮內(nèi)膜非典型增生組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)分別是18.52%、58.97%(x2=4.648，P 0.05)。差異有統(tǒng)計學(xué)意義。p53在子宮內(nèi)膜癌組織中其組織學(xué)分級越高陽性表達(dá)率越高，手術(shù)-病理分期Ⅲ期和Ⅳ期子宮內(nèi)膜癌患者組織中p53的陽性表達(dá)明顯高于I期和Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者(x2=7.416，P 0.01)，差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。p53在肌層浸潤＜1/2的子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與在肌層浸潤≥1/2癌組織中的表達(dá)率有統(tǒng)計學(xué)差異(x2=3.956，P 0.05)。與脈管浸潤無關(guān)。

2.3 p73基因在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況及p73表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)-病理之間的關(guān)系 p73在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)分別是5.00%、18.51%、56.41%(x2=9.78，P 0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果顯示P73蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型、手術(shù)-病理分期以及肌層浸潤均有相關(guān)性，而與脈管浸潤無關(guān)。

3 討論

c-erbB-2是編碼酪氨酸激酶類的癌基因，是編碼一個分子量為185kD的跨膜糖蛋白，與表皮生長因子受體同源，該蛋白具有酪氨酸激酶活性，它在控制上皮細(xì)胞生長、分化、黏附和活動等細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路的活化上起重要作用。在基因水平干預(yù)C-erbB-2基因表達(dá)，將會增加腫瘤細(xì)胞的致瘤性和對化療的耐藥性。

研究發(fā)現(xiàn)，c-erbB-2在多種惡性腫瘤包括子宮內(nèi)膜癌中過度表達(dá)，并與不良預(yù)后有關(guān)，在子宮內(nèi)膜癌患者中c-erbB-2過度表達(dá)率約40%～50%[1-2]。在正常的子宮內(nèi)膜中，c-erbB-2蛋白無表達(dá)或低表達(dá)，16.7%～26.7%隨著子宮內(nèi)膜的不典型增生中發(fā)展到子宮內(nèi)膜癌，c-erbB-2的表達(dá)率逐漸增高[3-4]。c-erbB-2基因表達(dá)越高，提示預(yù)后不良及對各種治療的抵抗性。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在對照組正常子宮內(nèi)膜組織中c-erbB-2的陽性表達(dá)率為5%，子宮內(nèi)膜非典型增生的陽性表達(dá)率為14.41%，而c-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為53.85%，明顯高于前兩者，差異有顯著性(P＜0.05)，提示在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生中，c-erbB-2可能起重要作用。

關(guān)于p53在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與病理及預(yù)后有相關(guān)報道，p53基因被認(rèn)為是惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展的主要原因。有研究表明p53基因發(fā)生于子宮內(nèi)膜癌晚期。在病理分級1級、Ⅱ～Ⅲ級中二者相比差異有顯著性，病理分級越高、p53表達(dá)越高。本研究顯示，抑癌基因p53陽性率與手術(shù)-病理分期、組織分級、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與脈管浸潤無關(guān)。p53在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率逐漸增高，有統(tǒng)計學(xué)意義。故內(nèi)膜癌組織中p53的表達(dá)強(qiáng)度可作為判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一

近年報道抑癌基因p73在多種腫瘤組織中表達(dá)明顯升高，但在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)報道很少。Kaghad等在研究腫瘤細(xì)胞系及正常人體組織p73基因表達(dá)時發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞系p73基因呈高表達(dá)，而正常人體組織呈低表達(dá)。研究結(jié)果顯示P73蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型、手術(shù)-病理分期以及肌層浸潤均有相關(guān)性，這表明p73基因表達(dá)上調(diào)是子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中的一個常見事件，可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。

腫瘤的發(fā)生是一個多步驟、多基因協(xié)同作用的結(jié)果，單一癌基因結(jié)構(gòu)、功能的改變不足以引起腫瘤的發(fā)生，一般需要兩個或兩個以上基因的協(xié)同作用。本研究結(jié)果表明，c-erbB-2、p53與p73在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生及子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率逐漸增高，有顯著性差異。c-erbB-2、p53與p73在子宮內(nèi)膜癌中手術(shù)-病理分期越晚、肌層浸潤越深及組織分級越高，其陽性表達(dá)率越高，說明三者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。這必將有助于提高對子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)一步認(rèn)識，為子宮內(nèi)膜癌患者的治療提供新的理論依據(jù)。

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