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    HPLC測定復(fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水中達克羅寧的含量

    2010-03-21 07:43:04羅意文曾繁濤陳連劍
    海南醫(yī)學(xué) 2010年14期
    關(guān)鍵詞:達克羅寧薄荷腦潤膚

    李 成,顏 晗,羅意文,曾繁濤,路 偉,陳連劍*

    (1.深圳市福田人民醫(yī)院,廣東 深圳 518033;2.深圳市藥檢所,廣東 深圳 518057)

    鹽酸達克羅寧為局部麻醉藥,對皮膚有止痛、止癢及殺菌作用。復(fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水是我院制劑室自行研制的一種外用溶液劑,以達克羅寧和薄荷腦為主藥,酒精和甘油為輔藥,用于治療我院皮膚科門診日益增多的秋冬季節(jié)的皮膚干燥、瘙癢患者,尤其是日益增多的中老年患者?!稄?fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水的研制》被列為 2009年深圳市科技計劃項目。2010年 4-5月,本研究參考國內(nèi)外有關(guān)文獻[1-5],并根據(jù)鹽酸達克羅寧的理化性質(zhì),建立了高效液相色譜法測定復(fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水中達克羅寧的含量,該方法靈敏、準確、重現(xiàn)性好,可作為本品的質(zhì)量控制方法。

    1 藥物與儀器

    1.1 儀器 島津 LC-20ADHPLC儀(SPD-20A UV檢測器,CTO-10ASVP柱溫箱,phenomenex lune色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm),SIL-20AL(自動進樣器),UV-2201紫外分光光度計(日本島津),KQ5200DB數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),AG285電子天平(瑞士梅里達)。

    1.2 藥物 鹽酸達克羅寧(杭州良金生物科技,批號:2091203,含量:99.9%),復(fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水(本院自制),乙腈(色譜純,天津四友)。其他試劑均為分析純。所有試劑和溶液使用前均經(jīng) 0.45μm微孔濾膜過濾。

    2 方 法

    2.1 溶液制備

    2.1.1 對照品溶液制備 精密秤取鹽酸達克羅寧 20.13 mg,置 100 ml量瓶中,用流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,得濃度為 0.2013 mg/ml的標準品溶液。

    2.1.2 樣品溶液制備 精密量取樣品 1 ml,置100 ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。

    2.1.3 空白樣品溶液制備 按處方比例秤取除鹽酸達克羅寧外的其他的藥品和輔料,按該制劑制備工藝制成空白制劑,其余按樣品溶液的制備項下方法進行。

    2.2 檢測波長 精密量取對照品溶液 3 ml至10 ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,以流動相為空白,在 400-190 nm波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果鹽酸達克羅寧在 279 nm處有最大吸收(見圖 1),薄荷腦及輔料無干擾,故選擇 279 nm作為檢測波長。

    圖1 鹽酸達克羅寧紫外吸收光譜

    2.3 色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗 色譜柱:Phenomenex lune(4.6 mm×250 mm,5μm);流動相:乙睛 -水 -三乙胺 -冰醋酸(55∶43.5∶1.0∶0.5);流速:0.5ml/min;檢測波長:279 nm;進樣量:10 μl;柱溫 30℃。理論塔板數(shù)不低于3 000,主峰與相鄰色譜峰的分離度不小于 1.5。色譜圖見圖 2。

    圖2 空白洗劑與鹽酸達克羅寧對照品及樣品色譜圖A.空白洗劑 B.鹽酸達克羅寧對照品 C.樣品

    2.4 標準曲線 精密量鹽酸達克羅寧對照品溶液 1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml,分別置 10 ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。分別取 10μl進樣,各濃度進樣 3次,以濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸。得回歸方程:A=65692.96C—40105.4,r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明,鹽酸達克羅寧濃度在 20.13-120.78μg/ml范圍內(nèi)與吸收度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

    2.5 精密度試驗 取同一對照品溶液,連續(xù)進樣 5次,每次 10μl,記錄峰面積,計算 RSD=1.4%(n=5)表明方法精密度良好。

    2.6 穩(wěn)定性試驗 取含量測定項下的樣品溶液,在 12 h內(nèi)每 2 h測定一次,峰面積分別為 3 239 821,3 108 705,3 219 240,3 192 567,3 157 254,3 109 251,平均為 3 171 140,RSD為 1.8%,結(jié)果表明該方法在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.7 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的同一批供試品溶液 5 ml各 6份,置 10 ml量瓶中,分別加入 60%、100%、140%的鹽酸達克羅寧,加流動相稀釋至刻度(相當(dāng)于 80%、100%、120%),按“含量測定”項下的方法,依法測定,按上述回歸方程計算含量,計算加樣回收率,結(jié)果見表 1。

    表1 回收率試驗結(jié)果(n=6)

    2.8 樣品測定 精密量取1 ml,置 100 ml量瓶中,用流動相溶解并稀釋至刻度,取稀釋液 10μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密秤取鹽酸達克羅寧對照品適量,用流動相溶解并稀釋成約 50 μg/ml,同法測定。按外標法以峰面積計算出樣品中鹽酸達克羅寧的含量,結(jié)果見表 2。

    表2 含量測定結(jié)果(n=2)

    2.9 空白試驗 按處方秤取除達克羅寧外的其他成份,依法制成空白洗劑,按“含量測定”項下的方法,依法測定,結(jié)果峰面積為 0,表明其他成份不會對試驗結(jié)果產(chǎn)生干擾。

    3 討 論

    本實驗色譜條件設(shè)定流速為 0.5 ml/min,保留時間可達到7.363min,如設(shè)定為.0 ml/min,則保留時間小于 5 min;進樣量如為 20μl,則樣品峰太高,進樣量為 10 μl,峰高適宜。在本實驗條件下,理論塔板數(shù)為9305,拖尾因子為 1.2(采用峰面積法),滿足分析要求。實驗表明,采用高效液相色譜法測定復(fù)方達克羅寧薄荷腦潤膚止癢水中達克羅寧的含量,方法簡便、快速、準確,適用于制劑的快速分析。

    [1] 楊躍龍.RP-HPLC法測定復(fù)方達克羅寧軟膏中主藥的含量[J].中國藥房,2008,19(4)∶294.

    [2] 郭宇鵬,趙 青.HPLC法測定芩寧軟膏中黃芩苷及鹽酸達克羅寧的含量[J].齊魯藥事,2007,26(10)∶597-599.

    [3] 龔士學(xué),王 勇,周 琳.達克羅寧氯己定硫軟膏中鹽酸達克羅寧的含量測定[J].中國藥業(yè),2007,16(17)∶20-21.

    [4] 郭 珉,李珠華,趙遠征,等.反相高效液相色譜法測定復(fù)方達克羅寧搽劑中二組分的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2006,25(5)∶469.

    [5] 王澤明.當(dāng)代結(jié)構(gòu)藥物全集[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1993∶1 777-1 778.

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