蘋果籽、南瓜籽對團頭魴(Megalobrama amblycephala)魚體氨基酸組成的影響

代小芳 葉元土 蔡春芳 尹曉靜 邱 燕 譚芳芳 張 俊 戴修贏 王文娟

除了常規(guī)的大豆、油菜籽、花生、油葵外，新的含油植物籽類是探索的重要目標(biāo)。在我國蘋果籽、南瓜籽產(chǎn)量豐富，作為飼料原料資源分析，蘋果籽、南瓜籽的平均蛋白含量分別為34%和29%，脂肪含量分別為25%和35%，是重要的飼料蛋白質(zhì)資源和油脂資源，在添加飼料油脂的同時也補充蛋白質(zhì)。除此之外，蘋果籽、南瓜籽含有多種營養(yǎng)和保健作用的成分，例如黑色南瓜籽中含有豐富的抗真菌的多肽（HX Wang，2003），這種抗真菌蛋白在普通南瓜籽中也有發(fā)現(xiàn)并提?。ˋlice，1998）。蘋果籽中含有杏苷、根皮苷、多種多酚、多糖類等還原性物質(zhì)，具有清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化、減緩細胞衰老、促進機體健康生長作用。蘋果籽、南瓜籽還具有降血脂、血糖、驅(qū)蟲的保健作用，如果能夠作為飼料油脂原料在水產(chǎn)配合飼料中應(yīng)用，則可以替代相應(yīng)的藥物使用，實現(xiàn)飼料的綠色化。本試驗主要依據(jù)蘋果籽、南瓜籽脂肪含量，設(shè)計不同的飼料油脂水平進行團頭魴(Megalobrama amblycephala)的養(yǎng)殖試驗，探討蘋果籽、南瓜籽對團頭魴魚體氨基酸組成產(chǎn)生的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗魚

試驗團頭魴 (Megalobrama amblycephala)初重（14.2±1.5）g，為蘇州市相城新時代特種養(yǎng)殖場當(dāng)年池塘繁育魚種。經(jīng)兩周暫養(yǎng)后挑選體格健壯、規(guī)格整齊的魚種共600尾，隨機分養(yǎng)于30個養(yǎng)殖桶中，每桶放養(yǎng)20尾。

1.2 試驗飼料

選用蘋果籽、黑色南瓜籽（黑瓜子）、白色南瓜籽（白瓜子）3種油籽原料，蘋果籽為生產(chǎn)蘋果醬的副產(chǎn)物蘋果渣中挑選，來自于陜西；2種南瓜籽均來自于黑龍江，為籽用南瓜的種子。3種籽類的一般成分見表1。設(shè)計試驗飼料粗蛋白含量均為28%，以油脂含量為基準(zhǔn)，3種籽實分別以1%、2%、3%的油脂水平折算油籽量添加到飼料中，以添加1.5%的豆油作為對照組共10種試驗飼料。養(yǎng)殖試驗共設(shè)10個組，每組3個平行；10種飼料分別投喂10組試驗魚。試驗飼料組成、實測營養(yǎng)水平見表2，飼料氨基酸組成見表3。

所有飼料原料經(jīng)粉碎過40目篩，混合均勻，用小型顆粒飼料機加工成直徑1.5 mm的顆粒飼料，飼料置于-20℃冰箱儲存?zhèn)溆?。飼料制粒溫度?5～70℃，持續(xù)時間約1 min。

表1 3種油籽原料營養(yǎng)成分及部分理化特征值（鮮樣基礎(chǔ)）

表2 試驗飼料配方和營養(yǎng)成分

表3 試驗飼料氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ)，%)

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗魚用豆油對照組飼料飼喂暫養(yǎng)1周，魚正常攝食后開始正式試驗。養(yǎng)殖試驗在室內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中進行，養(yǎng)殖桶容積為0.33 m3，以曝氣的自來水為水源，每天換水量為總水量的1/3，養(yǎng)殖水體經(jīng)過過濾、沉淀后流回蓄水池，再經(jīng)過增氧、控溫后再由水泵抽回養(yǎng)殖桶，如此循環(huán)。每天 8：30、12：30、17：30 定時進行投喂飼料，日投餌量為魚體重的3%～6%，每兩周根據(jù)估算的魚體增重量調(diào)整投飼量。正式飼養(yǎng)期為60 d。

養(yǎng)殖時間為2009年5月至7月，整個養(yǎng)殖試驗期間，水溫為（26.8±0.9）℃、DO 值為（5.8±0.6）mg/l、pH 值為（7.1±0.4）、亞硝酸鹽含量（0.1±0.1）mg/l、氨氮含量（0.2±0.1）mg/l，硫化物濃度＜0.05 mg/l。

1.4 取樣與測定方法

飼養(yǎng)試驗結(jié)束時，停食24 h取樣，飼料、全魚、肌肉的氨基酸樣品采用105℃恒溫干燥得絕干樣品。

氨基酸測定樣品的處理：①準(zhǔn)確稱取一定量的絕干樣品，于特制的水解管底部，緩慢加入8 ml 6N HCl并輕輕轉(zhuǎn)動水解管，保證樣品得到全部潤濕，抽真空，維持5 min后，在酒精噴燈上封口；②（110±1）℃水解22～24 h；③切開水解管用去離子水全部轉(zhuǎn)移到25 ml容量瓶中、定容，雙層濾紙過濾后，取濾液1 ml置于25 ml小燒杯中，在加NaOH的真空干燥器中蒸干（水浴加熱不超過50℃），加入1 ml pH值2.2的鹽酸溶解后，溶液轉(zhuǎn)移至1.5 ml的離心管中。10000 r/min離心10 min。取上清液0.5 ml于樣品瓶中上機（安捷倫液相色譜儀，Ag1100，OPA FMOC柱前衍生化）測定。

色譜條件：色譜柱：（250×4.6）mm 5 μm ODS HYPERSIL；柱溫：40 ℃；流動相：A 相：（稱取 8.0 g結(jié)晶乙酸鈉于1000 ml燒杯中，加入1000 ml水?dāng)嚢柚了薪Y(jié)晶水溶解，再加入225 μl三乙胺，攪拌并滴加5%的醋酸，將pH值調(diào)到7.20±0.05；加入5 ml四氫呋喃，混合后備用）、B相（稱取8.0 g結(jié)晶乙酸鈉于800 ml燒杯中，加入400 ml水?dāng)嚢柚了薪Y(jié)晶溶解；滴加2%醋酸將pH值調(diào)到7.20±0.05；將此溶液加入800 ml乙腈和800 ml甲醇，混合后備用）；流速：1.0 ml/min；紫外檢測器：338 nm 262 nm(Pro,Hypro)；梯度洗脫。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Office（2003）中的Excel表中數(shù)據(jù)處理功能計算。

2 結(jié)果

各組飼料氨基酸組成見表4、表5，共測定了17種氨基酸，色氨酸因酸水解被破壞，未測定。

2.1 全魚的氨基酸組成

由表4結(jié)果可知，從全魚必需氨基酸組成來看，團頭魴全魚中賴氨酸含量最高，其次為亮氨酸、精氨酸；在同一蛋白水平下，蘋果籽組的全魚氨基酸組成與飼料的相關(guān)系數(shù)稍低。各試驗組全魚的必需氨基酸總量的變異系數(shù)為2.69%，氨基酸總量的變異系數(shù)為2.97%。各必需氨基酸的變異系數(shù)在4.3%以內(nèi)，其中組氨酸的變異系數(shù)最大為4.3%。非必需氨基酸中，脯氨酸的變異系數(shù)最大為15.87%，其他非必需氨基酸變異系數(shù)在4.47%以內(nèi)。

2.2 肌肉的氨基酸組成

表5 不同油籽原料及其添加水平對肌肉氨基酸組成的影響

由表5結(jié)果可知，團頭魴肌肉的氨基酸組成與對應(yīng)飼料的相關(guān)系數(shù)各試驗組無差異，肌肉的必需氨基酸變異系數(shù)為2.39%，氨基酸總量的變異系數(shù)為2.21%。各試驗組必需氨基酸中異亮氨酸、纈氨酸、組氨酸的變異系數(shù)較大，達到3.0%以上，其它必需氨基酸的變異系數(shù)均在3.0%以內(nèi)。非必需氨基酸中脯氨酸的變異系數(shù)最大，為13.75%，其次為胱氨酸，為3.92%，其它非必需氨基酸變異系數(shù)在3.0%以內(nèi)。

3 討論

目前,關(guān)于飼料中氨基酸對全魚和組織氨基酸含量的影響研究報道很少。陸茂英等（1992）采用酪蛋白作為大部分的基礎(chǔ)飼料的蛋白源,添加少量的晶體氨基酸后制成的試驗飼料飼養(yǎng)團頭魴魚種,發(fā)現(xiàn)在魚體生長上及體蛋白氨基酸組成方面均未受到影響。黃更生等（2003）對投喂不同飼料的成魚肌肉氨基酸組成進行分析,發(fā)現(xiàn)其氨基酸組成沒有明顯差異。本試驗結(jié)果與以上學(xué)者一致，各試驗組團頭魴全魚、肌肉氨基酸組成與飼料的相關(guān)系數(shù)非常接近，說明本試驗中的飼料氨基酸組成對團頭魴全魚和肌肉氨基酸組成沒有明顯影響。而Alam等（2002）研究指出，飼料中不同氨基酸模式對牙鲆生長及魚體蛋白結(jié)合態(tài)氨基酸的組成有影響。黃權(quán)等認為，攝食不同餌料對魚體肌肉氨基酸含量有一定影響。這些結(jié)果可能是由于魚種和試驗條件差異所致。

林仕梅等（2008）的實驗發(fā)現(xiàn)，補充D-蛋氨酸對羅非魚全魚氨基酸含量不產(chǎn)生任何影響，但魚體組氨酸和脯氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。Mai等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，大黃魚肌肉中其它必需氨基酸不受飼料中蛋氨酸的影響，但蛋氨酸和異亮氨酸含量受飼料中蛋氨酸水平的影響。本試驗結(jié)果中，團頭魴全魚、肌肉的16種氨基酸組成中，全魚、肌肉的異亮氨酸、組氨酸和脯氨酸的變異系數(shù)最大，可見，異亮氨酸、組氨酸和脯氨酸的含量可能受飼料氨基酸組成的影響最大。

4 結(jié)論

蘋果籽、白瓜籽、黑瓜籽以及豆油添加到飼料中，在同一蛋白水平下對團頭魴全魚和肌肉的氨基酸組成沒有影響。在團頭魴氨基酸組成中，異亮氨酸、組氨酸和脯氨酸受飼料的影響最大。