暗紫貝母的研究概況

韻海霞， 陳 志

（1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院高原醫(yī)學(xué)研究中心，青海西寧 810001;2.青海師范大學(xué)生命與地理科學(xué)學(xué)院，青海 西寧 810008）

植物貝母屬百合科，種類繁多，全世界約130種，主要分布于北半球溫帶地區(qū)，特別是亞洲東部和中部、地中海區(qū)域、北美洲等地［1］。《中國貝母屬植物研究》認(rèn)為中國貝母屬植物主要種類約34種［2］。除南方幾個(gè)省以外，我國大多數(shù)地區(qū)都有分布。貝母具有清熱潤肺、化痰止咳及散結(jié)的功效，其化學(xué)成分的研究一直為人們所重視。

川貝母為百合科Liliaceae貝母屬FritillariaL.多種植物的干燥鱗莖，有清熱潤肺、化痰止咳的功效，主治肺熱燥咳、咯痰帶血、痰多胸悶等癥。2005年版《中國藥典》收載川貝母為百合科植物川貝母Fritillaria.cirrhosaD.Don、暗紫貝母Fritillaria.unibracteata Hsiaoet K.C.Hsia、甘肅貝母Fritillaria.przewalskiiMaxim.或梭砂貝母Fritillaria.delavayiFranch.的干燥鱗莖，前三者按形狀不同分別習(xí)稱“松貝”和“青貝”，后者習(xí)稱“爐貝”［3］。川貝母生長于海拔 3 000－4 000 m的山坡草叢或陰濕的小灌木叢中，主產(chǎn)于四川甘孜州、阿壩州及與青海、甘肅、西藏交界的地區(qū)［4］。近幾年有關(guān)川貝母的研究進(jìn)展迅速，在植被分布、生藥學(xué)、化學(xué)成分、質(zhì)量評(píng)價(jià)、加工工藝、組織培養(yǎng)、藥理作用等方面都取得了很大進(jìn)展，現(xiàn)就國內(nèi)外對(duì)川貝母基源植物（以暗紫貝母為主）的研究概況作一綜述。

1 生態(tài)及植被分布研究

生態(tài)型是道地藥材產(chǎn)生的生物學(xué)實(shí)質(zhì)［5］。陳士林等［5］對(duì)暗紫貝母的生態(tài)分布及植被性質(zhì)作了較詳盡的研究，為川貝母的野生撫育提供了一定的基礎(chǔ)，同時(shí)結(jié)合植物生態(tài)學(xué)、數(shù)值分類學(xué)，運(yùn)用計(jì)算機(jī)手段在中藥資源定量研究方面作了一些新的嘗試，試圖為道地藥材的研究提供一些新的思路和方法。

暗紫貝母（F.unibiacteataHsiao et K.C.Hsia）是貝母屬中較名貴的中藥材，其鱗莖可以有效止咳、祛痰、清熱潤肺，尤其適合于老年人和兒童久治不愈的頑固性虛寒咳嗽。暗紫貝母在中藥材市場(chǎng)上的需求量特別高，但是其鱗莖生長速度特別慢，從種子長成商品藥材一般需要四年的時(shí)間［6］。暗紫貝母主要分布于四川省若爾蓋高原和川西高山峽谷東段，包括四川阿壩州各縣以及青海久治、斑瑪?shù)鹊?，生長于海拔3 200～4 500 m的草甸和灌叢中［7］。分布地勢(shì)高亢寒冷、日照強(qiáng)烈、空氣干燥、春秋短暫。主產(chǎn)區(qū)若爾蓋、紅原兩縣因受地形、寒流等影響，常年無夏，這種氣候特點(diǎn)構(gòu)成了暗紫貝母生長的特殊生境條件。暗紫貝母生長區(qū)的土壤類型主要為高山灌叢草甸和亞高山灌叢草甸，腐殖層較厚，呈酸性反應(yīng)，以若爾蓋高原區(qū)所產(chǎn)川貝母為最優(yōu)的商品規(guī)格［7，8］，如此苛刻的生長環(huán)境條件，就決定了暗紫貝母不可能在田間或在溫室里栽種。陳世林等［7］將暗紫貝母分布的群落明顯分為5個(gè)類型，分別為繡線菊+金露梅－珠芽蓼群落、窄葉鮮卑花+環(huán)線柳+毛蕊杜鵑群落、委陵菜+條葉銀蓮花群落、毛蕊杜鵑－棱子芹群落、金露梅－太白韭+太白棱子芹群落。中藥資源研究是一項(xiàng)多學(xué)科滲透而且綜合性很強(qiáng)的工作，所以應(yīng)注重其系統(tǒng)的整體性、聯(lián)系性和有序性［7］。目前，對(duì)川貝母的野生撫育及建立川貝野生藥材生產(chǎn)保護(hù)區(qū)的研究已成為當(dāng)務(wù)之急，因此，從植被等宏觀生態(tài)入手研究川貝母的生產(chǎn)及生態(tài)保護(hù)已引起中藥界的極大關(guān)注。

2 化學(xué)研究

2.1 化學(xué)成分 貝母化學(xué)成分的研究報(bào)道始見于1888年，F(xiàn)ragner首先從德旺貝母（Fritillaria imperialis）中分離到蒂貝靈（imperialine）［2］。從此，植物化學(xué)工作者就以貝母的堿性成分為對(duì)象對(duì)許多種貝母進(jìn)行了研究，到20世紀(jì)50年代中期取得較大進(jìn)展，朱子清教授等用硒脫氫降解的方法確定了貝母異甾生物堿的骨架，溝通了貝母生物堿與藜蘆生物堿的關(guān)系，是結(jié)構(gòu)研究中的一大突破［9］。貝母在我國具有悠久的用藥歷史，我國從1935年開始生物堿的研究，目前已發(fā)現(xiàn)貝母屬中主要有效成分為異甾體生物堿與甾體生物堿。到目前為止已經(jīng)分離并確定結(jié)構(gòu)的有100余個(gè)化合物，其中異甾體生物堿占75%，膽甾衍生物次之［10］。從大量文獻(xiàn)報(bào)道可以得知［2］，貝母屬植物生物堿的研究比較深入，而對(duì)非生物堿的研究較少，在所有貝母屬中對(duì)浙貝母、平貝母、湖北貝母、伊貝母的研究比較多，對(duì)川貝母的研究較少。川貝母基源植物尤其是暗紫貝母中提取出的生物堿類成分不是很多，從川貝母分離得到的生物堿成分主要有西貝素、貝母辛、松貝辛、川貝酮、松貝甲素、松貝乙素等［2］。K.Kaneko［11］等從暗紫貝母中提取出了川貝酮，余世春［12，13］等從暗紫貝母中分離得到了松貝辛、松貝甲素和松貝乙素。對(duì)貝母屬植物非生物堿的成分最早始于1944年，迄今從貝母屬分離到的非生物堿類成分大約有40多種，主要含有萜類、甾體、脂肪酸、嘌呤、嘧啶等類化合物［14］。除以上幾類成分外，還從貝母屬植物中得到蔗糖，琥珀酸、胸苷、腺苷、2，5－二甲氧基苯酮（2，5－dimethoxy－1，4－benzoquinone）、硬脂酸、軟脂酸等成分［15］。研究發(fā)現(xiàn)川貝母中主要的非生物堿成分有β－谷甾醇、油酸、木質(zhì)素類化合物、反式對(duì)羥基桂皮酸、蔗糖、β－D－吡喃葡萄糖、4－1β－D－吡喃半乳糖、β－谷甾醇－3－O－β－D－吡喃葡萄糖甙、硬脂酸和軟脂酸混合物等［11，16］。Wang shujun 等［17］分析了從松貝、青貝、爐貝三種貝母中提取的淀粉顆粒的物化性質(zhì)、形狀、晶形等特點(diǎn)。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 總生物堿含量測(cè)定 《中國藥典》2005年版中未收載川貝母有效成分的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。目前，貝母中總生物堿含量的測(cè)定主要用到容量法，容量法包括酸堿滴定法、兩相滴定法［18］。川貝母中的總生物堿為其主要有效成分，而貝母辛又是總生物堿的主要組成成分。余華等［19］建立了中藥川貝母中貝母辛的定量分析方法，研究選取貝母辛作為川貝母的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)來建立其質(zhì)量控制方法，可以更為科學(xué)地反映川貝母的內(nèi)在質(zhì)量。張秀琴等［19］用兩相滴定法建立了以西貝素計(jì)算貝母藥材中總生物堿含量的方法。同時(shí)馬利瓊等［19，20］也利用兩相滴定法建立了以貝母辛計(jì)算貝母中總生物堿含量的方法，并采用兩相滴定法測(cè)定了藥典收載的17個(gè)不同產(chǎn)地的川貝母生物堿的含量。杜建紅等［21］以兩相滴定法測(cè)定瓦布貝母的野生松貝及家種松貝、家種青貝的總生物堿百分含量。宋福坤等［22］采用紫外分光光度法測(cè)定并比較了湖北貝母和川貝母的總生物堿含量，結(jié)果表明兩者的總生物堿含量有顯著性差異，為湖北貝母不能做川貝母的代用品提供了依據(jù)。王曙等［23］通過測(cè)定和比較川貝母與其他貝母類藥材在總生物堿和總皂苷的含量上的區(qū)別，探討建立合理的川貝母有效成分含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的途徑，認(rèn)為主要成分含量的差異給解釋川貝母的獨(dú)特藥理活性和制訂合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了新的思路。辛寧［24］測(cè)定并比較了不同規(guī)格川貝母總生物堿和西貝素的含量，研究表明，松貝粒數(shù)應(yīng)在一定范圍內(nèi)才遵循粒數(shù)越小，有效成分含量越高的規(guī)律，而顆粒過小，有效成分含量反而降低。王沖之等［25］建立酸水解－酸性染料比色法同時(shí)測(cè)定貝母類藥材中生物堿及生物堿苷含量的方法，解決了生物堿苷難以測(cè)定的問題。

2.2.2 單一生物堿含量測(cè)定 李萍和沙振方［18］分別用雙波長鋸齒掃描測(cè)定西貝素含量。晁若冰等［18］用高效液相色譜法測(cè)定了貝母中的貝母辛含量。吳宗好等［18］用雙波長鋸齒掃描測(cè)定了貝母中川貝酮和貝母辛的含量。朱丹妮等［26］用高效液相色譜法測(cè)定了貝母類藥材中生物堿成分貝母甲素的含量。杜建紅等［21］用雙波長薄層掃描法測(cè)定了瓦布貝母的野生松貝及家種松貝、家種青貝所含的西貝堿含量，結(jié)果表明家種品中西貝堿含量高于野生品。上官一平等［27］用酸性染料比色法測(cè)定川貝母中貝母素甲含量，建立了川貝母中貝母甲素的含量測(cè)定方法，提示貝母素甲可作為川貝母的質(zhì)量控制指標(biāo)。

3 采收及加工工藝

鄺翠儀等［28］提取3種不同加工方法處理的川貝母總皂苷和總生物堿并測(cè)定其含量，測(cè)得傳統(tǒng)加工法、水洗法、打硫法處理三種方法中，顯示水洗加工方法為優(yōu)，總生物堿及總皂苷的含量為最高。藍(lán)日盛等［29］也考察了不同采收期及加工方法的川貝母有效成分含量。肖丹［30］采用酸堿滴定法測(cè)定了川貝粉和川貝微粉在不同時(shí)間內(nèi)總生物堿的溶出量，結(jié)果川貝微粉在各時(shí)間點(diǎn)的溶出量均大于川貝粉。陳萍等［31］采用均勻設(shè)計(jì)安排試驗(yàn)，以浸膏得率和西貝堿含量為考察指標(biāo)，對(duì)川貝母滲漉提取工藝中影響效果的乙醇濃度、乙醇用量、浸潤時(shí)間三因素及條件進(jìn)行優(yōu)化，篩選出最佳的提取工藝條件。蔡治剛等［32］采用正交實(shí)驗(yàn)，將回流提取與滲漉提取法進(jìn)行比較，篩選了川貝母的最佳乙醇回流提取條件，以便提高川貝母的提取率。

4 暗紫貝母鱗莖器官培養(yǎng)研究

植物組織培養(yǎng)是近幾年發(fā)展較快，應(yīng)用價(jià)值較高的生物技術(shù)之一，在藥用植物開發(fā)研究和生產(chǎn)中具有特殊的意義和應(yīng)用潛力。

4.1 培養(yǎng)基對(duì)暗紫貝母鱗莖器官培養(yǎng)的影響 選擇合適的培養(yǎng)基是組織培養(yǎng)的首要環(huán)節(jié)，不同的外植體，不同培養(yǎng)階段和目的，所需要的培養(yǎng)基均不同。高山林等［6］建立了暗紫貝母鱗莖器官的離體培養(yǎng)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)用了四種不同的培養(yǎng)基（MS、B5、SH 和67－V），結(jié)果表明 MS培養(yǎng)基對(duì)于暗紫貝母鱗莖培養(yǎng)是最合適的，生長速度最快，和其它三種培養(yǎng)基比較，有顯著性差異。徐德然等［33］對(duì)暗紫貝母鱗莖在4種不同培養(yǎng)基上的生長率和產(chǎn)量的研究結(jié)果也證實(shí)以MS培養(yǎng)基為最佳，在MS培養(yǎng)基上的生長量分別為B5、SH、67－V培養(yǎng)基的1.52、1.57和1.67倍。近年來，由于過度采挖，資源逐年減少，商品供不應(yīng)求，價(jià)格不斷上漲，再加上暗紫貝母生長環(huán)境特殊，難于進(jìn)行人工栽培，為了擴(kuò)大藥源，合理開發(fā)利用，開展組織培養(yǎng)快速生產(chǎn)暗紫貝母鱗莖的研究勢(shì)在必行。

4.2 溫度、光照對(duì)暗紫貝母鱗莖器官培養(yǎng)的影響 植物的生長過程中，溫度和光照是兩個(gè)重要的環(huán)境因子，影響細(xì)胞增殖、器官分化、次生代謝物的合成等。蔡朝暉等［34］對(duì)暗紫貝母培養(yǎng)的溫度、光照及培養(yǎng)方法進(jìn)行了研究，試圖找出最佳的培養(yǎng)條件和方法，從而得到生長迅速、生物堿含量高的暗紫貝母培養(yǎng)鱗莖。研究結(jié)果表明:無論是光培養(yǎng)還是暗培養(yǎng)，25℃條件下的生長率略低于20℃條件下的生長率，但差異不大。在15℃低溫條件下，生長率明顯降低，光培養(yǎng)和暗培養(yǎng)的平均生長率比20℃條件下下降23%。

4.3 培養(yǎng)方法對(duì)暗紫貝母鱗莖器官培養(yǎng)的影響 蔡朝暉等［34］對(duì)暗紫貝母培養(yǎng)的培養(yǎng)方法進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)證明，搖床液體培養(yǎng)的生長率最高，固體培養(yǎng)次之，轉(zhuǎn)床液體培養(yǎng)生長得最慢。但是固體培養(yǎng)和轉(zhuǎn)床液體培養(yǎng)之間的差異不顯著，但它們與搖床液體培養(yǎng)間的差異極顯著。生物堿含量以搖床液體培養(yǎng)最高（0.067 53%），固體培養(yǎng)次之（0.066 85%），轉(zhuǎn)床液體培養(yǎng)最低（0.050 25%）。

4.4 暗紫貝母鱗莖器官培養(yǎng)生長特征 高山林等［35］應(yīng)用組織培養(yǎng)中器官培養(yǎng)技術(shù)對(duì)暗紫貝母進(jìn)行了生長量、生物堿含量等指標(biāo)和培養(yǎng)天數(shù)之間關(guān)系的研究。結(jié)果表明，在適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)材料的生長率隨培養(yǎng)天數(shù)增加而迅速增長，但增長速度在各個(gè)培養(yǎng)階段差異較大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，暗紫貝母鱗莖在適宜培養(yǎng)基上生長最快的時(shí)期是培養(yǎng)后30～50 d，培養(yǎng)30－50 d期間是鱗莖組織快速生長期。50 d時(shí)鱗莖培養(yǎng)物中干物質(zhì)積累最高，為適宜采收期。培養(yǎng)鱗莖在全生長階段中生物堿含量都較高，是野生商品藥材的1.22～1.50倍，從而有效地保持和提高了主要化學(xué)成分，商品暗紫貝母中含量為0.040 30%，組織培養(yǎng)物中的各批樣含量0.049 05%～0.060 31%，均高于商品藥材，是商品藥材的1.22～1.50倍，說明鱗莖組織培養(yǎng)可以有效地保持原商品藥材的有效化學(xué)成分，從而可望保持應(yīng)有的藥效。

4.5 其他元素含量 高山林等［6］研究表明離體培養(yǎng)的暗紫貝母鱗莖中 K、Na、Ca、Mg、Zn、Mn、Fe、Mo 和 Co 的濃度明顯高于野生鱗莖，而Cu、Ni和Cr在培養(yǎng)的和野生中的濃度相差不大。吳忠等［36］采用灰色系統(tǒng)理論對(duì)浙貝母、川貝母微量元素?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行了關(guān)聯(lián)度分析，并用微量元素含量均值偏移度法對(duì)浙貝母和川貝母進(jìn)行了鑒別分類，為利用微量元素鑒別中藥材提供了一定的理論依據(jù)。

5 藥理作用研究

貝母作為我國傳統(tǒng)中藥材具有悠久的藥用歷史。據(jù)歷代本草記載，在唐代至明代后期，湖北貝母與浙貝母一直占據(jù)貝母的主要地位［37］。貝母在明代以前并無川貝、浙貝、土貝之分，至清始有象貝、土貝的性味功用之記載［37］。《中國藥典》2005版一部中收載了川貝母、浙貝母、湖北貝母、伊貝母和平貝母五種貝母［3］。貝母目前主要應(yīng)用所涉及的藥理作用包括鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、心血管活性、抗?jié)儭⒖寡“寰奂?、抗腫瘤等?？偵飰A具有顯著的鎮(zhèn)咳、祛痰作用，總皂苷具有明顯的祛痰作用［38］。而在臨床用藥中，因不同品種來源，貝母的主治功能不同而又有不同的用藥習(xí)慣。高山林等［39］將組織培養(yǎng)的暗紫貝母鱗莖用不同溶劑提取，得4個(gè)化學(xué)組分，總生物堿部分、總皂苷部分、水溶性部分和脂溶性部分，并以原種暗紫貝母為對(duì)照，采用氨水引咳法對(duì)4個(gè)化學(xué)組分進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，組培貝母與野生貝母有相似的止咳、祛痰作用，因此認(rèn)為組培貝母鱗莖可以替代原種貝母鱗莖。徐惠波等［40］對(duì)伊犁貝母總生物堿（FPA）和梭砂貝母總生物堿（FDA）生物活性進(jìn)行了初步比較，伊犁貝母和梭砂貝母的總生物堿分別以400 mg/kg、200 mg/kg劑量一次性灌胃給藥，具有明顯的抑菌作用。伊犁貝母的作用效果在某些方面略強(qiáng)于梭砂貝母，伊犁貝母對(duì)流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌等多種細(xì)菌有不同程度的抑制作用，梭砂貝母則較弱。周穎等［41］研究了貝母的有效成分貝母甲素、貝母乙素、西貝素、西貝素苷和蒲貝酮堿5種甾體生物堿的平喘機(jī)制（對(duì)氣管M受體的拮抗作用），結(jié)果表明5種貝母生物堿均可使卡巴膽堿引起氣管條收縮的量效曲線右移，提示有舒張氣管、平喘的作用。

6 討論和建議

近幾年來，對(duì)貝母化學(xué)成分、藥理作用、組織培養(yǎng)等研究取得了較大成果，但是對(duì)川貝母的基源植物暗紫貝母的研究資料尚不多見，決定暗紫貝母功效的主要活性成分有待于進(jìn)一步研究。暗紫貝母作為川貝母中“松貝”的主要來源，現(xiàn)資源瀕危，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足商品要求，因此今后的研究需要從以下幾個(gè)方面入手:（1）深入研究暗紫貝母的化學(xué)成分，并進(jìn)行藥理活性成分篩選，研究活性成分的藥理作用;（2）做好資源調(diào)查和資源的保護(hù)工作，深入研究人工組培技術(shù)，以提供市場(chǎng)的大量需求。

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