苦參素治療慢性乙型肝炎患者T細胞亞群和細胞毒性T淋巴細胞的變化

顧錫炳 楊小娟 王 棟 朱銀芳 丁 虹 張 波 徐月琴

氧化苦參堿具有抑制肝臟炎癥，減輕肝纖維化，并有一定的抗病毒作用[1～3]。為進一步探討苦參素治療CHB患者細胞免疫功能的變化，我們觀察了苦參素治療前后患者T細胞亞群、細胞毒性T淋巴細胞（CTL）以及HBV DNA和HBeAg陰轉(zhuǎn)率的變化。

對象與方法

一、研究對象 2006年1月至2008年12月在我院就診的CHB患者66例，男49例，女17例，年齡20～56歲，平均36.3±10.3歲。診斷符合2000年西安會議制定的病毒性肝炎防治方案的標準[2]。入選標準：HBV DNA≥1×104copies/mL；HBeAg陽性；ALT≥2×正常值上限（ULN）。排除甲型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒感染；無自身免疫性疾病史；無嗜酒史；無肝毒性藥物應用史；未用過核苷（酸）類似物和干擾素等抗病毒藥物或免疫調(diào)節(jié)劑。另選健康獻血員30例，男22例，女8例，年齡20～56歲，平均年齡35.18±7.01歲為對照組。

二、治療方法 將患者分為兩組。治療組首先給予苦參素葡萄糖注射液（江蘇正大天睛藥業(yè)公司）600mg靜脈滴注，每日1次，1個月后改為苦參素膠囊（正大天睛藥業(yè)公司）200mg口服，每日3次，治療2個月。同時給予水飛薊賓葡甲胺片200mg口服，每日3次，治療3個月；對照組單用水飛薊賓葡甲胺片，用法、用量同治療組。

三、檢測方法 采用日立7600全自動生化分析儀檢測肝功能（日本協(xié)和試劑）；采用1235時間分辨熒光法檢測HBV M（上海新波試劑）；采用PCR法檢測HBV DNA（上?？迫A試劑）；采用流式細胞術(shù)檢測T細胞亞群和CTL[取100 μl乙二胺四乙酸二鉀抗凝新鮮全血加入檢測管和對照管，分別加入單克隆抗體及同型對照10μl，室溫避光孵育15 min，經(jīng)溶血處理后上流式細胞儀（Beckman-Coulter 3XL，美國）檢測（Beckman-Coulter公司試劑）]。

四、統(tǒng)計學處理 計數(shù)資料用x2檢驗，計量資料用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、T細胞亞群和CTL的變化 患者在苦參素治療3個月后CD3+、CD4+和CTL+細胞數(shù)較治療前和對照組治療后升高更明顯（t=2.21～4.11，P＜0.05 或 P＜0.01）；CD4＋/CD8＋比值略高于治療前（t=1.33，P＞0.05），但明顯高于對照組治療后（t=2.23，P＜0.05）；對照組在治療 3 個月后，CD3＋、CD4＋、CD8＋細胞、CD4＋/CD8＋比值和CT L細胞與治療前比較無明顯差別（t=0.18-1.16，P＞0.05，表 1）。

表1 患者和正常對照組T細胞和CTL（，%）計數(shù)的變化

表1 患者和正常對照組T細胞和CTL（，%）計數(shù)的變化

例數(shù) CD3＋ CD4＋ CD8＋ CD4＋/CD8＋ CTL治療組 治療前 33 68.85±7.31 33.61±7.3 28.99±7.90 1.23±0.41 18.11±5.21治療后 72.47±5.14 37.81±5.0 29.02±7.54 1.39±0.35 21.46±4.53對照組 治療前 33 68.72±6.93 33.46±7.27 28.88±7.62 1.24±0.43 18.05±5.06治療后 67.51±5.2 32.58±5.52 28.69±5.31 1.17±0.33 17.63±3.56正常對照 30 68.83±5.5 37.21±6.09 25.13±4.78 1.54±0.43 15.83±4.99

二、HBV DNA和HBeAg陰轉(zhuǎn)情況 治療組治療3個月后，HBV DNA 陰轉(zhuǎn)（HBV DNA＜500copies/m l）10 例（30.30%），高于對照組治療后的 2例（6.06%，x2=6.53，P＜0.05）；HBeAg陰轉(zhuǎn)8例（24.24%），高于對照組治療后的1例（3.03%，x2=6.3，P＜0.05）；兩組均無HBeAg血清學轉(zhuǎn)換。

三、肝功能恢復情況 治療組治療3個月后ALT恢復正常29例（87.88%），對照組28例（84.85%，x2=0.13，P＞0.05）。

討 論

苦參素的抗病毒作用主要是抑制細胞分泌HBsAg和HBeAg，調(diào)節(jié)免疫，刺激機體產(chǎn)生干擾素等[3，4]。據(jù)報道，應用苦參素治療 CHB 患者后外周血 CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比值較治療前明顯提高[5]。實驗表明，在苦參素作用后，HBsAg轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)成功地誘導出Th1型細胞因子的分泌[6]。本文兩組CHB患者治療前CD4＋低于正常對照組，CD8＋高于正常對照組，CD4＋/CD8＋值低于正常對照組，說明CHB患者存在細胞免疫功能紊亂和低下，是導致CHB患者HBV不能被清除的重要原因。在苦參素治療3個月后，CD3＋、CD4＋和CTL細胞均較治療前升高，與王嘯報道類似[5]。HBV DNA和HBeAg陰轉(zhuǎn)率也高于對照組，與報道類似[7]。

[1]何盛華，張濟萬，陳強，等.苦參素治療慢性乙型肝炎80例療效觀察[J].四川醫(yī)學，2005，26（10）：1090.

[2]中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會和肝病學分會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志，2000，8（6）：324-329.

[3]陳小松，王國俊，蔡雄，等.氧化苦參堿對肝纖維化大鼠細胞因子表達水平的影響[J].實用肝臟病雜志，2006，9（5）：257-259.

[4]陸倫根，曾民德，茅益民，等.氧化苦參堿膠囊治療慢性乙型病毒性肝炎隨機、雙盲、安慰劑對照多中心臨床研究[J].肝臟，2002，7（4）：218-221.

[5]王嘯，董香玉，朱傳安.苦參素對慢性乙型肝炎外周血T淋巴細胞亞群的影響[J]. 臨床薈萃，2001，16（18）：841.

[6]董宇紅，席宏麗，田楓，等.苦參素對HBsAg轉(zhuǎn)基因小鼠血清Th1和Th2細胞因子水平的影響[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，2004，18（3）：277-280.

[7]胡石江，朱紹詠.苦參素治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎療效觀察[J].臨床肝膽病雜志，2004，20（2）：118-120.