自制正常值質(zhì)控血漿應(yīng)用于凝血項(xiàng)目檢查的探討

肖作淼，張友三

(1、江西省贛州市人民醫(yī)院血液科；2、檢驗(yàn)科，江西 贛州 341000)

許多疾病會(huì)引起機(jī)體止凝血功能紊亂，故凝血檢查廣泛應(yīng)用于臨床，尤其在手術(shù)前、出凝血性疾病等的診療，凝血檢查成了必不可少的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。凝血項(xiàng)目檢測(cè)過程受儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性及環(huán)境溫度等因素影響，所以室內(nèi)質(zhì)控是日常工作的重要內(nèi)容之一。目前在市場(chǎng)銷售的凝血項(xiàng)目質(zhì)控品大多為進(jìn)口，價(jià)格太貴，也成了科室負(fù)擔(dān)，讓科室難于堅(jiān)持每日做室內(nèi)質(zhì)控。如何保證檢驗(yàn)質(zhì)量的同時(shí)又不增加成本，使室內(nèi)質(zhì)控工作持續(xù)性地開展，是現(xiàn)代檢驗(yàn)追求目標(biāo)之一。我們嘗試自制質(zhì)控血漿用于凝血項(xiàng)目檢查，此方法簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)，并取得較好的質(zhì)控效果，有較強(qiáng)的可操作性，現(xiàn)總結(jié)與同行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1儀器 北京世帝產(chǎn)LG-PABER-I血小板聚集凝血因子分析儀(半自動(dòng))。

1.1 .2 試劑 廠家配套試劑(注PT:ISI 1.52)，試劑配制后在有效期內(nèi)使用。

1.1 .3器材 一次性真空定量采血器。用109mmol/L枸椽酸鈉抗凝劑0.2ml，定量采血至2ml。

1.2 方法

1.2 .1質(zhì)控血漿收集 收集同一天凝血項(xiàng)目檢查正常的69例住院病人剩余血漿標(biāo)本，且無脂血、黃疸、溶血和渾濁，其中男36例，女33例，年齡在4－76歲(平均45.4歲)。將標(biāo)本置于無菌燒瓶中充分混勻5分鐘后于無菌試管內(nèi)離心(RCF 2500g，10min)，吸取上清液(將試管底部 0.5m l棄之)移到另一無菌燒瓶?jī)?nèi)，再次充分混勻后，分裝于密閉的子彈頭內(nèi)(0.3ml/支)，保存于-20℃冰箱。整個(gè)過程4小時(shí)內(nèi)完成。

1.2 .2血漿定值 血漿定值所用試劑當(dāng)天配制。制取當(dāng)日檢測(cè) 6份質(zhì)控血漿之 PT、APTT、TT、FIB，隨后連續(xù) 3日，每天取6支質(zhì)控血漿，如此每個(gè)項(xiàng)目可獲得24個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值與標(biāo)準(zhǔn)差，去除離群值(x±3SD)，將剩余數(shù)據(jù)重新計(jì)算。將第二次所得平均值與標(biāo)準(zhǔn)差作為該批質(zhì)控血漿的定值，并以此為質(zhì)控圖的中心線。(注：本批次質(zhì)控品定值過程中未發(fā)現(xiàn)離群值)

1.2 .3檢測(cè) 所用試劑在有效期內(nèi)使用。每天從冷凍室取1支質(zhì)控血漿室溫解凍10分鐘，并于半小時(shí)內(nèi)隨當(dāng)日臨床標(biāo)本同樣檢測(cè)PT、APTT、TT、Fg。收集滿20個(gè)測(cè)量值作為該月的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，計(jì)算出該月數(shù)據(jù)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)并繪制質(zhì)控圖(Levey-Jenning曲線)；四個(gè)月的質(zhì)控過程(80個(gè)測(cè)量值)實(shí)際共用時(shí)110天。

1.2 .4統(tǒng)計(jì)方法 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果 見表1。

表1 每月測(cè)量均值與血漿之定值作比較(n=20,x±s)

3 討論

3.1 從表1得知：將不同月份的質(zhì)控結(jié)果分別與血漿的定值用t檢驗(yàn)作比較，發(fā)現(xiàn)APTT和TT在2個(gè)月內(nèi)無顯著性差異(P＞0.05)，PT在 3個(gè)月內(nèi)無顯著性差異，F(xiàn)g在4個(gè)月內(nèi)均無顯著性差異(P＞0.05)，而APTT和 TT保存至 3個(gè)月，PT至4個(gè)月有顯著性差異(P＜0.05)。但這明顯更長(zhǎng)于毛和香等[1]和劉玲等[2]報(bào)道質(zhì)控血漿穩(wěn)定性為20天,而葛學(xué)順[3]報(bào)道的穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月，我室之Fg與其相似，而APTT、PT、TT三個(gè)項(xiàng)目則更短，可能是葛學(xué)順在血漿中加了疊氮鈉(5g/L)防腐有關(guān)，而他們?cè)诒鶅鲅獫{融化時(shí)主張?jiān)?7℃，但我們?cè)谑覝?(26±2℃)解凍，讓凝血因子逐步恢復(fù)活性后測(cè)量，并未發(fā)現(xiàn)影響結(jié)果。PT、TT測(cè)量值隨貯存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增大，并呈階段性、比例性下降，這與凝血因子活性逐漸減低相關(guān)，APTT理論上也應(yīng)如此，但第三月比第四月反而更高，可能與半自動(dòng)儀器操作隨機(jī)誤差相關(guān)。

3.2 由于凝血檢驗(yàn)在臨床上廣泛應(yīng)用于手術(shù)前、出凝血疾病的診斷，其結(jié)果準(zhǔn)確性關(guān)系到疾病的診治，而凝血檢查準(zhǔn)確性受諸多因素影響。進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控是保證其凝血功能結(jié)果的準(zhǔn)確性的重要舉措。我們從臨床標(biāo)本中按一定要求篩查后收集標(biāo)本來制備凝血質(zhì)控血漿：選擇凝血功能檢查正常的標(biāo)本即可排除疾病和藥物等因素所致凝血因子活性改變，而在無菌瓶?jī)?nèi)混勻分裝于密閉的子彈頭后保存于-20℃目的是為了減少細(xì)菌污染有利于凝血因子活性的穩(wěn)定。本方法制取質(zhì)控品直接從臨床標(biāo)本中收集無需特意抽健康人群的血液，使質(zhì)控血漿更簡(jiǎn)單易得，且每20個(gè)測(cè)量值即繪制1張Levey-Jenning質(zhì)控圖更符合臨床上室內(nèi)質(zhì)控習(xí)慣。

3.3 因質(zhì)控血漿來源多人標(biāo)本，且未測(cè)傳染性標(biāo)志物如HbsAg、抗－HIV等，應(yīng)視為傳染性標(biāo)本對(duì)待，操作者應(yīng)注意生物危害，注意防護(hù)。

3.4 目前市場(chǎng)上所售凝血檢查質(zhì)控品大多為進(jìn)口，價(jià)格太貴，讓許多科室尤其在基層醫(yī)院難于承受，使凝血項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控難于開展，沒有室內(nèi)質(zhì)控的實(shí)驗(yàn)檢查是醫(yī)院安全隱患之一。筆者認(rèn)為：無論出于保護(hù)患者利益還是醫(yī)院利益，開展凝血項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控都非常重要。我們所用的凝血項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控方法，具有簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)、實(shí)用，適合全自動(dòng)和半自動(dòng)血凝儀，尤其適合基層醫(yī)療單位使用。

[1]毛和香,李良瓊,等.PT、TT、APTT自制質(zhì)控血漿穩(wěn)定性的探討.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,3(20):81.

[2]劉 玲,葉 勇,等.用混合血漿作PT和APTT與TT質(zhì)控物探討.中華新醫(yī)學(xué),2002,3(4):376～377.

[3]葛學(xué)順.常規(guī)凝血檢查室內(nèi)質(zhì)控血漿的制備與評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2007,3(4):184.