HPLC法測定健胃消食片中橙皮苷的含量

葉鵬

健胃消食片由太子參、陳皮、山藥、麥芽(炒)、山楂五味藥制成，具有健胃消食之功效, 用于脾胃虛弱所致的食積，癥見不思飲食、噯腐酸臭、脘腹脹滿；消化不良見上述證候者。本藥為2005年版《中國藥典》一部收載品種[1]。在藥典含量測定項(xiàng)中規(guī)定其流動相為甲醇-0.5%冰醋酸(40：60)。實(shí)際工作中，當(dāng)我們需要長時(shí)間運(yùn)行色譜儀以檢驗(yàn)多批樣品時(shí)，冰醋酸的揮發(fā)性會在一定程度上帶來色譜條件的波動，從而影響色譜峰的分離效果，如改用不具有揮發(fā)性的磷酸，則可以改善色譜條件的波動性。筆者通過方法學(xué)試驗(yàn)證明了這種改動的可行性。實(shí)踐證明新方法準(zhǔn)確、可靠，可以更好地控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量,保證臨床用藥的安全有效。

1 儀器與試藥

島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-6A紫外檢測器，N2000色譜工作站; AL 104 電子分析天平(Mettler Toledo)；橙皮苷對照品(供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號：0721-200010)，健胃消食片(自制，0.5g/片，批號：070601、070602、070603)；乙腈(色譜純)，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS(150mm×4.6mm,5μ)；流動相：乙腈-0.2%磷酸(20：80，v/v);檢測波長：283nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量20μl；理論塔板數(shù)按橙皮苷色譜峰計(jì)算不低于2000。

2.2 專屬性試驗(yàn) 對照品溶液的制備：取橙皮苷對照品12.5mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取3ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含橙皮苷15μg)。

供試品溶液的制備：取本品10片，研細(xì)，取約2g，精密稱定，精密加入甲醇20ml，稱定重量，置水浴上加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照液的制備：按制備工藝制備不含陳皮的陰性顆粒，取適量，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照液。

取橙皮苷對照品溶液、健胃消食片供試品溶液、陰性對照液，分別注入液相色譜儀，繪制圖譜，結(jié)果表明，處方中其它藥味及輔料對橙皮苷的檢出無干擾(見圖1)。

2.3 線性范圍 精密稱取橙皮苷對照品7.34mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，做為儲備液。吸取儲備液適量，加50%甲醇配制成濃度為73.40μg/ml的溶液。分別精密吸取2μl、4μl、6μl、8μl、10μl該溶液，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定色譜峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，得到回歸方程：y=959216×-824.19，r=0.9998。測定結(jié)果表明：橙皮苷進(jìn)樣量在0.1468μg～0.7340μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取濃度為14.68μg/ml的橙皮苷對照品溶液20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按前述色譜條件進(jìn)樣分析，測定色譜峰面積，RSD為1.75%，表明儀器精密度良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液20μl，分別在0、1、2、4、6、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測定色譜峰面積，RSD為1.65%，表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批健胃消食片(批號：070601)，按“2.2”項(xiàng)下平行制備供試品溶液6份，按上述色譜條件測定樣品中橙皮苷的含量。平均含量為0.1905mg/片，RSD為1.05%，符合相關(guān)規(guī)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(070601)細(xì)粉6份，每份1g，分別精密加入橙皮苷對照品溶液2.0ml(146.8μg/ml)，按供試品溶液制備方法操作，進(jìn)樣20μl，測定加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 三批樣品含量測定結(jié)果

2.8 樣品含量測定 取不同批號樣品三批, 按供試品溶液制備方法操作，精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計(jì)算各批樣品的橙皮苷含量，結(jié)果見表2。

3 討論

試驗(yàn)比較了甲醇-磷酸水，乙腈-磷酸水系統(tǒng)及不同濃度乙腈-磷酸水的分離效果，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動相為乙腈-0.2%磷酸(20：80，v/v)時(shí)，分離效果最好，而且保留時(shí)間適宜，峰形對稱。

由于中藥的成分眾多復(fù)雜，中藥復(fù)方制劑的HPLC圖譜中常常會出現(xiàn)很多色譜峰，因此色譜分離條件必須滿足專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高，準(zhǔn)確度高等要求。本試驗(yàn)中筆者嘗試采用不具有揮發(fā)性的磷酸代替冰醋酸，從而改善色譜條件的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。此舉不僅可以更好地控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，還為將來建立該制劑的HPLC指紋圖譜積累了經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.567.