J亞群禽白血病研究進(jìn)展

李建亮,崔言順

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,山東泰安271018)

1988年,英國(guó)的Payne L N等[1]從肉用型雞群中分離出一株ALV,根據(jù)病毒感染宿主的范圍,病毒干擾及交叉中和試驗(yàn)和病毒基因組序列等確定這是一類(lèi)新的ALV,稱(chēng)之為J亞群(subgroup J of avian leukosis virus,ALV-J)——因此前已有A-I等9個(gè)亞群,從而揭開(kāi)了研究J亞群ALV的序幕。在近20多年內(nèi),該病毒迅速傳播到世界各地。1999年,杜巖等[2]從市場(chǎng)上的商品代肉雞中分離檢測(cè)到ALV-J,宣告了我國(guó)相關(guān)研究的開(kāi)始。ALV-J可以垂直傳播,并可誘發(fā)腫瘤、造成免疫抑制,而且近幾年研究發(fā)現(xiàn)ALV-J在蛋用型雞上也能導(dǎo)致腫瘤,表明其危害范圍進(jìn)一步擴(kuò)大。國(guó)外由于采取了嚴(yán)格的凈化措施,該病的發(fā)生率越來(lái)越小。但我國(guó)由于大部分肉雞祖代雞依賴(lài)進(jìn)口,早年的相關(guān)理論知識(shí)和檢測(cè)水平較低,導(dǎo)致了大量ALV-J的涌入。盡管在相關(guān)專(zhuān)家的指導(dǎo)下,我國(guó)相關(guān)部門(mén)提高了檢測(cè)水平,但是由于引進(jìn)的時(shí)間較長(zhǎng),病原擴(kuò)散范圍大,加之我國(guó)較低的生物安全意識(shí)、參差不齊的養(yǎng)殖水平、各式各樣的養(yǎng)殖環(huán)境等因素,該病已經(jīng)對(duì)我國(guó)從事養(yǎng)殖的多條鏈鎖產(chǎn)生消極影響,對(duì)從事相關(guān)研究的人員也是一個(gè)極大的挑戰(zhàn)。近年來(lái)關(guān)于該病的研究主要集中在ALV-J的流行病學(xué)、檢測(cè)方法、病毒變異、免疫抑制及免疫抑制共感染等幾個(gè)方面,現(xiàn)結(jié)合國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究報(bào)道,對(duì)ALV-J相關(guān)研究做一簡(jiǎn)要綜述,以期更好地防控J亞群禽白血病。

1 流行病學(xué)

臨床上,ALV-J的自然感染基本上都出現(xiàn)在肉用型雞群,包括肉種雞和商品代肉雞。盡管蛋用型雞自然狀態(tài)下很少感染,但實(shí)驗(yàn)表明,蛋用型雞對(duì)ALV-J也易感。2002年,美國(guó)的Gingerich E等[3]報(bào)道了蛋用型雞場(chǎng)(來(lái)杭白品系)由于自然感染了ALV-J引起ML的病例。引起產(chǎn)蛋下降。因此要努力避免ALV-J向蛋用型雞群擴(kuò)散。另外,雖然在臨床上還未見(jiàn)火雞感染的報(bào)道,但研究表明火雞對(duì)ALV-J也易感。其它禽類(lèi)則可能對(duì)ALV-J有一定程度的抵抗力。盡管所有品系的肉用型雞對(duì)ALVJ均易感,但不同品系的雞感染ALV-J后其腫瘤的發(fā)生和發(fā)展情況有明顯的差異。

與經(jīng)典的ALV相比,ALV-J既可以垂直傳播,也可通過(guò)與被感染雞或被污染的環(huán)境的直接接觸而水平傳播。另外還可通過(guò)干細(xì)胞而進(jìn)行遺傳性傳播。但ALV-J主要以垂直傳播為主。由于ALV-J的囊膜糖蛋白基因有高度突變的傾向性,所以不同株病毒的囊膜糖蛋白的抗原表位有可能出現(xiàn)一定的差異性,這樣就導(dǎo)致了對(duì)一個(gè)ALV-J分離物的抗體有可能不能中和另一個(gè)病毒分離物。

我國(guó)的地方品種雞陸續(xù)有ALV-J感染的報(bào)道。徐鑌蕊等[4]首次發(fā)現(xiàn)ALV-J可以自然感染蛋用型雞并造成大規(guī)模發(fā)病。李艷等[5]首次從中國(guó)地方品系——黃羽肉雞中分離到J亞群白血病病毒(ALVJ)。成子強(qiáng)等[6]首次報(bào)道了中國(guó)特有雞種——麻雞ALV-J白血病的發(fā)病情況。這些病例的發(fā)現(xiàn)警示:應(yīng)注意中國(guó)地方種雞的白血病凈化工作。

2 檢測(cè)方法

對(duì)ALV-J的感染的診斷,大體可以通過(guò)剖檢變化和組織病理學(xué)檢查初步診斷,利用特異性單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn)來(lái)對(duì)分離的病毒進(jìn)行鑒定,還可以借助PCR等分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行診斷。還可以通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)來(lái)檢測(cè)機(jī)體中ALV-J的抗體水平來(lái)判斷雞群中是否存在ALV-J的感染。在檢測(cè)ALV-J的眾多方法中,病毒的分離鑒定是最為有效和可靠的方法,但病毒分離鑒定有較高的技術(shù)要求,而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力,并且需較多的材料和試劑。杜巖等[7]用特異性單克隆抗體JE9離鑒定出ALV-J中國(guó)野毒株。

3 病毒變異

RNA病毒尤其是反轉(zhuǎn)錄病毒的一個(gè)非常顯著的特征就是病毒的RNA聚合酶缺乏校對(duì)機(jī)制,從而造成了遺傳上的不穩(wěn)定性和多樣性。研究表明,現(xiàn)在流行的ALV-J的野毒株都是來(lái)自某個(gè)外源型ALV與內(nèi)源型J型病毒重組產(chǎn)物,而不是不同次重組的產(chǎn)物,然后在各種選擇壓力下尤其是免疫選擇壓作用下,ALV-J不斷變異。在ALV中囊膜糖蛋白基因尤其是與病毒中和反應(yīng)相關(guān)的gp85基因是最易發(fā)生變異的基因。

秦愛(ài)建等[8]研究表明ADOL-4817的env基因與外源性ALVs的相應(yīng)序列的同源性?xún)H為40.5%～51.4%,而與內(nèi)源性的EAV-HP毒株的類(lèi)env基因的同源性高達(dá)91.2%;另外,ADOL-4817毒株的gp37在C末端多了13個(gè)氨基酸。這些結(jié)果提示,ALV-J的env基因存在廣泛的變異性,env基因可能來(lái)源于內(nèi)源性和外源性ALVs的重組。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)對(duì)ALV-J流行病學(xué)調(diào)查表明ALV-J的gp85基因比經(jīng)典的白血病病毒的變異速度更快。張志等[9]對(duì)我國(guó)2000—2001年J亞群禽白血病病毒分離株gp85基因的序列比較表明,我國(guó)ALV-J的gp 85基因正在不斷發(fā)生變異。王增福等[10]將J亞群ALV NX0101接種到長(zhǎng)有CEF的細(xì)胞板上,分為培養(yǎng)基有抗體組和無(wú)抗體組設(shè)獨(dú)立的系列進(jìn)行傳代,然后對(duì)不同傳代毒的囊膜蛋白基因(env)gp85基因進(jìn)行克隆與測(cè)序,結(jié)果表明有抗體組3個(gè)傳代系列在110～120、140～150和188～193 aa這三個(gè)高變區(qū)域上NS/S分別為4.1、4.7和3.3,顯示出特異抗體這一免疫選擇壓對(duì)gp85變異的影響。孟祥凱[11]等對(duì)發(fā)病蛋雞進(jìn)行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)表明分離毒株和ALV-J密切相關(guān)。用ALV-J單抗G223進(jìn)行間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性,遺傳變異分析結(jié)果表明成髓細(xì)胞瘤型、血管瘤型ALV-J與國(guó)內(nèi)毒株的同源性較遠(yuǎn),而與HPRS-103的同源性最近,這說(shuō)明ALV-J在蛋雞體內(nèi)復(fù)制的過(guò)程中有返祖現(xiàn)象,并呈現(xiàn)了新的腫瘤學(xué)特征。崔治中等[12]對(duì)從中國(guó)分離到的8個(gè)ALV-J野毒株的囊膜蛋白基因和3′UT R進(jìn)行了序列分析,結(jié)果表明中國(guó)的分離毒株與美國(guó)毒株4817在3′UTR的E元件區(qū)有著共同的片段缺失,顯示它們來(lái)自共同的祖先,聯(lián)系我國(guó)每年從美國(guó)進(jìn)口白羽祖代肉雞現(xiàn)狀,推測(cè)出我國(guó)ALV-J的感染起源于美國(guó)。在這一結(jié)論的支持下,我國(guó)加大了對(duì)進(jìn)口祖代雞檢測(cè)的力度,使得進(jìn)口種質(zhì)資源逐漸改善。

4 免疫抑制

ALV-J除可導(dǎo)致M L并引起感染雞群死亡外,還可導(dǎo)致免疫抑制作用,這也是絕大數(shù)感染雞群的主要表現(xiàn)形式,由于ALV-J的感染,雞群的生產(chǎn)性能大為降低,對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答水平降低,導(dǎo)致繼發(fā)感染其它疾病,引起更重大經(jīng)濟(jì)損失。王建新等[13]做了ALV-J與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒(REV)共感染對(duì)肉雞生長(zhǎng)和免疫功能的抑制作用,并指出了ALV-J和REV混合感染的免疫抑制作用更為明顯。孫淑紅等[14]研究表明,REV的早期感染可持續(xù)性地抑制雞對(duì)疫苗的抗體反應(yīng),REV和ALV-J共感染的協(xié)同作用更進(jìn)一步強(qiáng)化這一免疫抑制作用,從而可能?chē)?yán)重干擾雞群中對(duì)H5-AIV和NDV滅活疫苗的免疫預(yù)防效果。

5 免疫抑制病的共感染

孫淑紅等[14]研究表明,流行病學(xué)調(diào)查表明,REV和ALV-J及其共感染在我國(guó)雞群中已相當(dāng)普遍。張志等從J亞群禽白血病腫瘤中檢測(cè)出禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒。成子強(qiáng)等報(bào)道蛋雞中發(fā)現(xiàn)J亞群白血病與網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥自然混合感染。李宏梅等[15]研究發(fā)現(xiàn),REV和ALV-J共感染后肉雞T淋巴細(xì)胞功能抑制更為嚴(yán)重,這可能與兩種病毒在肉雞體內(nèi)數(shù)量積聚增加、互為促進(jìn)有重要關(guān)系;同時(shí)這兩種病毒感染后造成T免疫細(xì)胞增殖活性和對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性降低,可能是病毒持續(xù)感染、增殖及組織病變、產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的前提,為家禽臨床生產(chǎn)中防制REV和ALV-J感染提供免疫學(xué)基礎(chǔ)。免疫抑制疫病共感染的現(xiàn)狀,使得我國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)蒙受了更的損失。另外,在一些進(jìn)口疫苗中檢測(cè)出有ALV的污染,國(guó)內(nèi)所產(chǎn)疫苗更不容樂(lè)觀,這也可能是感染進(jìn)一步擴(kuò)大的原因之一。

綜上所述,我國(guó)學(xué)者對(duì)J亞群禽白血病做了較為詳盡的研究,也基本上反映了我國(guó)J亞群禽白血病的流行現(xiàn)狀,即在蛋雞、三黃雞和純地方品系雞中,都存有ALV-J感染,但也有其他亞群感染,其主要病理有血管瘤、骨髓樣細(xì)胞瘤、腺胃腫大或腺胃炎、生長(zhǎng)不良、產(chǎn)蛋下降等;同時(shí)與其他免疫抑制性疾病病毒共感染比較普遍,增加了疾病控制的難度,防控形勢(shì)十分嚴(yán)峻。對(duì)于急性轉(zhuǎn)化型ALV-J病毒的研究在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道,但是對(duì)腫瘤基因的研究勢(shì)必進(jìn)一步揭示該病的致病、致瘤機(jī)理。

目前,還沒(méi)有有效的疫苗能夠用于預(yù)防ALV-J的感染,這主要是由于該病毒可進(jìn)行垂直傳播及早期的水平傳播。但在雞群中根除ALV-J的感染還是有可能的,可采取下列措施:加強(qiáng)進(jìn)口檢疫、凈化種雞群、建立核心群并凈化、避免疫苗污染和免疫抑制性疾病病毒共感染等。雞群中ALV-J的清除可能需要許多年堅(jiān)持不懈的努力。

[1] Payne L N,Gillespie M,Hower K.Recovery of acutely transforming viruses from myloid leucosis induced by HPRS-103 stain of avian leucosis virus[J].Avian Dis,1996,37:438-450.

[2] 杜 巖,崔治中,秦愛(ài)建,等.從市場(chǎng)商品肉雞中檢出J亞群禽白血病病毒[J].中國(guó)家禽學(xué)報(bào),1999,3(1):1-4.

[3] Ging rich E,Porter R E,Lupiani B,et.al.Diagnosis of myeloid leucosis induced by a recombinant avian leucosis virus in commercial white leghorn egg laying flocks[J].Avian Disease,2002,46:745-748.

[4] 徐鑌蕊,董衛(wèi)星,余春明,等.用ALV-Jgp85單克隆抗體證明蛋雞存在J亞群禽白血病[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2005,36(3),269-271.

[5] 李 艷,崔治中,孫淑紅.羽肉雞J亞群白血病病毒的分子生物學(xué)特性和致病性[J].病毒學(xué)報(bào),2007,23(3):207-211.

[6] 成子強(qiáng),張 利,劉思當(dāng),等.中國(guó)麻雞中發(fā)現(xiàn)禽J亞群白血病[J].微生物學(xué)報(bào),2005,45(4):584-588.

[7] 杜 巖,崔治中,秦愛(ài)建,等.雞的J亞群白血病病毒的分離及部分序列比較[J].病毒學(xué)報(bào),2000,16(4):341-346.

[8] 秦愛(ài)建,崔治中,Lucy Lee,等.禽白血病病毒J亞群env基因的克隆和序列分析[J].中國(guó)病毒學(xué),2001,16(1):68-73.

[9] 張 志,崔治中,趙宏坤.我國(guó)2000-2001年J亞群禽白血病病毒分離株gp85基因的序列比較[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2003,23(1):25-27.

[10] 王增福,崔治中.在抗體免疫選擇壓作用下雞J亞群白血病病毒gp85基因的變異[J].中國(guó)科學(xué):C輯,2006,36(1):9-16.

[11] 孟祥凱,劉 青,王海倫,等.商品蛋雞成髓細(xì)胞瘤、血管瘤型J亞群白血病病毒特性的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2008,39(11):1544-1547.

[12] Cui Z,Du Y,Zhang Z,et al.Comparison of Chinese field strains of avian leukosis subgroup J viruses with prototy pe strain HPRS-103 and United States strains[J].Avian Dis,2003,47:1321-1330.

[13] 王建新,崔治中,張紀(jì)元,等.J亞群禽白血病病毒與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒共感染對(duì)肉雞生長(zhǎng)和免疫功能的抑制作用[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2003,23(3):211-213.

[14] 孫淑紅.禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒與J-亞群白血病病毒的致病性及其疫苗研究[D].山東泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

[15] 李宏梅,成子強(qiáng),劉建柱,等.REV與ALV-J共感染對(duì)肉雞T淋巴細(xì)胞免疫功能與組織病理學(xué)的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,42(9):3296-3304.