新近發(fā)現(xiàn)的人畜共患病原菌-豬螺桿菌Helicobacter suis*

楊文友,秦智勇,劉 闖,王汝毅

(涪陵檢驗(yàn)檢疫局,重慶市涪陵區(qū)408000)

豬螺桿菌(Helicobacter suis,HS)是新近從豬胃組織分離發(fā)現(xiàn)的不同于幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)的螺桿菌屬的一新菌種[1]。很多研究

1 歷史回顧

在貓、狗和猴等多種動(dòng)物胃內(nèi)發(fā)現(xiàn)存在螺旋樣細(xì)菌(Gastrospirillum),被認(rèn)為是居棲于胃底腺區(qū)的正常菌群,無病原學(xué)上的意義[4]。但是,自Warren J R等在活動(dòng)性潰瘍性胃炎病人胃黏膜上發(fā)現(xiàn)彎曲樣桿菌來,并證實(shí)系胃炎、胃潰瘍、胃淋巴組織淋巴瘤等發(fā)病原因[5],進(jìn)而引起在人類胃病發(fā)生原因和防治等重大變革。Mendes E N等[4]應(yīng)用透射電鏡技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)豬胃竇凹陷部位存在螺旋樣菌,并命名為豬胃螺旋菌(Gastrospirillum suis),它不同于人幽門彎曲桿菌(Campylobacter pylori)或幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)。Queiroz D M M等[6]有類似的發(fā)現(xiàn)。由于PCR技術(shù)、基因序列分析和分子生態(tài)等技術(shù)的應(yīng)用,將彎曲桿菌屬(Genus Campylobacter)修正為新的螺桿菌屬(Genus Helicobacter),同時(shí),將豬胃螺旋菌更名為暫定豬螺桿菌(Candidatus Helicobacter suis)[8]。與人胃螺桿菌I型(H.heilmanniiⅠ)類似(Queiroz D M M等,1990[6];Cantet F等[7],1999)?；蛐蛄蟹治雠cH.heilmannniiⅠ型同源99.5%[8]。后來,O‵Rourke J L等[9]也證實(shí)此菌與H.heilmannniiⅠ型有較高的同源性,視為同一菌種。但期間,其命名較為混亂,有稱非幽門螺桿菌胃螺桿菌(Gastric non-H.py lori helicobacters,GNHPH)[3];非幽門者研究證實(shí),此菌是豬胃(食管區(qū))潰瘍病的新病因[2],在人胃病例中也有發(fā)現(xiàn),是一個(gè)新的公共衛(wèi)生問題[3]。本文就國外豬螺桿菌相關(guān)研究進(jìn)行綜述。螺桿菌性螺桿菌(Non-helicobacter pylori helicobacter,NHPH)[10],幽門樣螺桿菌(Helicobacter pylori-like bacteria,HPLB)[11],胃螺旋樣菌(Gastrospirillum-like organisms,GLOs)[12],螺桿菌樣菌(Helicobacter-like organisms,HLOs)等[13]。最新將其命名為豬螺桿菌(Helicobacter suis sp.nov.)[1]。

2 病原學(xué)

用病理組織形態(tài)學(xué)方法對螺桿菌研究報(bào)告較多[2-3,5,22-33]。Roosendaal L D等[14]對122頭屠宰豬中的胃竇部和食管部112份樣本螺桿菌培養(yǎng),均未成功。因長期體外培養(yǎng)不成功[2,4,8,14],影響對其形態(tài)深入系統(tǒng)的研究。直到2008年才取得突破[1]。

2.1 形態(tài)特征

Baele M等[1](2008)首次成功從豬胃炎和胃食道部潰瘍部位分離3菌株(HS1、HS2和HS3)豬螺桿菌(H.suis)。菌體呈多至6個(gè)緊密盤繞螺旋樣,長約2.3 μ m～6.7 μ m,寬約0.9 μ m～1.2 μ m,無周質(zhì)纖毛。革蘭染色陰性,不形成孢子。菌體兩端4-10個(gè)有鞘鞭毛叢,極強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)性,鞭毛末端飩狀,部分呈球節(jié)狀,大于鞭毛體平均直徑2倍。老培養(yǎng)物,菌體多呈球狀。

2.2 培養(yǎng)及生化特征

在添加20%胎兒牛血清或10%去纖維馬血的BHI瓊脂,布氏瓊脂和Mueller-Hinton瓊脂生長。在微氧條件生長,在5%CO2條件下不生長。厭氧條件生長緩慢,37℃生長良好,25℃和42℃不生長。在1.5%NaCl,1%氨基乙酸,1%牛膽汁或5μ g/mL—1甲硝達(dá)唑培養(yǎng)基中不生長。氧化酶,過氧化氫酶,尿素酶陽性。T TC、脂酶減少。γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶,L-精氨酸芳基酰胺酶和堿性磷酸酶活性強(qiáng)。不水解馬尿酸鹽和吲哚醋酸鹽,硝酸鹽量不減少。不產(chǎn)生吡咯烷酮芳基酰胺酶,L-天冬氨酸芳基酰胺酶(Baele M等[1],2008)。

2.3 分子生物學(xué)特征

Baele M等[1](2008)應(yīng)用16S rRNA基因測序方法,FISH和電子顯微鏡技術(shù)證明分離的3株豬螺桿菌不同于已報(bào)告的螺桿菌屬的其它細(xì)菌,屬于新菌種。按Qiqgen Taq Mastermix試劑盒操作手冊,對3株菌株制備測定DNA基因序列抽提物。參照De Groote D等[8](1999)PCR擴(kuò)增Can H suis的16 S rRNA的433 bp基因片斷。三菌株間,和與Can H.suis菌株的同源性均大于99%。與此相近的菌株是CanHheilmannnii,H.felis,H.bizzozeronii,H.salomonis和H.cynogastricus,同源性僅在94.4%～96.2%,差異性是顯著的。Ure-A和UreB基因片斷用U430F和U 1735R引物按O‵Rourke等[9](2004)方法擴(kuò)增,結(jié)果3菌株UreAB基因序列與Can H suis 94～99%相同。系統(tǒng)發(fā)育樹中最鄰近的菌株是H heilmannii 2型(現(xiàn)命名為Can H.heilmannii)和H.bizzozeronii,大約82%同源。與H.felis同源79%,H.salomonis和H.baculi formis同源78%,H.cynogastricus同源77%。

HS1、HS2、HS3的PAGE蛋白圖譜同源性大于90.6%,明顯的不同于其他菌種。此菌株的基因指紋圖譜AFLP也明顯不同于其他菌株。Hsp60基因(編碼60 ku心休克蛋白),UreAB基因(編碼尿酶A和B亞蛋白)的同源性弱于16 S rRNA測序。

O‵Rourke J L等[9](2004)從3例患病者和4頭豬通過接種SPF鼠分離的非幽門螺旋桿菌株(NHPH)的16SrRNA基因和部分ureA和ureB基因序列分析,具有極高同源性,≥99.3%。這一結(jié)果與Baele M等[1]相一致。

Cantet F等[7](1999)對48株陽性菌株P(guān)CRRFLP法基因序列分析,分為4個(gè)群別,5個(gè)豬場的菌株鑒定為H.heilmanniiⅠ型,1個(gè)豬場的菌株鑒定為H.heilmanniiⅡ型。后來,Choi Y K等[15]對102份PCR豬螺桿菌陽性樣本PCR-RFLP分析,也出現(xiàn)4種不同類型,MN1型32份,MN2型16份,MN3型43份,MN4型11份。4種類型的菌與H.f lexispira taxon3、H.sp.MIT94022(從嚙齒動(dòng)物分離到)、MZ640285(從人)和H.suis的同源性為97.3、95.4、96.7和99.5%。與H.pylori特異性引物無反應(yīng)。Roosendaal L D等[14]報(bào)告,80份樣本中,螺桿菌PCR屬特異性陽性54份,43株屬H.heilmannii菌,其中I型42株,Ⅱ型1株。

Krakowka S等[11]在2005年從自然感染豬分離到彎曲樣螺桿菌,它又不同于致密盤繞的豬螺桿菌(H.suis)。此菌形態(tài)上與幽門螺桿菌相似,但抗原性不同。迄今,幽門螺桿樣(H.pylori-like)細(xì)菌的基因圖尚未獲得,也未獲得進(jìn)一步的研究成果。

Flahou B等[39]用鼠為模型,研究了H.suis的免疫保護(hù)性,結(jié)果此菌與螺桿菌屬其他菌種有部分保護(hù)反應(yīng),也證明H.suis菌種為新的不同菌種。

2.4 細(xì)菌在胃內(nèi)的分布

Queiroz D M M等[16](1996)報(bào)告從正常胃食道部螺桿菌分離率30%,而病變區(qū)則達(dá)90%。但并不存在于病灶內(nèi)。此菌主要居棲在胃竇部,胃底部凹陷腔內(nèi)黏膜表層,胃食管區(qū)細(xì)胞外。賁門部位也可分離到病菌。極少在胃腺體腔內(nèi)分離到細(xì)菌(Hisayuki T等[17],2001)。Ramsi G等[13]從1998年—2005年的研究,胃底部,賁門部和幽門部均分離到該菌,感染率也逐年相應(yīng)增加。Cantet F等[7]應(yīng)用組織學(xué)方法證實(shí),賁門腺區(qū)螺桿菌占58.3%(35/60),胃底部43.3%(26/60),幽門腺區(qū)50%(30/60)。Fabisiak M等[18](2006)在29個(gè)胃樣本中,100%在胃分離到螺桿菌屬細(xì)菌,其中胃食管區(qū)陽性26份,胃底部23份,幽門部25份。Can H.suis分離率45%(13份),其中胃食管區(qū)4份陽性,胃底部8份,幽門部12份。也有研究此菌大多分離于胃食道部(Pirarat N等[19],2008)。16頭免疫組織化學(xué)螺桿菌陽性豬中,13頭從胃食道部分離此菌?；诖司膹?qiáng)運(yùn)動(dòng)性,在實(shí)驗(yàn)豬或自然感染豬的胃體細(xì)胞小管內(nèi)、胃黏膜表層均可觀察到病原菌(Hellemans A等[20],2007)。實(shí)驗(yàn)室感染胃螺桿菌主要居棲胃竇和胃底部,其次是賁門部(Hellemans A K等[2],2007)。應(yīng)用PCR法在胃食道部檢測到豬螺桿菌(Roosendaal R等[14],2000)。

3 流行病學(xué)

豬螺桿菌多從豬胃分離到,但分離率因不同國家的不同研究者所采用的方法不同,研究對象不同,胃內(nèi)部位不同,其結(jié)果差異較大。屠宰豬胃H.suis感染率8%～95%不等,大多數(shù)報(bào)告60%或多(Baele M等[10],2009)。Cantet F等[7]對來自6個(gè)農(nóng)場的60頭(每一豬場10頭)豬,用組織學(xué)方法檢測螺桿菌感染情況,檢出39頭,陽性率65%,賁門腺區(qū)陽性率58%,而在同一部門用螺桿菌屬引物PCR法檢出48頭陽性,檢出率為80%。ChoiY K等[15]的研究結(jié)果,證明豬胃內(nèi)豬胃存在多種螺桿菌屬的細(xì)菌,顯示其復(fù)雜性。

Kolodzieyski L等[12]采用3種方法從動(dòng)物胃樣分離GLOs,104份豬胃樣品中尿素酶陽率為31.7%(33),布氏細(xì)胞學(xué)方法GLOs陽性率37.5%,電鏡技術(shù)形態(tài)學(xué)檢測陽性率與布氏細(xì)胞學(xué)方法一致。47頭豬(70.1%)螺桿菌PCR檢測陽性,其中糜爛和潰瘍病例螺桿菌分離率高,分別是40.2和11.9%(Yamasaki L等[22],2009)。Choi Y K等[15]對40個(gè)豬胃食道部病變(0示正常,1示不全角化,2示糜爛,3示潰瘍)的160個(gè)檢測樣PCR分析,102份樣品中豬螺桿菌分離率63.8%。不同病變類型的分離率不同,分別是22.5(0),52.5(1),85.0(2)和95.0%(3)。分離率較高的有80%[7]和86.6%(Thiberge J M等[23],1997),較低的有10.8%(Queiroz D M M等[6],1990)和9.4%(Grasso等[24],1995)。Queiroz D M M等[16]報(bào)告,100%從潰瘍病豬胃,90%從潰瘍前病變胃分離到螺桿菌,正常胃食管區(qū)分離率僅為35%。Barbosa A J等[25]分別檢查32頭胃食管區(qū)正常和潰瘍病變豬,40頭H.heilmannii陽性。其中,67.5%于病變豬分離,32.5%于正常的部位分離到。24頭豬未分離到細(xì)菌,其中,5頭潰瘍病例,占20.8%,19頭正常豬,占79.2%。Melnichouk S L等[26]研究發(fā)現(xiàn)3/4群豬螺桿樣微生物陽性,從飼料直接置于地板飼喂育肥豬群中,87%分離到此細(xì)菌。De Groote D等[28]應(yīng)用3種不同技術(shù)對來自比利時(shí)、荷蘭兩國的屠宰豬胃竇部Can H.suis的分離,200份樣品中,用PCR結(jié)合Southern blot雜交技術(shù)檢測到154份陽性,分離率77%;免疫組織化學(xué)法檢測111份陽性,分離率56%;尿素酶活性法檢測陽性樣本數(shù)分別為122份(培養(yǎng)20 hs后),分離率61%和71份(培養(yǎng)3 hs后),分離率36%;Giemsa染色法檢測65份陽性,分離率33%。Hellemans A等[2]應(yīng)用PCR法對22不同群別的457頭豬檢測到胃竇和底部Can H.suis菌,222頭豬尿素酶陽性,哺乳前,分離率極低,一經(jīng)哺乳,分離率明顯增加。至成年公豬和母豬時(shí),感染率達(dá)90%,不同年齡的豬感染率不一致。Hisayuki T等[17]在日本一屠宰場檢查臨床健康豬120頭,30頭潰瘍(25.0%)和41頭糜爛(34.2%)。21頭胃GLO陽性,8頭(26.7%)呈現(xiàn)潰瘍,9頭(22.0%)呈現(xiàn)糜爛,2頭(9.5%)呈現(xiàn)慢性胃炎,2頭(7.1%)胃黏膜正常。Ramsi G等[13]報(bào)告,通過3次長達(dá)7年對西班牙東南地區(qū)的屠宰豬胃黏膜螺桿樣菌檢測,1998年感染明顯低于2000年,2005年,分別為57.14、82.66和85%,后兩次研究結(jié)果比1998年分別增加25.52和27.86%,其原因是歐盟從1998年始禁用抗菌素為生長促進(jìn)后所致。胃賁門區(qū)和無腺區(qū)感染率增加。HLOs感染率與品種(Iberian、Landrace和Duroc)無關(guān)系。

Roosendaal R等[14]選取41頭豬,其中21頭為試驗(yàn)組,另20頭為對照組,試驗(yàn)組15頭檢測出陽性,對照組7頭陽性。16 S rDNA基因序列分析,7/14PCR陽性菌株屬H.heilmanniiⅠ型,認(rèn)為此菌是豬胃主要菌種。

鼠或SPF鼠人工感染成功(O‵Rourke J L[9],2004;Park J H等[21],2003)。野鼠可能成為本菌貯藏主或感染源(Hellemans A A等[30],2005)。Hellemans A等[2]應(yīng)用Can H.suis感染鼠后,以鼠胃均質(zhì)物人工感染豬成功,對照組未檢測出本菌。

此菌在自然條件下毒力等特性研究尚未見報(bào)告。目前對此菌的研究不多,加上命名尚未統(tǒng)一,研究方法的不同,導(dǎo)致其結(jié)果的可參照性差。

4 致病性

4.1 豬

受人類細(xì)菌感染為消化性胃潰瘍的可能病因,大量研究者試圖去檢測豬是否有類似的發(fā)病機(jī)制。起初認(rèn)為豬病灶微生物的存在認(rèn)為是繼發(fā)感染。然而,近年來大量研究證實(shí),豬螺桿菌與豬胃食管區(qū)(非腺區(qū))和胃炎有強(qiáng)的相關(guān)性(Queiroz D M M等[16],1996;Hisayuki T等[17],2001;Yamasaki L等[22],2009)。實(shí)驗(yàn)室感染和自然感染發(fā)生胃炎病例(Grasso G M等[24],1996;Hellemans A K等[2],2007;Mendes E N等[31],1991;Park J H等[32],2000;Queiroz D M等[16],1996)。此菌與單一的胃食道部(無腺區(qū))潰瘍病也有密切關(guān)系(Barbosa A J等[25],1995;Roosendaal L D等[14],2000;Choi Y K等[15],2001)。但具體的作用機(jī)制尚需研究。值得注意的是,也有研究者尚未發(fā)現(xiàn)胃螺桿菌與胃食道部潰瘍病的相關(guān)性,幽門螺桿菌定殖于豬胃長達(dá)6個(gè)月并沒有發(fā)生胃潰瘍,有時(shí)未能分離到該菌,同時(shí)也認(rèn)為不是一個(gè)公共衛(wèi)生問題(Grasso G M等[24],1996;Melnichouk S L等[26],1999;2007;Ramsi G等[13],2007)。Pirarat N等[19]在泰國對115頭豬采用Warthin Starry染色法和免疫組織化學(xué)方法研究豬螺桿菌與豬胃潰瘍病關(guān)系,結(jié)果分離率分別為16.52%(19)和13.91%(16),沒有發(fā)現(xiàn)其相關(guān)性,也沒有發(fā)現(xiàn)胃食道部潰瘍與有腺區(qū)潰瘍的關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果的差異的原因可能是各實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)的差異,或抽樣方法的不同,或菌株間毒力的差異。

Clark L K等[33]首次報(bào)告了早期隔離斷奶豬人工感染H LOs結(jié)果,24頭10日齡豬平分2組,接種含H LOs的鼠胃組織懸液,經(jīng)過黏膜細(xì)胞學(xué)、尿素酶和組織病理學(xué)方法證實(shí),此菌人工復(fù)制豬胃潰瘍病。Haesebrouck F等[3]介紹了Meyns T等(未發(fā)表資料)對豬螺桿菌的致病性系統(tǒng)研究結(jié)果。實(shí)驗(yàn)選用14頭未感染豬螺桿菌的6周齡仔豬,9頭用灌胃法接種純豬螺桿菌培養(yǎng)物。5頭腿部接種作為對照組。同一粉碎飼料飼喂,試驗(yàn)組全部發(fā)生胃食道部不全角化和潰瘍病變,對照組則未發(fā)生病變。

澳大利亞報(bào)告商品豬胃(食管區(qū))潰瘍病高達(dá)80%(Robertson L D等[34],2002)。許多國家報(bào)告豬胃(食管區(qū))潰瘍病呈較高發(fā)病率,如荷蘭母豬胃病變率60%,豬胃潰瘍發(fā)病率10%～15%(Friendship R M[35],2004)。本病可導(dǎo)致豬疼痛和不適,攝食量減少,飼料體重比降低,或甚至死亡,對養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[35]。

由于細(xì)菌在胃分布的廣泛性,不能確定細(xì)菌之毒素是其發(fā)病機(jī)制,可能系本菌感染后,刺激胃細(xì)胞過度分泌胃酸所致(Queiroz D M M等[16],1996)。并被Sapierzynski R等[36]研究證實(shí),豬螺桿菌感染豬產(chǎn)胃泌素細(xì)胞量增加,產(chǎn)生長激素抑制釋放因子細(xì)胞減少,因?yàn)榍罢呤谴碳?后者是抑制壁細(xì)胞分泌鹽酸,導(dǎo)致過量的酸存在而產(chǎn)生潰瘍病變。但Silva J C等[37]在患胃食道部潰瘍病豬飼喂后,血清中胃泌素濃度并未增加。6頭悉生仔豬實(shí)驗(yàn)感染幽門螺桿樣菌(HPLB),成功復(fù)制豬胃(食道部)潰瘍病(Krakowka S等[11],2005),認(rèn)為此菌在高能飼料飼喂條件下,極易發(fā)生胃食管區(qū)潰瘍。業(yè)已證實(shí),豬螺桿菌對于豬胃潰瘍病的發(fā)生具有促進(jìn)作用(Choi Y K等[15],2001)。

人工和自然豬螺菌桿菌病例胃黏膜呈紅色,變性,水腫,或糜爛,出血或胃炎。偶伴有胃底部皺褶壞死性增生,重度黏膜充血。胃食管區(qū)不全角化,呈黃色,糜爛、潰瘍或慢性潰瘍[1,35]。病理組織學(xué)變化表現(xiàn)為胃食道部上皮變厚,肥大,表層上皮細(xì)胞糜爛,乳突變長,角化不全,氣球樣細(xì)胞,或慢性消化性潰瘍,壞死層有大量炎性細(xì)胞,少量嗜中性細(xì)胞,肉芽組織和纖維化。伴胃竇部固有層中度單核細(xì)胞浸潤,淋巴細(xì)胞聚集或淋巴濾泡形成。螺桿菌與胃食道部潰瘍有顯著的相關(guān)性(Barbosa A J A等[25],1995;Queiroz DM M等[16],1996;Choi Y K等[15],2001)。Davies P R[38]發(fā)現(xiàn)豬胃潰瘍病(不全角化、糜爛、潰瘍和疤痕)的出現(xiàn)早于炎癥變化,與人類發(fā)生幽門螺桿菌引起的胃潰瘍是由初期的胃炎所致相反。Yamasaki L等[22]報(bào)告67頭屠宰豬中,56頭豬胃食管區(qū)組織形態(tài)學(xué)病變,達(dá)83.5%,上皮細(xì)胞變性,乳突變形。52頭(77.5%)不全角化,上皮增生41頭(61.2%)。豬螺桿菌與胃潰瘍病的確切關(guān)系還需大量研究予以證實(shí)。

4.2 人的感染與公共衛(wèi)生

NHPH在人體的感染率比H.Pylori低,0.2～6%不等[10],但有增高的趨勢。從NHPH感染病人分離出H.suis,分離率13.9%(De Groote D等,2005)和30.9%(Van den Bulck等,2005)[3]。采用16 S rRNA基因探針雜交技術(shù)從人胃組織活檢樣本分離H.suis高達(dá)78%(T rebesius K等,2001)。Meining A等(1998)通過問卷調(diào)查,發(fā)現(xiàn)與豬接觸者感染NHPH存在高風(fēng)險(xiǎn)。除了在豬和人胃檢出該菌外,同時(shí)在猴、狒狒(O‵Rourke J L等,2004)和貓(Van den Bulck等,2005)等動(dòng)物胃內(nèi)分離到H.suis,表明此菌屬人畜共患病原菌[3]?；谪i螺桿菌(H.suis)與人源和鼠源胃螺桿菌I(H.heilmannii)的同源性或?yàn)橥痪N,可能存在自然傳播感染,通過糞便排除螺桿菌,污染水或食品(Choi Y K等[15],2001)。Azevedo N F等[29]研究了螺桿菌屬中多種菌(未包括豬螺桿菌)在水、陽光條件下存活狀況,可在水中存活4 d,水可能傳播途徑之一。豬-人、口-口或嘔吐物傳播可能是人或豬感染的傳播方式。更重要的是,目前尚不明確豬或豬肉制品是否為人類的感染源,將可能作為新的食源性病原予以重視。

5 檢測與鑒別

起初,豬螺桿菌不易體外培養(yǎng)成功(Cantet F等[7],1999),不將此作為首選檢測方法(Baele M等[10],2009)。但Baele M等[1](2008)用酸處理胃樣本,以殺死胃內(nèi)其他雜菌而保證該菌的生長,用碳吸附胃內(nèi)對細(xì)菌有毒的物質(zhì)等改進(jìn)的技術(shù),首次在豬胃體外分離豬螺桿菌(H.suis)成功,為該菌的全面系統(tǒng)研究提供可能。傳統(tǒng)金方法是組織切片經(jīng)石碳酸品紅、Warthin-Starry銀染法等染色后鏡檢,判定彎曲樣細(xì)菌的存在與否(Ramis G等[13],2007),此法不能較好地鑒定其種別。免疫組織化學(xué)方法也多用于此菌的鑒定[3]。電鏡觀察也用為較常用的研究方法(Mendes E N等[31],1990;De Groote D等[8],1999)。PCR擴(kuò)增,基因測序是目前認(rèn)為較特異和敏感的方法(Cantet F等[7],1999)。De Groote D等[28]應(yīng)用Can H.suis特異性探針Southern blot分析技術(shù),研究了PCR法與傳統(tǒng)的快速尿素酶法,免疫組織化學(xué)法,Giemsa染色組織學(xué)法的檢測效果,認(rèn)為PCR法是基準(zhǔn)方法,胃切片免疫組化標(biāo)記或Giemsa染色微生物檢測與PCR法比較,有很高的特異性(100%)和較低的敏感性,檢出率分別為72和42%。尿素酶試驗(yàn)延長培養(yǎng)時(shí)間,可提高其敏感性(74和55%),但降低了特異性(72和93%),PCR法可廣泛用于本菌的相關(guān)研究。Pirarat N等[19]報(bào)告,組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)法檢測豬螺桿菌,其差異十分明顯。如115頭豬中,Warthin-Starry銀染法在胃食道部檢測陰性,免疫組化法則分離率為13.91%。Hellemans A等[2]認(rèn)為PCR法和尿素酶法對哺乳豬和成年公豬和母豬胃竇部和底部的檢測效果良好,但其他年齡和部位的檢測效果較差。Kolodzieyski L等[12]研究了尿素酶試驗(yàn)、布氏細(xì)胞學(xué)、光鏡和電鏡方法及PCR法的檢測效果,認(rèn)為三種方法均可作為不同動(dòng)物的診斷方法,但要考慮樣本的不同而影響其診斷敏感性。

螺桿菌屬目前有18種菌種,檢測中應(yīng)與H.baculi formis、H.cynogastricus、H.bizzzeronii、H.felis、H.salmonis、H.pylor、CandidatusH.heilmannii、H.mustelae、H.aurati、H.mustelue、H.nemestrinue、Can H.bovis等12種細(xì)菌在菌體形態(tài)、生化特性、培養(yǎng)特性、周質(zhì)纖毛和菌體鞭毛數(shù)與分布等方面加以鑒別[3]。

Flahou B等[39]研究了同源和異源豬螺桿菌在鼠體內(nèi)免疫保護(hù)效果,應(yīng)用ELISA法檢測血清抗體,獲得良好地結(jié)果,為豬感染螺桿菌血清學(xué)快速檢測提供了可能。此前,Hellenams A等也開展了類似研究并取得成果[40]。

6 展望

國內(nèi)相關(guān)研究極為少見(鄭浩等,2004)[41]。筆者認(rèn)為需要在以下三個(gè)方面加強(qiáng)研究。

6.1 需加大豬胃(食管區(qū))潰瘍病病因研究力度。豬(食管區(qū))胃潰瘍病廣泛見于全球養(yǎng)豬業(yè),對其發(fā)生率、發(fā)生病因研究較多,與飼料、環(huán)境等多種因素密切相關(guān)。從豬胃分離到螺桿菌屬新菌種,并證明與豬胃潰瘍病有直接關(guān)系,勢必對該病病因重新認(rèn)識。但研究的范圍,研究的方法,研究的對象不一致導(dǎo)致結(jié)果差異,需要更加廣泛的研究。

6.2 需加大豬螺桿菌的系統(tǒng)研究。本菌的體外分離成功,為該菌的系統(tǒng)研究提供了基礎(chǔ)。傳統(tǒng)光鏡和電鏡、免疫組織化學(xué)、尿素酶活性、PCR等檢測方法各有其優(yōu)缺點(diǎn),特異性和敏感性各有所異。分子生物特性、細(xì)菌毒理特性、活體豬螺桿菌感染的快速檢測方法等亟待研究。

6.3 需加大豬胃潰瘍病預(yù)防和治療技術(shù)研究。此菌體外分離的成功,對其抗菌性物質(zhì)的敏感性研究提供可能,進(jìn)而為治療和預(yù)防提供了更科學(xué)的依據(jù)。鼠體內(nèi)免疫保護(hù)獲得較好效果,豬體研究尚未進(jìn)行。研究菌苗預(yù)防本病發(fā)生是一個(gè)新方向。

比利時(shí)Ghent大學(xué)Haesebrouck F和Ducatelle R教授提供部分英文資料,特此致謝。

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