玉米須提取物對膽汁淤積性肝病的改善作用研究

張百明，趙致臻（甘肅張掖市人民醫(yī)院藥劑科，張掖市734000）

玉米須為禾本科玉蜀黍植物玉米Zea maysL.的干燥花柱和柱頭[1]，味甜，性微溫，源于《滇南本草》，具有平肝、利膽、利尿、泄熱之功效，可用于高血壓、腎炎、膽結(jié)石、糖尿病等疾病的治療[2]。目前，玉米須在膽汁淤積性肝病方面的研究情況未見報道。本研究復(fù)制膽管結(jié)扎致大鼠急性膽汁淤積性肝損傷模型和異硫氰酸-α-萘酯（ANIT）誘導(dǎo)大鼠膽汁淤積性肝病模型，探討玉米須對膽汁淤積性肝病的影響，為臨床玉米須應(yīng)用于膽汁淤積性肝病的治療提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Spectra Max M5型全功能微孔板檢測儀（美國Molecular Devices公司）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；JA1003A型電子天平（上海精天電子儀器公司）。

1.2 試藥

熊去氧膽酸膠囊（德國Dr.falk Pharma GmbH公司，批號:09E11710L，規(guī)格:每片250 mg）；血清總膽汁酸（TBA）測定試劑盒（德國Human公司，批號:H302B）；ANIT、烏來糖、總膽紅素（TBIL）試劑盒（批號:20090821）、直接膽紅素（DBIL）試劑盒（批號:20090702）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒（批號:20090611）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒（批號:20090602）由北京北化康泰臨床試劑有限公司提供；戊巴比妥鈉（北京化學(xué)試劑有限公司，批號:060102）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號:080911）。

1.3 動物

SD大鼠110只，體質(zhì)量180～250 g，♀♂兼半，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供（動物合格證號:SCXK（川）2008-24）。

2 方法與結(jié)果

2.1 玉米須提取物的制備

4 kg生藥材以5倍蒸餾水浸泡，大火煮沸，改小火煎煮2 h，多層濾紙抽濾，濃縮體積至生藥量質(zhì)量的一半，冷卻后加入90%乙醇，4℃靜置24 h，收集上清濃縮至620 g提取物。

2.2 玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠的影響

取SD大鼠60只，♀♂兼半，隨機均分為空白（蒸餾水）、模型（蒸餾水）、熊去氧膽酸（0.07 g·kg-1）及玉米須提取物高、低劑量（6.2、3.1 g·kg-1）組。ig給藥，連續(xù)給藥5 d；同時ig3%的ANIT香油溶液，劑量為150 mg·kg-1，空白組ig等體積香油溶液，連續(xù)5 d。第5天大鼠禁食16 h后，每組取6只給藥1 h后以烏來糖1 g·kg-1ip麻醉，仰位固定，打開腹腔，在十二指腸降部腸系膜中找到膽管，做膽汁分流術(shù)，收集3 h膽汁量并計算出3 h內(nèi)膽汁流速。每組余下6只股動脈采血，37℃保溫30 min，3 000 r·min-1離心10 min分離血清，測定血清生化指標(biāo)中TBA、TBIL、DBIL、ALT、AST含量。玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠膽汁流量、流速的影響見表1；玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響見表2。

表1 玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠膽汁流量、流速的影響（±s，n＝6）Tab 1 Effect of Z.mays extract on the flow and speed of bile in ANIT-induced cholestatic liver rats（±s，n＝6）

表1 玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠膽汁流量、流速的影響（±s，n＝6）Tab 1 Effect of Z.mays extract on the flow and speed of bile in ANIT-induced cholestatic liver rats（±s，n＝6）

與空白組比較:＊P＜0.05；與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

組別空白組模型組熊去氧膽酸組玉米須提取物高劑量組玉米須提取物低劑量組膽汁流速/mL·h-1 0.73±0.061 0.47±0.045＊0.66±0.023##0.66±0.091##0.59±0.060#劑量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1膽汁流量/mL 2.19±0.16 1.41±0.15＊2.00±0.076##1.97±0.26##1.77±0.21#

由表1可知，高、低劑量玉米須提取物能顯著增加模型大鼠的膽汁流量與流速（P＜0.01或P＜0.05），具有促進膽汁分泌與排泄作用，且存在劑量依賴性。

由表2可知，玉米須提取物對大鼠ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病有一定的改善作用，且存在劑量依賴性。當(dāng)劑量為6.2 g·kg-1時對模型大鼠ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病血清DBIL、ALT、TBA有降低作用（P＜0.01或P＜0.05）；當(dāng)劑量為3.1 g·kg-1時對模型大鼠血清DBIL和TBA均有降低作用（P＜0.05）。

2.3 玉米須提取物對膽管結(jié)扎致急性膽汁淤積性肝損傷模型大鼠的影響

取SD大鼠50只，♀♂兼半，隨機均分為假手術(shù)（蒸餾水）、模型（蒸餾水）、熊去氧膽酸（0.07 g·kg-1）及玉米須提取物高、低劑量（6.2、3.1 g·kg-1）組。按體質(zhì)量45 mg·kg-1ip戊巴比妥鈉，麻醉后以碘伏溶液腹部消毒，酒精脫碘后沿腹正中線切開，暴露膽總管，雙線結(jié)扎膽總管，中間剪斷，關(guān)腹。假手術(shù)組分離膽管后不做結(jié)扎，每只按50 IU·kg-1注射青霉素鈉以防感染。復(fù)制模型前當(dāng)天給藥，連續(xù)給藥5 d。第5天大鼠禁食16 h后股動脈采血，37 ℃保溫30 min，3 000 r·min-1離心10 min分離血清，測定血清生化指標(biāo)中TBA、TBIL、DBIL、ALT、AST含量。玉米須提取物對膽管結(jié)扎致急性膽汁淤積性肝損傷模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響見表3。

表2 玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響（±s，n＝6）Tab 2 Effect of Z.mays extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of ANIT-induced cholestatic liver rat（s±s，n＝6）

表2 玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)膽汁淤積性肝病模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響（±s，n＝6）Tab 2 Effect of Z.mays extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of ANIT-induced cholestatic liver rat（s±s，n＝6）

與空白組比較:＊P＜0.05；與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

組別空白組模型組熊去氧膽酸組玉米須提取物高劑量組玉米須提取物低劑量組TBA/μmol·L-1 7.76±4.08 31.90±5.31＊17.40±5.89##21.99±4.89#22.490±6.65#劑量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1 TBIL/μmol·L-1 1.52±0.41 11.42±3.23＊6.67±3.03##11.17±2.56 11.29±1.87 DBIL/μmol·L-1 0.62±0.47 5.76±0.45＊2.94±0.24##3.10±0.69##4.31±0.53#ALT/IU·L-1 69.70±6.05 135.87±29.36＊96.22±26.16#94.49±15.57#112.08±27.99 AST/IU·L-1 138.12±7.16 199.05±24.27＊163.50±22.11#189.97±16.32 197.20±17.38

表3 玉米須提取物對大鼠膽管結(jié)扎致急性膽汁淤積性肝損傷模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Z.mays stigma extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of rats with acute cholestat ic liver injury induced by bile duct ligatio（n±s，n＝10）

表3 玉米須提取物對大鼠膽管結(jié)扎致急性膽汁淤積性肝損傷模型大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Z.mays stigma extract on the content of TBIL，DBIL，ALT，AST and TBA in serum of rats with acute cholestat ic liver injury induced by bile duct ligatio（n±s，n＝10）

與空白組比較:＊P＜0.05；與模型組比較:#P＜0.05 Vs.blank group:＊P＜0.05；vs.model group:#P＜0.05

組別假手術(shù)組模型組熊去氧膽酸組玉米須提取物高劑量組玉米須提取物低劑量組TBA/μmol·L-1 11.09±7.04 188.25±37.30＊142.25±23.64#176.16±21.40 180.41±31.47劑量/g·kg-1- -0.07 6.2 3.1 TBIL/μmol·L-1 1.61±1.10 93.91±21.12＊90.11±16.30 93.12±18.33 93.44±23.31 DBIL/μmol·L-1 0.80±0.42 47.58±9.01＊30.22±7.65#31.32±6.21#44.32±10.41 ALT/IU·L-1 55.63±10.00 119.01±15.23＊81.13±15.41#83.11±14.30#102.40±16.12 AST/IU·L-1 167.17±27.13 265.30±47.11＊210.10±30.54 221.19±27.39 260.05±38.11

由表3可知，玉米須提取物對急性膽管結(jié)扎致膽汁淤積性肝病有一定的改善作用且有劑量依賴性。當(dāng)劑量為6.2 g·kg-1時能降低血清DBIL、ALT含量（P＜0.05）；當(dāng)劑量為3.1 g·kg-1時對血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA指標(biāo)均無影響（P＞0.05）。

3 討論

膽汁淤積性肝病屬于中醫(yī)“黃疸”范疇，主要由膽汁分泌或排泄障礙引起肝內(nèi)和肝外膽汁淤積所致，常分為肝內(nèi)膽汁淤積性肝病和肝外膽汁淤積性肝病，臨床上常表現(xiàn)為血清TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA指標(biāo)明顯升高。目前，針對肝內(nèi)膽汁淤積性肝病的動物模型主要是以藥物誘導(dǎo)性為主。ANIT是一種肝毒劑，可以誘導(dǎo)大鼠肝臟損傷，主要損傷膽管上皮細胞，引起毛細膽管和肝小葉間膽管周圍產(chǎn)生炎癥造成肝實質(zhì)細胞點狀壞死，使膽汁的分泌與排泄功能發(fā)生障礙，進而血清生化指標(biāo)TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA均有不同程度的升高。膽管結(jié)扎所致的大鼠急性膽汁淤積性肝損傷模型是模擬臨床肝外膽管阻塞性膽汁淤積性肝病，被國內(nèi)、外廣泛采用。該模型研究表明膽管結(jié)扎后引起膽管內(nèi)DBIL、TBA急速升高，引起細胞應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化物程度增加，能量代謝異常，進一步損傷肝細胞膜和（或）線粒體功能，導(dǎo)致肝細胞壞死和（或）凋亡[3]。

本研究采用ANIT誘導(dǎo)大鼠膽汁淤積性肝病實驗動物模型和膽管結(jié)扎致大鼠急性膽汁淤積性肝損傷實驗動物模型考察了玉米須提取物的治療作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，玉米須提取物對ANIT誘導(dǎo)大鼠肝內(nèi)膽汁淤積性肝損傷改善作用較為明顯，不僅能降低血清DBIL、ALT、TBA含量，而且能促進膽汁的排泌，但對肝外膽管結(jié)扎所致的膽汁淤積性肝損傷的改善作用相對較弱，僅能降低血清中DBIL、ALT，對TBA無影響，即對肝內(nèi)膽汁淤積性肝病改善作用明顯，對肝外膽管阻塞性膽汁淤積性肝病的改善作用較弱。筆者分析認為，玉米須提取物對肝內(nèi)膽汁淤積性肝病改善作用與其增加膽汁的分泌和促進體內(nèi)膽汁的排泄作用密切相關(guān)；而對于肝外膽管阻塞，雖然玉米須提取物能促進膽汁的體內(nèi)排泄，減少DBIL、TBA帶來的肝損傷，但由于膽汁流受阻，其利膽作用反而加劇膽管內(nèi)DBIL、TBA的升高，又造成肝損傷，所以出現(xiàn)對肝外膽管阻塞性膽汁淤積性肝病改善作用較弱的情況。玉米須提取物對肝內(nèi)、肝外膽汁淤積性肝病的的治療作用及其機制有待于進一步研究證實。

[1]朱 旭，邱智東.玉米須的化學(xué)成分及藥理作用研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，25（2）:183.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥材標(biāo)準(zhǔn)委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].北京:人民衛(wèi)生出版社，1986:12．

[3]Perez MJ，Briz O.Bile-acid-induced cell injury and protection[J].World J Gastroenterol，2009，15（14）:167.