新型八核銅配合物乳劑的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究*

葛蓓蕾,陳小讓

(1.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;2.鄭州大學(xué)藥學(xué)院,河南鄭州450052)

惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康,隨著對(duì)腫瘤形成機(jī)制研究的深入,化療在腫瘤治療中日益重要。由于傳統(tǒng)的抗腫瘤藥價(jià)格昂貴,且對(duì)機(jī)體均有明顯的毒副作用,因此,研究開發(fā)廉價(jià)、低毒的抗腫瘤藥物已經(jīng)成為當(dāng)前面臨的迫切問題。本實(shí)驗(yàn)所用新型八核銅配合物乳劑是由鄭州大學(xué)化學(xué)系無(wú)機(jī)教研室合成的新型銅絡(luò)合物的納米材料,具有特殊的雙螺旋結(jié)構(gòu),它以抗高血壓藥替米沙坦為配體(見圖1),和8個(gè)銅整合在一起的相對(duì)分子質(zhì)量為8 723的大分子化合物,其結(jié)構(gòu)式如圖2。其在甲醇、乙醇中的溶解度很小,在二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)、二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)、乙腈、二氯甲烷中溶解度較大。用一定比例的DMSO促溶后,溶解在0.1 mmol?L-1Tris-HCl中比較穩(wěn)定,該溶液在238 nm和296 nm處有較大的吸收,可以用紫外分光光度法定量。

初步的藥效學(xué)和體外篩選實(shí)驗(yàn)已證明該藥具有一定的抗腫瘤活性,細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)和周期實(shí)驗(yàn)表明八核銅配合物乳劑是一種作用于細(xì)胞周期的藥物。該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)研究,初步探討其毒性反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SPF級(jí)KM小鼠80只,體質(zhì)量(20.0±2.0)g,雌雄各半,河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物生產(chǎn)合格證編號(hào):SCXK(豫)2005—0001)。實(shí)驗(yàn)儀器:1 ml一次性注射器、電子秤、小鼠固定器、碘酒、棉球、鑷子、解剖剪等。藥品:八核金屬銅配合物乳劑:鄭州大學(xué)無(wú)機(jī)教研室合成。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)試驗(yàn) SPF級(jí)KM小鼠10只(雌雄各半),自由飲水、進(jìn)食,尾靜脈注射最大濃度0.2 g?L-1和最大劑量0.4ml一次給藥[1],連續(xù)觀察7 d并記錄,發(fā)現(xiàn)小鼠的生命狀況良好,無(wú)死亡現(xiàn)象,故無(wú)法測(cè)出LD50,改測(cè)定最大耐受量(MTD)。

1.2.2 急性毒性實(shí)驗(yàn) SPF級(jí)KM小鼠50只,雌雄各半。自由進(jìn)食和飲水,環(huán)境溫度20～24℃,相對(duì)濕度45%～50%,尾靜脈注射給藥。以0.2 ml∕10 g為最大給藥容積,共設(shè)4個(gè)劑量組及一個(gè)空白對(duì)照組,每組10只,雌雄各半。藥物濃度分別為1.0 g?L-1、0.5 g?L-1、0.05 g?L-1、0.01 g?L-1。給藥后連續(xù)觀察7d,第1、3、5、7 d稱動(dòng)物體重及觀察每組進(jìn)食量并記錄,第7 d將小鼠用頸椎脫臼法處死,觀察動(dòng)物臟器情況并記錄。

1.2.3 最大耐受量實(shí)驗(yàn) SPF級(jí)KM小鼠20只(雌雄各半),自由飲水、進(jìn)食,尾靜脈注射最大濃度0.2 g?L-1和最大劑量0.4ml,一日內(nèi)間隔6 h 3次給藥,給藥后連續(xù)觀察7 d,記錄給藥后動(dòng)物的反應(yīng)情況[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察 經(jīng)尾靜脈給藥0.5～1 h后出現(xiàn)自主活動(dòng)減少、靜臥不動(dòng),閉目、反應(yīng)遲鈍[3],6 h后,0.05 g?L-1和0.01 g?L-1組多數(shù)小鼠活動(dòng)恢復(fù)正常;24 h后,1.0 g?L-1和0.5 g?L-1組多數(shù)小鼠活動(dòng)恢復(fù)正常,整個(gè)過(guò)程中沒有出現(xiàn)驚厥、抽搐。無(wú)瞳孔大小改變,無(wú)腺體分泌增加,無(wú)共濟(jì)失調(diào)。呼吸平穩(wěn),無(wú)異常鼻腔分泌物。大便質(zhì)中,量中,無(wú)嘔吐。尿色、尿量正常。背毛正常。7 d內(nèi)小鼠全部存活,7 d后處死動(dòng)物并解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器,未發(fā)現(xiàn)有腫脹、萎縮、出血、顏色異常、粘連、硬化等異常改變,與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。

2.2 體質(zhì)量 八核銅配合物乳劑尾靜脈給藥對(duì)小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)明顯影響。與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見表1和2。

2.3 進(jìn)食量

表1 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量的影響(±s,n=10)

表1 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量的影響(±s,n=10)

1 1.00 19.59±0.39 19.91±0.29 22.41±0.26 24.44±0.34 24.92±0.28 2 0.50 18.66±0.42 19.26±0.53 21.39±0.77 22.58±0.81 23.12±0.92 3 0.10 18.88±0.50 20.22±0.57 22.79±0.52 24.29±0.62 25.22±0.60 4 0.05 19.28±0.34 20.47±0.34 22.66±0.45 24.24±0.66 25.33±0.76對(duì)照0.00 19.32±0.34 19.95±0.40 21.62±0.34 23.18±0.32 23.89±0.38

表2 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量的增加量的影響(±s,n=10)

表2 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量的增加量的影響(±s,n=10)

1 1.00 0.32±0.25 1.32±0.14 0.96±0.20 0.48±0.13 2 0.50 0.60±0.30 1.25±0.25 0.10±0.19 0.54±0.20 3 0.10 1.34±0.22 1.53±0.14 0.34±0.20 0.93±0.12 4 0.05 1.19±0.29 1.33±0.16 0.47±0.12 1.09±0.17對(duì)照0.00 0.63±0.27 1.16±0.15 0.40±0.11 0.71±0.13

表3 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)食量的影響(±s,n=10)

表3 八核銅配合物乳劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)食量的影響(±s,n=10)

1 1.00 4.70±0.58 5.84±0.70 5.47±0.10 4.27±0.23 2 0.50 3.89±0.35 5.15±0.35 4.12±0.70 3.57±0.31 3 0.10 3.54±0.08 6.03±1.11 4.81±0.41 4.21±0.21 4 0.05 4.77±0.41 6.13±0.17 5.31±0.05 5.01±0.27對(duì)照0.00 3.25±0.45 5.08±0.42 4.90±0.24 4.70±0.28

3 討論

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該八核銅配合物乳劑的毒性低,未測(cè)出LD50,測(cè)定結(jié)果表明,該實(shí)驗(yàn)藥物4種濃度經(jīng)尾靜脈一次性最大劑量給藥后觀察7 d均未見任何明顯毒性反應(yīng),處死小鼠解剖后肉眼觀察肝、腎亦未發(fā)現(xiàn)異常改變。急性毒性實(shí)驗(yàn)無(wú)小鼠死亡,給藥各組小鼠均未出現(xiàn)急性中毒癥狀和表現(xiàn),并且毛皮光滑,進(jìn)食、體質(zhì)量增長(zhǎng)及大小便正常。處死動(dòng)物并解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器,未發(fā)現(xiàn)有腫脹、萎縮、出血、顏色異常、粘連、硬化等異常改變[4],與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該八核銅配合物乳劑的毒性低,可作為一種安全、低毒的藥物制劑,在新型抗腫瘤藥物的開發(fā)上具有廣闊的前景。

[1] 徐淑云,卞如濂,陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.

[2] 孫敬方.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.

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[4] 牟 楠,蕭美茹.消癥注射液對(duì)大鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2008,3(2):48-49.