中藥麻黃根的化學(xué)成分研究

楊艷芳， 陸 毅， 吳高峰， 肖夢(mèng)媛， 吳和珍＊

(1.湖北中醫(yī)學(xué)院“中藥資源與中藥復(fù)方”省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢430065;2.湖北福人藥業(yè)股份有限公司，湖北通城437400)

麻黃根來(lái)源于麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf或中麻黃Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey.的干燥根及根莖，為傳統(tǒng)中藥，收載于《中國(guó)藥典》2005年版一部。麻黃根具有止汗功效，臨床上常用于治療自汗、盜汗等證。現(xiàn)代藥理試驗(yàn)研究表明，麻黃根具有抗高血壓作用［1］，但其抗高血壓作用的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。為了闡釋麻黃根抗高血壓作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，作者以自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)為受試對(duì)象，對(duì)麻黃根乙醇提取液的石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位以及水液4個(gè)部位進(jìn)行藥理篩選研究，確定乙酸乙酯部位和正丁醇部位為麻黃根抗高血壓作用活性部位。在此基礎(chǔ)上，對(duì)其中的活性部位乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究，從中分離并鑒定了7種化合物，分別為 β－谷甾醇(1)、豆甾醇－3－O-β-D－吡喃葡萄糖苷(2)、麻黃寧 D(3)、麻黃寧 E(4)、麻黃酚A(5)、表阿夫兒茶精(6)、辛酸乙酯(7)。其中化合物 1、2、6、7 均為首次從該種中藥中分離得到。

1 儀器與材料

Varian INOVA S－600核磁共振譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo));Bruker Daltonics公司 ESI－q－TOF－MS 質(zhì)譜儀(負(fù)離子模式);Agilent 1100半制備高效液相色譜儀;柱色譜硅膠及薄層硅膠GF254為青島海洋化工廠出品;Sephadex LH－20柱色譜材料為Pharmacia公司產(chǎn)品;Toyopearl HW－40F柱色譜材料為日本TOSOH公司產(chǎn)品;所用試劑為化學(xué)純或分析純。

麻黃根藥材采自山西大同，經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室吳和珍副教授鑒定為麻黃科植物草麻黃(Ephedra sinica Stapf)的干燥根和根莖。標(biāo)本保存在湖北中醫(yī)學(xué)院“中藥資源與中藥復(fù)方”省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

麻黃根藥材5.5 kg，以10倍量85%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味。濃縮液依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液分別減壓回收溶劑，干燥，得到各部位浸膏。其中，乙酸乙酯部位浸膏181 g。取該浸膏167 g，加入硅膠(100～200目)220 g拌勻，充分干燥后轉(zhuǎn)至硅膠柱(2 kg，100～200目)上，以二氯甲烷－甲醇系統(tǒng)(9∶1～1∶4)梯度洗脫。收集各部分洗脫液，每份500 mL。洗脫液以TLC檢識(shí)，合并相似流份，共收集得到9個(gè)流分Fr.1～Fr.9。采用反復(fù)硅膠柱層析從Fr.1中得到化合物1(7 mg);采用反復(fù)硅膠柱層析、三氯甲烷－甲醇(2∶1)Toyopearl HW－40F柱色譜從Fr.3中得到化合物2(40 mg);采用反復(fù)硅膠柱層析、三氯甲烷－甲醇(1∶1)Sephadex LH－20柱色譜、制備薄層色譜以及半制備高效液相色譜等分離純化方法從Fr.4 中得到化合物3(90 mg)、4(12 mg)、5(56 mg)、6(33 mg);采用反復(fù)硅膠柱層析從Fr.5中得到化合物7(30 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1:白色針晶(氯仿)，Liebermann－Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，提示該化合物具有甾體母核。其1H－NMR譜數(shù)據(jù)與 β－谷甾醇一致;與β－谷甾醇對(duì)照品共硅膠薄層色譜展開(kāi)比較，兩者色譜行為一致。因此鑒定該化合物為β－谷甾醇(β－sitosterol)。

化合物2:白色無(wú)定形粉末(吡啶)，mp 281～283 ℃。ESI－MS m/z:395［M－Glu－H］－，分子式為:C35H58O6;1H－NMR(C5D5N，600 MHz)δ:5.36(1H，s，H－6)，5.22(1H，m，H－22)，5.10(1H，m，H－23)，5.08(1H，d，J=7.80 Hz，C1′－H)，4.59 ～ 3.97(7H，m，H－3 及 C2′～6′－H)，2.76(2H，m，H－4)，2.49(2H，t，H－2)，1.00(3H，d，J=6.0 Hz，H－21)，0.90(3H，s，H－19)，0.68(3H，s，H－18);13C－NMR(C5D5N，150 MHz)δ:140.9(C－5)，135.8(C－22)，123.2(C－23)，122.0(C－6)，102.6(C－1′)，78.7(C－3′)，78.5(C－3)，78.1(C－5′)，75.4(C－2′)，71.7(C－4′)，62.9(C－6′)，56.9(C－14)，56.3(C－17)，50.4(C－9，C－24)，46.1(C－13)，42.5(C－20)，39.4(C－12)，37.0(C－1，C－4)，36.4(C－10)，32.2(C－8，C－25)，32.1(C－7)，30.3(C－2)，29.5(C－16)，26.4(C－28)，23.4(C－15)，21.3(C－21)，20.0(C－11)，19.5(C－27)，19.3(C－19)，19.0(C－26)，12.2(C－18)，12.0(C－29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［2］報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為豆甾醇－3－O-β-D－吡喃葡萄糖苷(stigmasterol－3－O-β-D－glucopyranoside)。

化合物3:無(wú)色粉末(氯仿－甲醇)。ESI－MS m/z:527［M－H］－，分子式為:C30H24O9，在甲醇中的旋光度為［α］D－104°;1H－NMR(Acetone－d6，600 MHz)δ:7.59(2H，d，J=8.4 Hz，H－2?，H－6?)，7.53(2H，d，J=8.4 Hz，H－2′，H－6′)，6.90(2H，d，J=8.4 Hz，H－3′，H－5′)，6.89(2H，d，J=8.4 Hz，H－3?，H－5?)，6.22(1H，s，H－6″)，2.18(2H，d，J=3.0 Hz，H－3)，6.04(1H，d，J=2.4 Hz，H－8)，5.98(1H，d，J=2.4 Hz，H－6)，5.03(1H，brs，H－2″)，4.32(1H，s，H－3″)，4.38(1H，s，H－4)，2.97(2H，d，J=4.8 Hz，H－4″);13C－NMR(Acetone－d6，150 MHz)δ:158.5(C－4′)，158.2(C－4?)，158.0(C－8a)，155.8(C－5″)，155.4(C－7)，154.2(C－5)，152.2(C－7″)，151.6(C－8″a)，134.0(C－1′)，130.3(C－1?)，130.0(C－2?，C－6?)，127.8(C－2′，C－6′)，115.7(C－3′，C－5′)，115.6(C－5?)，115.5(C－3?)，107.1(C－8″)，106.8(C－4a)，102.0(C－4″a)，99.1(C－2)，97.8(C－6″)，96.9(C－8)，96.3(C－6)，81.6(C－2″)，66.0(C－3″)，34.6(C－3)，30.6(C－4″)，21.0(C－4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道的麻黃寧D的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定該化合物為麻黃寧D(Mahuannin D)。

化合物4:無(wú)色針晶(氯仿－甲醇)。ESI－MS m/z:527［M－H］－，分子式為:C30H24O9;1H－NMR(Acetone－d6，600MHz)δ:7.52(2H，d，J=7.8 Hz，H－2?，H－6?)，7.38(2H，d，J=7.8 Hz，H－2′，H－6′)，6.88(2H，d，J=7.8 Hz，H－3′，H－5′)，6.88(2H，d，J=7.8 Hz，H－3?，H－5?)，6.18(1H，s，H－6″)，6.01(1H，d，J=2.4 Hz，H－8)，5.89(1H，d，J=2.4 Hz，H－6)，4.81(1H，brs，H－2″)，4.28(1H，s，H－4)，4.22(1H，d，J=4.8 Hz，H－3″)，2.59(2H，dd，J=6.6 Hz，15.6 Hz，H－4″)，2.20(2H，dd，J=3.0 Hz，19.2 Hz，H－3);13C－NMR(Acetone－d6，150 MHz)δ:157.9(C－4′)，157.8(C－4?)，157.4(C－7)，154.7(C－5″)，154.6(C－5)，153.6(C－8a)，151.7(C－7″)，150.0(C－8″a)，133.4(C－1′)，129.3(C－1?)，129.2(C－2?，C－6?)，127.3(C－2′，C－6′)，115.4(C－3?)，115.0(C－3′，C－5′)，106.2(C－8″)，106.0(C－4a)，102.0(C－4″a)，98.6(C－2)，97.0(C－6″)，96.3(C－6)，95.8(C－8)，83.0(C－2″)，67.2(C－3″)，33.8(C－3)，29.9(C－4″)，20.6(C－4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道的麻黃寧E的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定該化合物為麻黃寧E(Mahuannin E)。

化合物5:淺黃色針晶(氯仿－甲醇)，mp＞360℃。ESI－MS m/z:555［M－H］－，分子式(含水結(jié)晶)為:C30H20O11· 2H2O;1H－NMR(Acetone－d6，600 MHz)δ:8.53(2H，d，J=9.0 Hz，H－2?，H－6?)，7.59(2H，d，J=9.0 Hz，H－2′，H－6′)，7.02(2H，d，J=9.0 Hz，H－3?，H－5?)，6.90(2H，d，J=9.0 Hz，H－3′，H－5′)，6.32(1H，s，H－6″)，6.12(1H，d，J=2.4 Hz，H－8)，6.07(1H，d，J=2.4 Hz，H－6)，5.06(1H，d，J=3.0 Hz，H－4)，4.35(1H，s，H－3);13C－NMR(Acetoned6，150 MHz)δ:176.5(C－4″)，160.1(C－5″)，159.3(C－4?)，158.6(C－7″)，158.0(C－8a)，157.4(C－5，C－7)，154.0(C－8″a)，152.6(C－4′)，147.5(C－2″)，136.7(C－3″)，131.1(C－2?，C－6?)，130.7(C－1′)，129.2(C－2′，C－6′)，123.4(C－1?)，116.1(C－3′，C－5′)，115.4(C－3?，C－5?)，107.4(C－4″a)，105.1(C－4a)，102.6(C－8″)，100.6(C－2)，98.9(C－6″)，97.2(C－6)，95.9(C－8)，67.2(C－3)，29.1(C－4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道的麻黃酚A(ephedrannin A)的數(shù)據(jù)一致，故鑒定該化合物為麻黃酚A(ephedrannin A)。

化合物6:無(wú)色針晶(甲醇)，mp 246℃。ESIMS m/z:273［M－H］－，分子式為:C15H14O5;該化合物在227 nm、274 nm處有強(qiáng)吸收，與FeCl3反應(yīng)呈陽(yáng) 性，顯 示 有 酚 羥 基。1H－NMR(Acetone－d6，600 MHz)δ:7.34(2H，d，J=8.4 Hz，H－2′，H－6′)，6.79(2H，d，J=8.4 Hz，H－3′，H－5′)，6.00(1H，d，J=2.4 Hz，H－8)，5.90(1H，d，J=2.4 Hz，H－6)，4.91(1H，s，H－2)，4.20(1H，dd，J=3.6 Hz，4.8 Hz，H－3)，2.94(1H，s，C3－OH)，2.87(1H，dd，J=16.2 Hz，4.8 Hz，H－4α)，2.74(1H，dd，J=16.2 Hz，3.6 Hz，H－4β);13C－NMR(Acetone－d6，150 MHz)δ:157.0(C－4′)，156.9(C－7，C－8a)，156.5(C－5)，130.8(C－1′)，128.5(C－2′，C－6′)，114.8(C－3′，C－5′)，99.1(C－4a)，95.5(C－6)，95.0(C－8)，78.8(C－2)，66.2(C－3)，28.5(C－4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道的(2R，3R)(－)表阿夫兒茶精的波譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定該化合物為表阿夫兒茶精(epiafzelechin)。

化合物7:無(wú)色油狀液體。ESI－MS m/z:171［MH］－，分子式為:C10H20O2;1H－NMR(CDCl3，600 MHz)δ:4.12(2H，q，J=7.2 Hz，H－9)，2.05(2H，s，H－2)，1.26(3H，t，J=7.2 Hz，H－10)，1.25 ～ 1.32(10H，m，H－3 ～ 7)，0.85(3H，t，J=6.0 Hz，H－8);13C－NMR(150 MHz，CDCl3)δ:171.1(C－1)，60.4(C－9)，31.9(C－2)，29.7(C－6)，29.6(C－4)，29.3(C－5)，22.6(C－3)，21.0(C－7)，14.1(C－8)，14.1(C－10)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為辛酸乙酯。

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