鴕鳥油抗菌活性的實(shí)驗(yàn)研究

楊秀芳, 伍發(fā)云, 馬養(yǎng)民, 傅建熙, 石芳萍

(1.教育部輕化工助劑化學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西科技大學(xué),陜西 西安 710021；2.陜西全昌榮生物科技有限公司, 陜西 楊凌 712100；3.陜西英考鴕鳥股份有限公司, 陜西 西安 710014)

0 引言

鴕鳥(ostrich)原產(chǎn)于非洲北部草原和阿拉伯沙漠地帶，是動(dòng)物界現(xiàn)存鳥類中最大的一種鳥.目前的鴕鳥產(chǎn)品主要包括肉、皮、蛋、羽毛等，是高檔食品、名貴皮革、工藝品、高級(jí)化妝品、藥品和裝飾材料的重要原料[1].鴕鳥油(ostrich oil)來(lái)源于鴕鳥身體的脂肪，含有一系列長(zhǎng)鏈脂肪酸，其組成因其種屬、飼養(yǎng)地點(diǎn)、提取工藝和儲(chǔ)存方式及時(shí)間等其他多種因素的不同而有差異[2],但其主要脂肪酸的含量還是在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，一般含有肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等，其中油酸含量最高.鴕鳥油具有極強(qiáng)的藥用功能，關(guān)于它的最早報(bào)道是澳洲土著人對(duì)鴯鹋油(澳洲鴕鳥)的使用，后來(lái)人們又發(fā)現(xiàn)，如果鴕鳥骨折，只要站立兩分鐘就自動(dòng)修復(fù)好了，目前認(rèn)為是鴕鳥脂肪中的特殊因子起了作用，它可在 3～15 秒內(nèi)修復(fù)損傷細(xì)胞，正是由于這種神奇功效，鴕鳥油被稱為“神油”.研究發(fā)現(xiàn),鴕鳥油有消炎鎮(zhèn)痛的作用，用它涂抹身體可治療多種皮膚病、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕、燒傷燙傷等[3].由于試驗(yàn)鴕鳥油產(chǎn)自中國(guó)，其化學(xué)成分含量和種類會(huì)發(fā)生一定變化，活性也會(huì)受到相應(yīng)的影響，所以筆者在實(shí)驗(yàn)中選擇幾種細(xì)菌以驗(yàn)證鴕鳥油的活性.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物材料

鴕鳥來(lái)自于陜西英考鴕鳥股份公司養(yǎng)殖場(chǎng)，由納米比亞引進(jìn)，屠宰成年鴕鳥，取其肌下脂肪，用索氏提取器乙醚做溶劑進(jìn)行提取.采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析鴕鳥油的組成，其主要成分為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等及少量萜類化合物.將鴕鳥油保存在4 ℃?zhèn)溆?

1.1.2 供試菌種

綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)；乳鏈球菌(Streptococcuslactis)；金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)；大腸桿菌(Escherichiacoli)；枯草芽孢桿菌(Bacillussubtils)；青霉菌(Penicilliumglaucum)；白色念珠菌(Candidaalbicans)；黑曲霉(Aspergillusniger).

1.1.3 培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3.5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH 7.0～7.2.真菌培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1000 mL，pH自然.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌懸液的制備

把各個(gè)測(cè)試菌菌種用營(yíng)養(yǎng)瓊脂活化后，挑取少許新鮮的菌絲體放入5 mL無(wú)菌水中，混合均勻后，用注射器移取一滴于血球計(jì)數(shù)器載玻片小室內(nèi)，蓋上蓋玻片(注意排除氣泡)，顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，最后配成濃度為106cfu/mL的各種菌懸液備用.

1.2.2 鴕鳥油抗菌定性實(shí)驗(yàn)[4]

用無(wú)菌移液管移取0.3～0.5 mL配好的菌懸液于倒好的平板上，用涂布器均勻涂好，備用,每個(gè)菌種制2個(gè)平板.

在每個(gè)營(yíng)養(yǎng)平板中加入4片濾紙片，并使濾紙片展平.在每個(gè)培養(yǎng)平板的3個(gè)濾紙片上分別滴加鴕鳥油10 μL，另一濾紙片作對(duì)照.其中真菌培養(yǎng)皿放在28 ℃下培養(yǎng)48 h后進(jìn)行觀察記錄，細(xì)菌培養(yǎng)皿放在37 ℃下培養(yǎng)24 h后進(jìn)行觀察記錄.測(cè)量其抑菌圈的大小，根據(jù)抑菌圈的大小來(lái)判斷活性的強(qiáng)弱，抑菌圈大，則表明其活性強(qiáng)，抑菌圈小則表明其活性弱.

1.2.3 鴕鳥油最佳抗菌濃度的測(cè)定

將鴕鳥油分別配成4 mg/mL，8 mg/mL，12 mg/mL，16 mg/mL，20 mg/mL，24 mg/mL，28 mg/mL的丙酮溶液,然后取濾紙片(Φ=0.6 cm，已滅菌)浸沒(méi)于以上配制的丙酮溶液中，使其充分飽和，略微風(fēng)干后，接于上述制作好的含菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)組分對(duì)測(cè)試菌分別作2個(gè)重復(fù)，丙酮作為空白對(duì)照.將制好后的培養(yǎng)皿在28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后觀察(真菌)，而細(xì)菌培養(yǎng)皿在37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察, 測(cè)量其抑菌圈的大小[5].

表1鴕鳥油對(duì)3種有抗性供試菌種抗菌圈的測(cè)定

供試菌種抗菌圈直徑綠膿桿菌13.5±0.5白色念珠菌10.8±0.7青霉菌9.0±1.0

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 鴕鳥油抗菌定性實(shí)驗(yàn)

鴕鳥油的定性抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鴕鳥油對(duì)白色念珠菌、綠膿桿菌和青霉3種供試菌有抗性(見(jiàn)表1)，對(duì)另外的5種供試菌沒(méi)有抗性，其中對(duì)綠膿桿菌的抗性最強(qiáng)，對(duì)青霉的抗性最弱.在對(duì)8種菌的空白對(duì)照的平皿中沒(méi)有檢測(cè)到抗菌圈.

表2 各濃度鴕鳥油對(duì)3種有抗性供試菌的抑菌圈的測(cè)定(單位：mm)

注：/表示沒(méi)有抑菌圈.

2.2 鴕鳥油最佳抗菌濃度的測(cè)定

各濃度鴕鳥油的抗菌性見(jiàn)表2，從中看出，鴕鳥油對(duì)于綠膿桿菌的抗性最強(qiáng)，當(dāng)濃度為20 mg/mL時(shí)最大抑菌圈達(dá)到14 mm；其次是白色念珠菌，鴕鳥油對(duì)它的抗菌濃度為4，20，28 mg/mL；青霉菌在鴕鳥油濃度為20和28 mg/mL時(shí)也有較強(qiáng)的抗菌性.由此說(shuō)明鴕鳥油對(duì)于3種有抗性的供試菌的最佳抗菌濃度為20 mg/mL.

3 結(jié)束語(yǔ)

鴕鳥油成分復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)所用的鴕鳥油主要含棕櫚酸、油酸、亞油酸及少量萜類化合物.有文獻(xiàn)報(bào)道產(chǎn)自澳大利亞的鴕鳥油在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌有抗菌性[6]，而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示產(chǎn)自陜西西安的鴕鳥油對(duì)金黃色葡萄球菌沒(méi)有抗性而對(duì)白色念珠菌和青霉有較好的抗性，可能是因?yàn)轼r鳥油中抗菌活性成分的含量不同所致，但還需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)加以證實(shí).

在鴕鳥油的定性抗菌試驗(yàn)中，綠膿桿菌對(duì)鴕鳥油的敏感性很高，其它供試菌未出現(xiàn)抑菌圈，可能是敏感性相對(duì)較低的緣故.由于實(shí)驗(yàn)條件限制，沒(méi)有對(duì)一些特殊致病菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，今后還需要進(jìn)行這方面的研究.從鴕鳥油的最佳抗菌濃度的實(shí)驗(yàn)中可以看出對(duì)于鴕鳥油這種特殊的抗菌動(dòng)物油來(lái)說(shuō)并不是濃度越高抗菌性越好，因?yàn)楦邼舛鹊挠椭炊鴷?huì)為供試菌提供營(yíng)養(yǎng)成分而使抗菌性降低，因此只有濃度適中才能有較好的抗菌性.

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于鴕鳥油的各種活性已進(jìn)行了大量的研究，而對(duì)其作用機(jī)制的研究剛剛起步，這將成為今后鴕鳥油研究的發(fā)展方向.

[1]薛旭初，潘巨忠，黃鴻鳴，等.我國(guó)鴕鳥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀及展望[J].溫州農(nóng)業(yè)科技，2006,(1)：5-7.

[2]李 娟，李小瑞.鴯鹋油的綜合開(kāi)發(fā)利用[J].精細(xì)與專用化學(xué)品，2003，24：14-15.

[3]吳曉英，張聚寶，林 影.平胸類鳥油的開(kāi)發(fā)與利用[J].中國(guó)家禽，2005，27(5)：45-47.

[4]楊森艷，姚 雷.檸檬草精油抗菌性研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版)，2005，23(4)：374-382.

[5]施巧琴，吳松剛.工業(yè)微生物育種學(xué)(第二版)[M].北京：科學(xué)出版社，2003：69-72.

[6]邱學(xué)文，王甲漢，方小文，等.鴯鹋油對(duì)燙傷大鼠炎癥反應(yīng)的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)，2005，26(2)：169-171.