昆明地區(qū)豬戊型肝炎病毒感染的血清學調(diào)查

嚴玉霖,高 洪,李文貴,陳 玲,高利波,趙 汝

(云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院,云南昆明650201)

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的急性病毒性肝炎,該病主要經(jīng)糞-口途徑傳播,也有報道可以通過口-鼻和血液傳播,有流行和散發(fā)兩種形式,HE的病死率較甲型、乙型、丙型和丁型肝炎高,孕婦的病死率可高達21%。自1995年印度由于水污染發(fā)生了第一次HE大暴發(fā)流行以來,先后在印度、尼泊爾、蘇丹、吉爾吉斯斯坦等國有流行。我國自1980年以來,新疆、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古和山東等省均有HE的流行。近年來,HE的發(fā)病率呈現(xiàn)不斷上升的趨勢,作為一種重要的人獸共患病,HE已在動物中廣泛存在,尤其是在家畜中的分布,是不可回避的事實[1]。在20世紀90年代早期,Balayan和其同事首先報道了前蘇聯(lián)豬、羊和鼠中的HEV感染[2-3]。1997年美國Meng等由美國本土的一頭豬身上分離出1株野生型HEV病毒,發(fā)現(xiàn)其與人類HEV具有極高的同源性,并發(fā)現(xiàn)其可感染黑猩猩和恒河猴,從而首次證實了HEV種間傳播的可能性[4-5]。世界上其他地區(qū)豬HEV的陸續(xù)分離及血清學調(diào)查,表明豬的HEV感染是一種普遍存在的現(xiàn)象[6]。為了解昆明地區(qū)豬HEV感染情況,本研究對昆明地區(qū)的12個規(guī)?；B(yǎng)豬場和部分散養(yǎng)戶的270只不同月齡段的生豬進行了HEV血清學調(diào)查,以期為豬戊型肝炎的防控提供資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 2008年從昆明市及周邊地區(qū)(包括五區(qū)一市八縣)的12個規(guī)?；B(yǎng)豬場及部分散養(yǎng)戶隨機采集豬血清樣品270份,其中規(guī)?；i場血清235份、散養(yǎng)戶血清35份;仔豬血清92份、育肥豬血清108份、后備種豬血清70份。血清樣品于—20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 檢測試劑 豬HEV IgG抗體檢測試劑盒(ELISA)購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 間接ELISA方法,按照檢測試劑盒的說明書進行操作,通過配制洗滌液,稀釋樣品,加樣,溫育,洗板,加酶標二抗,顯色,終止等操作步驟,最后于450 nm處測定孔的A值。

1.2.2 結(jié)果判定 以空白孔調(diào)零,當陽性對照孔平均值A450≥0.8,陰性對照孔平均值A450≤0.1時試驗成立。被檢血清樣品A450≥0.2時判為陽性,A450＜0.2時判為陰性。

1.2.3 統(tǒng)計分析 不同時間或不同分組間抗體陽性率的比較采用Pearson χ2檢驗,以P＜0.05時差異顯著,P＜0.01差異極顯著,統(tǒng)計分析使用SPSS10.0。

2 結(jié)果

2.1 HEV的感染情況調(diào)查結(jié)果

由表1可知,2008年從昆明市的12個規(guī)?；B(yǎng)豬場共采集的235份血清樣本,通過間接ELISA方法檢測,檢出HEV抗體陽性血清139份,陽性率為59.15%。在被檢的35份散養(yǎng)豬群的血清樣本中,檢出HEV抗體陽性血清26份,陽性率為74.29%。統(tǒng)計結(jié)果表明,規(guī)?；i場HEV感染陽性率顯著低于散養(yǎng)戶HEV感染陽性率(P＜0.01)。

表1 規(guī)?；i場與散養(yǎng)戶豬群HEV的感染情況Table 1 HEV infection in scale pig farm and scatter-feed pigs

2.2 不同年齡段豬HEV的感染情況

由表2可知,在采集的270份血清樣品中,仔豬血清92份,其中HEV抗體陽性血清56份,陽性率為60.87%;育肥豬血清108份,其中HEV抗體陽性血清81份,陽性率為75%;后備種豬血清70份,其中HEV抗體陽性血清28份,陽性率為40%。統(tǒng)計結(jié)果表明,不同年齡階段豬感染HEV的陽性率差異顯著(P＜0.01或P＜0.05),育肥豬陽性檢出率最高,其次是仔豬,后備種豬陽性率相對較低。

表2 不同年齡段豬HEV的感染情況T able 2 HEV infection in different age pig

3 討論

目前尚未見到關于昆明地區(qū)豬HEV感染情況的報道,本研究通過2008年的血清學調(diào)查發(fā)現(xiàn),昆明地區(qū)規(guī)模化豬場HEV抗體陽性率高達59.15%,飼養(yǎng)條件和衛(wèi)生條件相對較差的散養(yǎng)戶豬群中HEV抗體的陽性率更高,為74.29%,兩者差異顯著(P＜0.01),這可能與豬戊型肝炎的流行規(guī)律有關,HEV感染的豬群通過糞便、分泌物等污染周圍的飼料及飲水,從而通過消化道感染健康豬群[7-8]。目前沒有相應的豬用HEV疫苗問世,因此本文所測得抗體陽性的豬群是由野毒自然感染所引起,其抗體總陽性率高達61.11%,表明昆明地區(qū)豬HEV的自然感染普遍存在且情況較為嚴重,應當引起有關部門和養(yǎng)豬場的高度重視,必須盡快制定并采取有效措施進行預防和控制。

根據(jù)不同年齡段豬HEV的感染情況(表2),表明昆明地區(qū)仔豬和育肥豬的HEV感染率較高,這與在美國、臺灣地區(qū)和日本報道的大多數(shù)豬在2月齡～3月齡感染HEV結(jié)果一致[9-12]。育肥豬HEV抗體的陽性率顯著高于仔豬(P＜0.05),表明此年齡段豬群較易感。此次調(diào)查結(jié)果與人類戊型肝炎的發(fā)病特點相一致,即人類的HEV感染與年齡有關,幼年時感染HEV多為亞臨床型,青壯年時期感染HEV多為臨床型,且較易感[13-14]。

豬HEV的感染不僅影響了豬只的生長性能,給養(yǎng)豬業(yè)帶來直接的經(jīng)濟損失,而且還對動物性食品安全和公共衛(wèi)生安全帶來隱患。已有研究表明,與豬密切接觸的職業(yè)人群血清HEV抗體高于非職業(yè)人群[6,7],豬HEV與人源HEV在基因序列上具有高度的同源性[10-11],且豬HEV引起的組織病理學病變與人類HEV引起的病變類似[15]。提示HE是一種重要的人獸共患病,豬源HEV可能是引起人類HEV感染的主要病原,與豬密切接觸的職業(yè)人群應定期進行HEV抗體及肝功能的檢測。中國人傳統(tǒng)的飲食習慣在肉食品方面主要以豬肉及其內(nèi)臟為主,因此有必要深入研究豬HEV的分子流行病學特點和豬HEV的致病機理,在此基礎上研發(fā)相應的豬用HEV疫苗,定期監(jiān)測豬群HEV抗體,對于保障動物性食品安全和公共衛(wèi)生安全,有效預防和控制豬戊型肝炎具有重要意義。

[1] 佘銳萍,李文貴,王英華,等.病毒性肝炎——值得警惕的重要人獸互傳病[J].科技導報,2007,25(4):44-52.

[2] Balay an M S,Usmanov R K,Zamy atina N A,et al.Brief report:experimental hepatitis E infection in domestic pigs[J].J M ed Virol,1990,32:58-62.

[3] Usmanov R K,Balaian M S,Dvoinikova O V,et al.An experimental infection in lambs by the hepatitis E virus[J].Vopr Virusol,1994,39:165-169.

[4] M eng X J,Purcell R H,Halbur P G,et al.A novel virus in swine is closely related to the human hepatitis E virus[J].Proc Natl Acad Sci USA,1997,94:9860-9865.

[5] Meng X J,Halbur P G,Shapiro M S,et al.Genetic and experimental evidence for cross-species infection by swine hepatitis E virus[J].J Virol,1998,72:9714-9720.

[6] Meng X J.Novel strains of hepatitis E virus identified form humans and other animal species:is hepatitis E a zoonosis[J].J Hepatol,2000,33:842-849.

[7] Yu Y,Sun J,Liu M,et al.Seroepidemiology and genetic characterization of hepatitis E virus in the northeast of China[J].Infect Genet Evol,2009,9(4):554-561.

[8] Shao Z J,Li J H,Zheng Y J,et al.Epidemiological screening for hepatitis E virus in bile specimens from livestock in northwest China[J].J Clin Microbiol,2009,47(3):814-816.

[9] Meng X J.Hepatitis E virus:Animal reservoirs and zoonotic risk[J].Vet Microbiol,2010,140(3-4):256-265.

[10] Wu J C,Chen C M,Chiang T Y,et al.Spread of hepatitis E virus among different-aged pigs:two-year survey in Taiwan[J].J Med Virol,2002,66(4):488-492.

[11] Takhashi M,Nishizawa T,Miyajima H,et al.Swine hepatitis E virus strains in Janpan from phylogenetic clusters comparable with those of Japanese isolate of human hepatitis E virus[J].J Gen Virol,2003,84:851-862.

[12] Li W,She R,Wei H,et al.Prevalence of hepatitis E virus in swine under different breeding environment and abattoir in Beijing,China[J].Vet Microbiol,2009,133(1-2):75-83.

[13] 多海剛,田克恭.人與動物感染戊型肝炎病毒的研究進展[J].實驗動物的科學與管理,2002,19(2):34-38.

[14] 羅 銘,張立伐.戊型肝炎病毒學與流行病學研究進展[J].實用肝臟病雜志,2008,11(5):352-355.

[15] 王英華,韋海濤,佘銳萍,等.屠宰豬肝臟中戊型肝炎病毒(HEV)的檢測及組織病理學觀察[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報,2008,16(3):373-379.