乙型病毒性肝炎不同血清學模式前S1抗原、乙型肝炎病毒-DNA和肝功能指標的關系

劉 敏,李 娜,張 云 ,馬 驄

乙型病毒性肝炎(簡稱乙型肝炎)是一種廣泛流行的病毒性肝炎,我國有較高的發(fā)病率,在高發(fā)地區(qū)成人 HBV感染率高達 24.4%～80.8%。HBV血清標志物(HBV-M)的檢測作為常規(guī)檢查項目,其中pre-S1-Ag是HBV外膜的重要組成部分,是HBV與肝細胞的直接結合點,在HBV感染、復制和刺激機體免疫應答方面均起重要作用[1],已成為HBV感染、復制和乙型肝炎患者診斷、治療和預后的一個重要標志。由于HBV-M檢測存在“窗口期”及“免疫逃避株”等問題,HBV-DNA測定則可以更直接反映HBV的量的變化。本研究觀察HBV-M、pre-S1-Ag和HBV-DNA三者之間的相關性,并聯合血清肝功能(丙氨酸轉氨酶ALT、天冬氨酸轉氨酶AST)檢測探討其在HBV中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集94例HBsAg陽性血清標本。

1.2 方法 每份標本均用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行乙型肝炎抗原、抗體及pre-S1-Ag檢測,用熒光定量-聚合酶聯反應(PQ-PCR)檢測HBV-DNA含量。同時全自動生化儀進行肝功能ALT 、AST檢測。

1.3 試劑與儀器 ELISA試劑由上海實業(yè)科華生物技術有限公司生產,儀器為BIOTEK800酶標儀,奧地利安橋FLOIDO型自動酶標洗板機,全自動生化儀為BECKMAN公司LX-20型號,操作及結果判斷嚴格按說明書進行。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 10.0軟件對結果進行χ2分析,P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同HBV血清學模式HBV-DNA和pre-S1-Ag檢測結果 94例 HbsAg陽性標本,HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式組俗稱“大三陽”,HBV-DNA檢出率達97.1%、平均含量3.5×108copies/ml,pre-S1-Ag檢出率79.4%,說明本模式存在病毒高復制。HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式組俗稱“小三陽”,HBV-DNA檢出率83.3%、平均含量 5.9×106copies/ml,pre-S1-Ag檢出率52.4%,說明部分HbeAg轉陰患者存在病毒高復制。模式1中HBV-DNA(+)與pre-S1-Ag(+)比較,在病毒高復制方面無統(tǒng)計學意義(χ2=0.75,P＞0.05);模式2中 HBV-DNA(+)與 pre-S1-Ag(+)比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.29,P＜0.05),說明HBV-DNA在乙型肝炎“小三陽”模式判斷病毒復制情況較pre-S1-Ag更有意義(表1)。

2.2 pre-S1-Ag、HBeAg與 HBV-DNA的相關性以＞5×102copies/ml為診斷標準,94例HBsAg(+)標本中,HBV-DNA陽性 83例、占 88.3%,HBeAg陽性 40例、占42.6%,pre-S1-Ag陽性62例、占 66.0%。說明用 HBV-DNA描述 HBsAg(+)患者體內病毒復制情況較HBeAg和pre-S1-Ag更為靈敏。HBeAg與HBV-DNA檢出率比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=27.7,P＜0.005),說明單純依靠HBeAg轉陰來判斷乙型肝炎患者體內病毒活動程度是不完善的。HBV-DNA與pre-S1-Ag檢出率比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=3.92,P＜0.05),說明HBV-DNA判斷病毒復制情況優(yōu)于 pre-S1-Ag。HBeAg與pre-S1-Ag檢出率比較,差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.46,P＞0.05)。83例 HBV-DNA陽性標本中,HBeAg與pre-S1-Ag檢出率比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.16,P＜0.05),說明高病毒復制的患者pre-S1-Ag較HBeAg更有意義(表2)。

2.3 HBeAg、pre-S1-Ag 、HBV-DNA 與肝功能指標的關系 94例HBsAg陽性標本,同時檢測肝功能指標AST和ALT,共有71例出現AST和ALT同時升高,占 75.5%。HBeAg(+)、pre-S1-Ag(+)和HBV-DNA(+)3種模式下比較AST/ALT＞1的檢出率,分別為 72.5%(29/40)、66.1%(41/62)和66.3%(55/83),說明3種HBV-M指標陽性時,肝功能異常有較高的檢出率,但三者間無統(tǒng)計學意義(P＞0.05,表3)。

表1 不同HBV血清學模式HBV-DNA和pre-S1-Ag檢測(n,%)

表2 HBeAg、pre-S1-Ag與HBV-DNA的關系(n)

表3 HbeAg、pre-S1-Ag、HBV-DNA與肝功能指標的關系(n)

3 討論

乙型肝炎病毒血清標志物檢測是目前診斷乙型肝炎最常用的指標,主要反映人體對乙型肝炎病毒的免疫反應狀態(tài),但不能直接反映HBV在患者體內的復制與傳染性情況。此外,由于乙型肝炎病毒血清標志物復雜多樣,臨床上難以根據這些結果對有些患者的HBV感染復制情況進行準確判斷。血清乙型肝炎病毒pre-S1-Ag作為病毒復制的標志物之一被廣泛應用于臨床,然而其確切意義及能否作為臨床常規(guī)檢測尚未確切定論[2]。目前已知,病毒感染人體后因復制量少,抗原檢測方法一般需要1015～1017個病原體才可檢測到,而有些病毒感染后有“窗口期”現象,FQ-PCR技術的出現,解決了病原體感染后的發(fā)病時間、病情輕重與病原體數量的關系[3-4]。乙型肝炎病毒血清標志物、pre-S1-Ag、HBV-DNA檢測,結合肝功能指標探討其相互間的關系對于乙型肝炎臨床診斷、療效觀察和預后判斷具有重要意義。

在HBV感染中,HBV-M的表達與HBV-DNA的復制表達差異較大[5],HBV-DNA檢測陽性通常被當作HBV感染及復制的金標準[6-7]。HBV-DNA檢測敏感、特異且能進行HBV病毒復制的監(jiān)測,日益受到臨床的重視。本研究結果顯示,HBV-DNA在“大三陽”組檢出率最高,達 97.1%(33/34),平均含量為3.5×108copies/ml,表明這組患者體內存在HBV高復制。本組1例標本 HBeAg陽性,而HBV-DNA為陰性,出現HBV-DNA陰性的可能原因為:檢測標本內含有Taq DNA聚合酶抑制物,或者是 HBV突變,或者試劑及操作的原因造成HBeAg假陽性。HBV-DNA在“小三陽”組檢出率為83.3%(35/42),平均含量為5.9×106copies/ml,病毒復制數量較“大三陽”比明顯下降。說明在HBV感染者體內HBeAg向 HBeAb轉換的過程中,病毒的復制逐漸減少。傳統(tǒng)觀念認為,慢性乙型肝炎患者出現HBeAg轉陰或轉為HBeAb陽性后傳染性小,病情好轉。通常認為 HBeAg陽性是HBV復制活躍的指標之一。本研究結果表明,HBeAg陰性并不表明HBV復制的完全終止或病毒血癥的消失,該結果與朱合[8]和Pichoud[9]等國內外的報道基本一致。

pre-S1-Ag是HBV外膜蛋白最前端的一部分,其C末端與pre-S2抗原的N末端連,N末端游離,HBV可能以pre-S1區(qū)的氨基酸21-47片段作為結合部分進入肝細胞,變異的病毒只要有這一片段就有強的傳染性[10]。本研究結果顯示,乙型肝炎“大三陽”患者pre-S1-Ag陽性率為79.4%,顯著高于“小三陽”的52.4%。說明隨著HBeAg轉為HBeAb,pre-S1-Ag的陽性率也逐漸降低。pre-S1-Ag與HBV-DNA檢出率并不一致,可能是pre-S1-Ag和HBV-DNA檢測所表達的意義并不完全一致。慢性乙型肝炎病程早期(HBsAg陽性),HBV-DNA陽性,而pre-S1-Ag陰性;病程后期,部分病例pre-S1-Ag陽性,而HBV-DNA為陰性。因此,不能僅依照pre-S1-Ag來判斷病毒是否復制,pre-S1-Ag不能完全代替HBV-DNA的檢測,只能作為其補充的指標。

本組3例單獨HBsAg陽性HBV-DNA均為陽性,而pre-S1-Ag為陰性,從理論上講是病程的最初期,有病毒的感染和(或)復制,pre-S1-Ag未表達或剛表達以致血清含量太低未能檢測到。本組6例HBsAg和HBeAg均為陽性的樣本,檢測結果顯示HBV-DNA和pre-S1-Ag均為陽性,HBV-DNA的量為6.1×107copies/ml,同樣與病程有關。另外,9例HBsAg和 HBeAb陽性的樣本,HBV-DNA和pre-S1-Ag的陽性率分別為66.7%和77.8%,均因為例數太少,尚需進一步驗證。

血清AST和ALT被認為是肝細胞損傷最敏感指標。AST廣泛存在于多種器官,以心肌和肝臟含量最高,AST有80%存在于線粒體中(m-AST),少量存在于細胞質中。在體內,肝臟是ALT含量最多的器官,肝中ALT絕大多數存在于細胞質中,只有少量存在于線粒體中[11]。AST/ALT比值近年來在肝病診斷和預后判斷上的應用逐漸受到重視。Williams等[12]研究顯示:肝硬化患者 AST/ALT比值明顯高于急慢性肝炎;慢性肝炎中AST/ALT比值大于1,則提示其病情進展到肝硬化階段。本研究結果顯示,HBeAg(+)、pre-S1-Ag(+)和HBV-DNA(+)3種模式下AST/ALT＞1的檢出率,分別為 72.5%(29/40)、66.1%(41/62)和66.3%(55/83)。說明3種 HBV-M 指標陽性時,肝功能異常有較高的檢出率。AST/ALT比值不僅是肝病嚴重程度的一個標志,同時也為臨床醫(yī)生正確作出肝病診斷、鑒別診斷、預后判斷、病程監(jiān)測及療效觀察提供有價值的信息。

因此,對于乙型肝炎病毒感染者,乙型肝炎抗原、抗體是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段。檢測pre-S1-Ag以及對HBV-DNA數量進行動態(tài)觀測,聯合肝功能等生化指標的分析,不僅可以提高HBV的檢出率,更能真實地反映出HBV在體內的復制情況,對乙型肝炎的診斷、抗病毒治療的藥物療效評價、指導乙型肝炎合理治療方案的制訂以及預后判斷有非常重要的意義。

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