牛傳染性疾病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較與適用性評估

史喜菊，馬貴平，李冰玲，李炎鑫，劉全國

（北京出入境檢驗檢疫局，北京 100026）

1 前言

國際動物衛(wèi)生組織（OIE）制定的動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是WTO中SPS協(xié)定唯一認(rèn)可的動物衛(wèi)生規(guī)則，作為技術(shù)法規(guī)和仲裁國際貿(mào)易糾紛的技術(shù)依據(jù)，得到了世界各國獸醫(yī)工作者的一致認(rèn)可。OIE的診斷標(biāo)準(zhǔn)體系完善、內(nèi)容科學(xué)，有分布于全球的150多個參考實(shí)驗室作為技術(shù)后盾，這些診斷技術(shù)代表了全世界獸醫(yī)工作的最高水平，科學(xué)性、實(shí)用性和先進(jìn)性都很強(qiáng)，是世界各國在獸醫(yī)技術(shù)能力建設(shè)上所參照的國際標(biāo)準(zhǔn)。隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程的加快，動物和動物產(chǎn)品的國際貿(mào)易也進(jìn)入了國際競爭時代，各國對動物的健康狀況和衛(wèi)生水平以及動物產(chǎn)品的安全性提出了更加苛刻的要求，一些國家借此設(shè)置各種貿(mào)易技術(shù)壁壘，限制別國的產(chǎn)品出口，以此實(shí)現(xiàn)貿(mào)易保護(hù)。

近幾年來，在國家標(biāo)準(zhǔn)委和認(rèn)監(jiān)委的指導(dǎo)下，在各級動物防疫和口岸檢驗檢疫機(jī)構(gòu)以及廣大制標(biāo)人員的共同努力下，我國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作取得了一定的成績，但還沒有建立起與國際接軌的動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系，用國際標(biāo)準(zhǔn)衡量時，我們所制定的標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)水平和內(nèi)容的涵蓋范圍還有諸多不足，動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化工作還遠(yuǎn)不能適應(yīng)入世后的貿(mào)易和社會發(fā)展需要。為了應(yīng)對國際貿(mào)易的需要，促進(jìn)國家標(biāo)準(zhǔn)、國家法規(guī)的協(xié)調(diào)性特別是與國際標(biāo)準(zhǔn)的接軌，現(xiàn)以O(shè)IE規(guī)定的牛傳染性疾?。?8種）為例進(jìn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較，為動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作提供參考。

2 OIE規(guī)定的牛傳染性疾病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的比較

2.1 牛無漿體?。˙ovine anaplasmosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛無漿體病的OIE診斷標(biāo)準(zhǔn)包括涂片染色、核酸檢測、競爭ELISA、卡片凝集試驗、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗、間接ELISA、Dot ELISA以及間接熒光抗體試驗，共計8個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中涂片鏡檢適用于無漿體病急性感染期的檢測，一些國家有商品化試劑盒供應(yīng)；核酸檢測技術(shù)敏感性非常高，可以檢測帶菌牛，但套式PCR存在非特異性擴(kuò)增的問題；競爭ELISA可以檢測持續(xù)感染動物，是無漿體病血清學(xué)診斷的首選方法，敏感性和特異性分別達(dá)到96%和95%，2.5h出結(jié)果，有商品化試劑盒供應(yīng)；卡片凝集試驗可以在實(shí)驗室內(nèi)或者田間進(jìn)行，是無漿體病血清學(xué)診斷的首選方法，敏感，快速，幾分鐘出結(jié)果，但存在非特異性反應(yīng)，結(jié)果解釋帶有主觀性差異，批間或?qū)嶒炇议g差異大；補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗敏感性波動范圍比較大，重現(xiàn)性差，大部分病原攜帶者不能被檢出，不再推薦用于檢測感染動物；間接ELISA是檢測陽性血清的可靠工具，可以100%檢出感染長達(dá)3年之久的陽性血清；Dot-ELISA快速、容易操作，成本低，敏感性和特異性分別達(dá)到93%和96%；間接熒光抗體試驗每天檢測的樣品數(shù)量有限，存在非特異性熒光反應(yīng)。牛無漿體病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)只有一個快速凝集檢測方法，對應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的卡片凝集試驗，比較單薄，應(yīng)該加強(qiáng)制修訂工作。檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括涂片鏡檢、核酸檢測、競爭ELISA、間接ELISA和Dot ELISA以及補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗操作方法，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相對比較完善，除缺失的凝集試驗有國家標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充之外，只缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的間接熒光抗體試驗。

2.2 牛布氏桿菌?。˙ovine brucellosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

OIE有關(guān)布氏桿菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn)很多，包括病原鑒定5個（染色技術(shù)、病原培養(yǎng)、鑒定和分型、核酸檢測、疫苗株鑒別）、血清學(xué)實(shí)驗6個（玫瑰苯凝集、緩沖平板凝集、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗、間接ELISA、競爭ELISA、熒光偏振試驗）及其他方法6個（皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、血清凝集試驗、天然半抗原和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白試驗、牛奶間接ELISA、牛奶環(huán)狀試驗、gamma干擾素試驗），共計17個標(biāo)準(zhǔn)方法，其中6個血清學(xué)方法都是國際貿(mào)易指定使用的方法。染色技術(shù)（形態(tài)學(xué)或免疫特異性組織染色）是布氏桿菌病的假定證據(jù)，但對于病原數(shù)量低的牛奶和奶制品敏感性低，脂肪球?qū)Y(jié)果解釋也有干擾；病原培養(yǎng)是從病料中分離布氏桿菌，是本病的確診試驗；鑒定要靠細(xì)菌形態(tài)學(xué)和生化特征等聯(lián)合應(yīng)用，菌落形態(tài)觀察對分型是必需的；核酸檢測可以檢測和鑒別布氏桿菌，進(jìn)行種屬鑒別和生物分型鑒定，區(qū)分疫苗株和感染株，是流行病學(xué)調(diào)查的工具，快速、簡單、明確，解決了錯誤鑒別的難題；疫苗株鑒別是根據(jù)不同疫苗株各自的生化特性進(jìn)行鑒別。玫瑰苯凝集是一種簡單的斑點(diǎn)凝集試驗，適合于快速篩選感染動物或者對無布病畜群進(jìn)行無感染檢疫，非常敏感，是國際貿(mào)易指定使用的方法；緩沖平板凝集非常敏感，特別適用于檢測疫苗接種誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，是國際貿(mào)易指定使用的方法；補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗使用很廣泛，是一般公認(rèn)的確診試驗，但操作復(fù)雜，需要良好的實(shí)驗室設(shè)施和訓(xùn)練良好的操作人員，特異性強(qiáng)，是國際貿(mào)易指定使用的方法；間接ELISA有商品化試劑供應(yīng)，已經(jīng)經(jīng)過了廣泛的田間驗證，敏感性高，但不能區(qū)分免疫抗體和感染抗體，在檢測感染動物時其敏感性等于或高于BBAT，是國際貿(mào)易指定使用的方法；競爭ELISA有商品化試劑供應(yīng)，特異性比間接ELISA強(qiáng)，但特異性降低了，在檢測感染家畜時其敏感性與BBAT和間接ELISA相當(dāng)，是國際貿(mào)易指定使用的方法；熒光偏振試驗敏感性和特異性與競爭ELISA相當(dāng)，非常快速，適合于實(shí)驗室內(nèi)和田間使用，是國際貿(mào)易指定使用的方法。皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)適用于篩選未免疫接種畜群，也可以輔助解釋血清學(xué)交叉反應(yīng)結(jié)果特別是在無布病地區(qū)，特異性非常高，但并不能作為單獨(dú)的診斷試驗或用于國際貿(mào)易目的而推薦使用；血清凝集試驗在牛布病的監(jiān)測和控制計劃中已經(jīng)成功應(yīng)用了很多年，但一般認(rèn)為用于國際貿(mào)易目的使用效果不理想；天然半抗原和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白試驗高度特異，與RBT快速篩選試驗一起成功地用于布病根除計劃，最佳敏感性接近于CFT，但低于RBT和I-ELISA；牛奶間接ELISA敏感而特異，特別適用于大規(guī)模畜群的檢測，有幾種商品化試劑盒供應(yīng)，并且都已經(jīng)經(jīng)過了廣泛的田間試驗驗證，正在廣泛使用；牛奶環(huán)狀試驗是ELISA的適當(dāng)替代方法，用于泌乳動物畜群布病的篩查；gamma干擾素試驗很有用，但是需要特異性較強(qiáng)的抗原，程序也要標(biāo)準(zhǔn)化。有關(guān)牛布病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)屬于空白，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括4個，分別對應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、平板凝集試驗、牛奶環(huán)狀試驗和血清凝集試驗，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的其余13個方法，與OIE標(biāo)準(zhǔn)差距比較大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.3 牛生殖道彎曲桿菌?。˙ovine genital campylobacteriosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛生殖道彎曲桿菌病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病原分離、種屬鑒定、免疫學(xué)鑒定、生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定及ELISA，共計6個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病原分離和鑒定是確診方法，是國際貿(mào)易指定使用的方法；免疫學(xué)鑒定技術(shù)可以直接從樣品中鑒定抗原，對分離株進(jìn)行鑒定，但不能區(qū)分亞種，是國際貿(mào)易指定使用的方法；生化鑒定可以鑒定亞種，是國際貿(mào)易指定使用的方法；分子鑒定可以鑒定亞種，但比較耗時，而且需要昂貴的設(shè)備和專業(yè)知識；ELISA檢測抗原特異性分泌抗體和疫苗接種后的血清抗體。相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)屬于空白；檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病原分離、種屬鑒定和生化鑒定方法，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的免疫學(xué)鑒定和分子鑒定及ELISA試驗，差距較大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂任務(wù)。

2.4 牛海綿狀腦?。˙ovine spongiform encephalopathy）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛海綿狀腦病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括組織病理學(xué)檢查、免疫組織化學(xué)檢查、蛋白免疫印跡方法、快速篩選試驗和SAF電鏡檢查，共計5個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中組織病理學(xué)檢查適用于福爾馬林固定的牛腦組織，是牛海綿狀腦病診斷的基礎(chǔ)，可以加速疾病的診斷，但已經(jīng)不再是調(diào)查疑似動物或?qū)】敌笕哼M(jìn)行快速篩選的首選方法；免疫組織化學(xué)檢查適用于福爾馬林固定的牛腦組織，是牛海綿狀腦病監(jiān)測和確診的黃金標(biāo)準(zhǔn)，在全世界廣泛使用；蛋白免疫印跡試驗適用于未固定的新鮮牛腦組織，敏感性與免疫組織化學(xué)相當(dāng)，是確診本病的黃金標(biāo)準(zhǔn)，在全世界廣泛使用；全自動快速蛋白免疫印跡和ELISA篩選試驗適用于大量腦組織樣品的快速篩選，有商品化試劑供應(yīng)；SAF電鏡檢查成功地用于福爾馬林固定的腦組織，死后出現(xiàn)組織自溶無法進(jìn)行組織病理學(xué)檢測時特別有用，動物接種試驗可用于檢測BSE的感染性，但不能用于常規(guī)診斷。牛海綿狀腦病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)都包括組織病理學(xué)檢查和免疫組織化學(xué)檢查2個方法，缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的蛋白免疫印跡試驗和快速篩選方法，建議加強(qiáng)這些標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作。

2.5 牛結(jié)核?。˙ovine tuberculosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛結(jié)核病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括顯微檢查、病原培養(yǎng)、核酸鑒別、皮內(nèi)結(jié)核菌素測試、gamma干擾素試驗、淋巴細(xì)胞增殖試驗和ELISA試驗，共計7個標(biāo)準(zhǔn)方法。其中顯微鏡檢查可以對疾病做出假定診斷，病原培養(yǎng)適用于結(jié)核菌素或gamma干擾素檢測陽性動物在尸體剖檢時沒有發(fā)現(xiàn)可見的病理變化，建議采集頭部和胸部的混合淋巴結(jié)樣品進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)特征性生長模式和菌落形態(tài)進(jìn)行假定診斷；核酸鑒別對分離菌株進(jìn)行快速鑒別和基因分型，具有重要的流行病學(xué)價值，有商品化試劑盒供應(yīng)，但實(shí)驗室間比對還不充分；動物接種是確診結(jié)核病的重要依據(jù)；結(jié)核菌素試驗是檢測牛結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)方法，可用于區(qū)分牛分支結(jié)核桿菌感染動物和其他分枝桿菌感染動物，但敏感性達(dá)不到100%，單靠結(jié)核菌素實(shí)驗不可能從畜群中根除結(jié)核病，在大多數(shù)非?？坪头锹箍苿游锏膽?yīng)用還沒有很好地確認(rèn)，是國際貿(mào)易指定使用的方法；gamma干擾素試驗具有檢測早期感染的能力，動物只需要保定一次，已經(jīng)批準(zhǔn)用于很多國家的結(jié)核病根除計劃，在一些國家用作連續(xù)試驗來增強(qiáng)特異性，用作平行試驗來增強(qiáng)敏感性，有商品化試劑盒供應(yīng)，但經(jīng)過評價的應(yīng)用動物種屬有限，是國際貿(mào)易指定使用的替代試驗；淋巴細(xì)胞增殖試驗比較耗時，實(shí)驗室操作比較復(fù)雜，用于野生動物和動物園動物是有用的，用于鹿結(jié)核桿菌病的檢測敏感性和特異性都很高，具有科學(xué)價值，但是不能用作常規(guī)診斷，試驗成本相對較高，還未進(jìn)行實(shí)驗室間比對。ELISA試驗可用于檢測野生動物，在缺乏gamma干擾素試驗和皮膚試驗不可靠的地區(qū)，ELISA用于動物結(jié)核病的檢測非常有用，但用于牛時敏感性相對較低，USA目前已經(jīng)準(zhǔn)許該實(shí)驗用于大象和非人類靈長類動物，英國批準(zhǔn)用于獾；是最適當(dāng)?shù)目贵w檢測方法，是細(xì)胞免疫反應(yīng)試驗的補(bǔ)充而不是替代，簡單，但敏感性受限制。有關(guān)牛結(jié)核病的國家標(biāo)準(zhǔn)包括染色鏡檢、病原培養(yǎng)、動物實(shí)驗及皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，其中動物接種試驗是對OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的gamma干擾素試驗、淋巴細(xì)胞增殖試驗和ELISA，相關(guān)檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)仍屬空白，建議加強(qiáng)這方面標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作。

2.6 牛病毒性腹瀉黏膜病（Bovine viral diarrhoea）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛病毒性腹瀉黏膜病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、ELISA檢測抗原、免疫組織化學(xué)、核酸檢測、病毒中和試驗及ELISA，共計6個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病毒分離是國際貿(mào)易指定使用的試驗，微量板免疫過氧化物酶方法用于血清樣品中病毒檢測的大量篩選，試管培養(yǎng)法用于組織或白細(xì)胞上清液或者精液樣品；ELISA抗原檢測適合于檢測持續(xù)感染動物，不適合于急性感染的病毒檢測，在持續(xù)感染合并血清陽性反應(yīng)的病例稀少地區(qū)是首選方法，最好的方法敏感性等同于病毒分離，有商品化試劑盒供應(yīng)，是國際貿(mào)易指定使用的方法。免疫組織化學(xué)檢測組織切片上的病毒抗原，皮膚活檢特別是耳切樣品對于持續(xù)性感染的體內(nèi)診斷很有價值。RT-PCR適用于診斷目的的病毒檢測和懷疑有低水平病毒污染時的批量篩選，多重PCR用于從病毒培養(yǎng)物或者從血液中擴(kuò)增病毒并進(jìn)行病毒分型，原位雜交適用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織，可以進(jìn)行回顧性分析，也可用于系統(tǒng)進(jìn)化分析，核酸檢測容易污染，一定要設(shè)嚴(yán)格的對照。病毒中和試驗檢測血清抗體，沒有一個毒株可以滿足所有情況，應(yīng)該選擇能夠在本地牛中可以最高比例檢測到血清反應(yīng)的毒株。有間接和阻斷ELISA兩種，牛奶樣品中ELISA抗體檢測結(jié)果是畜群BVD地位的有用指示，有商品化試劑盒供應(yīng)。有關(guān)牛病毒性腹瀉黏膜病的國家標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、鑒定與微量血清中和試驗，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗、病毒分離、微量血清中和試驗以及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，缺少OIE標(biāo)準(zhǔn)中的免疫組織化學(xué)技術(shù)和ELISA抗體檢測，與國際標(biāo)準(zhǔn)比較接近。

2.7 牛傳染性胸膜肺炎（Contagious bovine pleuropneumonia）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛傳染性胸膜肺炎診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病原鑒定9個（病原培養(yǎng)、生化試驗、核酸檢測、間接熒光抗體試驗、熒光抗體試驗、圓斑生長抑制試驗、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗、斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗和免疫組織化學(xué)試驗）和血清學(xué)實(shí)驗5個（補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗、競爭ELISA、免疫印跡試驗、玻片凝集、乳膠凝集），共計14個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病原培養(yǎng)適于從活動物或者尸體剖檢采樣進(jìn)行檢測，困難、耗時；生化試驗用于免疫學(xué)實(shí)驗和PCR結(jié)果不確定的情況下，應(yīng)該由參考實(shí)驗室實(shí)施；核酸檢測是鑒別病原的主要工具，可用于保存較差的樣品，敏感、快速，操作簡單，容易污染，操作要小心。間接熒光抗體試驗用于胸膜涂片效果良好，肺涂片效果不滿意，存在非特異性熒光染色；熒光抗體試驗用于肉湯和瓊脂培養(yǎng)物，特異性不如間接熒光抗體染色；圓斑生長抑制試驗操作簡單，但一些結(jié)果的解釋需要經(jīng)驗；瓊擴(kuò)試驗用于胸膜液、肺碎片或壞死骨片中的抗原，敏感性不夠，特異性未知，用作篩選試驗；斑點(diǎn)免疫試驗適用于實(shí)驗室的日常鑒別，免疫組化只是對其他診斷的補(bǔ)充，陰性結(jié)果不具有確定性。補(bǔ)體結(jié)合試驗被疫區(qū)國家廣泛用于本病的篩選和根除計劃，操作困難，需要經(jīng)過良好訓(xùn)練和有經(jīng)驗的工作人員，更適合檢測急性發(fā)病動物，是國際貿(mào)易指定使用的方法，也適用于無疫病區(qū)的認(rèn)定。競爭ELISA經(jīng)過了熱帶國家的評估可用于本病的篩選和根除計劃，敏感性與補(bǔ)體結(jié)合試驗相當(dāng)，特異性更強(qiáng)，是國際貿(mào)易指定使用的方法，有商品化試劑供應(yīng)，重復(fù)性好，任何國家都適用。免疫印跡試驗具有診斷價值，田間評估顯示比補(bǔ)體結(jié)合試驗敏感性更高、特異性更強(qiáng)，主要用作確診試驗。玻片凝集試驗只在畜群基礎(chǔ)上使用有效，敏感性不夠，只能檢出急性發(fā)病動物，乳膠凝集比玻片凝集更加容易解釋。牛傳染性胸膜肺炎診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)包括病原鑒定、補(bǔ)體結(jié)合試驗和微量凝集試驗，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病原分離鑒定和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗，其中病原鑒定和補(bǔ)體結(jié)合是對國際標(biāo)準(zhǔn)的對應(yīng)，微量凝集試驗是對國際標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺失了OIE中的其余12個方法，與國際標(biāo)準(zhǔn)差距很大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.8 牛地方流行性白血?。‥nzootic bovine leukosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛地方流行性白血病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、PCR、ELISA和瓊脂免疫擴(kuò)散試驗，共計4個方法。其中PCR適于檢測個體動物的白血病病毒，不適合于群體檢測，敏感性高，容易引起假陽性，可用作血清學(xué)試驗的輔助手段進(jìn)行確診。間接ELISA適合于檢測混合牛奶樣品中的抗體，阻斷ELISA適合于檢測單個或混合血清樣品中的抗體，都有商品化試劑盒供應(yīng)，是國際貿(mào)易指定使用的方法。瓊擴(kuò)試驗檢測個體動物血清樣品中的抗體，敏感性不高，簡單、容易操作，用于疾病的根除計劃非常有效，有商品化試劑盒供應(yīng)。目前還沒有關(guān)于牛白血病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括PCR和瓊脂免疫擴(kuò)散試驗2個，分別對應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的PCR和瓊擴(kuò)試驗，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病毒分離和ELISA，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.9 牛傳染性鼻氣管炎（Infectious bovine rhinotracheitis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛傳染性鼻氣管炎診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、抗原檢測、核酸檢測、熒光PCR、病毒中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗，共計6個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中從牛精液中分離病毒是國際貿(mào)易指定使用的方法，抗原檢測在組織涂片上進(jìn)行直接或間接熒光抗體試驗，冷凍切片還可以確定抗原位置，不需要細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，實(shí)驗室診斷在1天內(nèi)可以完成，缺點(diǎn)是敏感性較低，如果需要進(jìn)行深入研究還需要再進(jìn)行病毒分離。核酸檢測主要用于人工或自然感染牛精液及其他臨床樣品中病毒 DNA檢測，敏感、快速，但易污染，需要采取防范措施預(yù)防假陽性；熒光PCR從牛精液樣品中檢測病毒DNA已經(jīng)經(jīng)過了確認(rèn)，特異性更強(qiáng)，敏感性達(dá)到套式PCR的水平，污染的風(fēng)險更低，可以進(jìn)行定量，是國際貿(mào)易指定使用的試驗。病毒中和試驗是檢測血清抗體最敏感的方法，是國際貿(mào)易指定使用的試驗，ELISA檢測血清和牛奶樣品中的病毒抗體，有逐漸取代病毒中和試驗檢測抗體的趨勢，是國際貿(mào)易指定使用的方法，有很多商品化試劑供應(yīng)。目前還沒有關(guān)于牛傳染性鼻氣管炎的國家標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、微量血清中和試驗和ELISA 3個，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、核酸檢測、ELISA和病毒中和試驗4個，分別對應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病毒分離、核酸檢測、病毒中和以及ELISA，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的抗原檢測和熒光PCR，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.10 牛錐蟲?。═rypanosomosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評估

牛錐蟲病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括鮮血涂片、厚血涂片、薄血涂片、血細(xì)胞比容離心、暗視野/相差血沉試驗、陰離子交換、體外培養(yǎng)、動物接種試驗、抗原檢測、DNA檢測、熒光抗體試驗以及ELISA，共計12個方法標(biāo)準(zhǔn)。其中鮮血涂片簡單、便宜，即刻出結(jié)果，但敏感性低；厚血涂片簡單、便宜，但耗時長；薄血涂片特異性強(qiáng)，可以進(jìn)行種屬鑒別。血細(xì)胞比容離心比直接檢測技術(shù)更加敏感，直接出結(jié)果，廣泛用于大批量篩選，種屬鑒別比較困難；暗視野/相差血沉試驗檢測能運(yùn)動的、有活力的錐蟲，直接出結(jié)果，廣泛用于篩選大批量動物，敏感性強(qiáng)，能夠更加準(zhǔn)確地進(jìn)行種屬鑒別和永久保存，但成本昂貴。陰離子交換技術(shù)敏感性很高，但比較繁瑣、昂貴、耗時，不適用于大批量檢測；體外培養(yǎng)技術(shù)非常高效和敏感，需要精密設(shè)備，耗時長，不適合于大規(guī)模使用，不能進(jìn)行種屬鑒定；動物接種試驗比直接血涂片敏感，但比較昂貴，耗時長，實(shí)用性差；抗原ELISA的田間評價是在受控條件下得出的，其敏感性和特異性都不適合于錐蟲病的診斷；PCR方法是人類和動物感染非洲錐蟲的診斷工具，敏感性強(qiáng)，容易出現(xiàn)假陽性，不能識別所有分離株，成本高限制了該方法的常規(guī)使用；熒光抗體試驗具有屬間特異性，可以檢測當(dāng)前或既往感染，對主動感染只能提供假定診斷，需要昂貴的精密儀器和專家，只能在專業(yè)實(shí)驗室使用，周期長；ELISA可以自動化和標(biāo)準(zhǔn)化，適合于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查。牛錐蟲病診斷的國家標(biāo)準(zhǔn)包括鮮血涂片、薄血涂片、毛細(xì)管集蟲、實(shí)驗動物接種、乳膠凝集試驗、間接血凝試驗和ELISA共7個，檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)只有一個補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗，其中5個方法與OIE標(biāo)準(zhǔn)相對應(yīng)，乳膠凝集試驗、間接血凝試驗及補(bǔ)體結(jié)合試驗是對OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的厚血涂片、暗視野/相差血沉試驗、陰離子交換、體外培養(yǎng)、抗原檢測和DNA檢測，建議加強(qiáng)和完善這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.11 與國際標(biāo)準(zhǔn)差距非常大的幾種牛病

OIE規(guī)定的牛傳染性疾病共有18種，除上述10種之外，還包括牛巴貝西蟲?。˙ovine Babesiosis）、牛囊蟲病（Bovine Cysticercosis）、牛嗜皮菌?。―ermatophilosis）、牛出血性敗血?。℉aemorrhagic septicaemia）、牛結(jié)節(jié)性皮疹（Lumpy skin disease）、牛惡性卡他熱（Malignant catarrhal fever）、牛泰勒焦蟲?。═heileriosis）以及牛毛滴蟲?。═richomonosis）8種，這8種傳染病的國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)都屬于空白，而相應(yīng)的OIE標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容都很豐富、方法的先進(jìn)性和科學(xué)性都很強(qiáng)，一旦需要對這些疾病進(jìn)行檢疫，我們的工作就會陷入被動，建議盡早做好技術(shù)儲備，加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作，以便能適應(yīng)國際貿(mào)易的需要。

3 比較結(jié)論與建議

通過比較與評估發(fā)現(xiàn)，我國的牛傳染性疾病檢疫技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)存在不同程度的差異。具體表現(xiàn)在:（1）有一些標(biāo)準(zhǔn)是OIE手冊中沒有提及的，如牛結(jié)核病動物接種試驗、牛傳染性胸膜肺炎微量凝集試驗以及牛錐蟲病微量凝集試驗、間接血凝試驗和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗等，這些標(biāo)準(zhǔn)都是我國相關(guān)科研單位根據(jù)國家牛傳染性疾病發(fā)生的實(shí)際情況而制定的。這樣做提升了標(biāo)準(zhǔn)的適用性，更加符合動物疫病防控的迫切需要，是對國際標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，如果技術(shù)成熟，建議申請國際標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)可。（2）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容比較全面，技術(shù)含量高，科學(xué)性強(qiáng)，具有一定的先進(jìn)性，與國際標(biāo)準(zhǔn)比較接近，可以滿足國際貿(mào)易的需要，如牛無漿體病、牛病毒性腹瀉黏膜病。（3）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容不全面，只包括了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的部分內(nèi)容，落后于國際標(biāo)準(zhǔn)，特別是OIE推薦的國際貿(mào)易規(guī)定要使用的方法在我國缺失，這類標(biāo)準(zhǔn)要加快修訂和更新，以便能適應(yīng)國際貿(mào)易的需要，如牛地方流行性白血病的ELISA試驗。（4）有一些標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)差距很大，比較成熟的國際標(biāo)準(zhǔn)在我國還是空白，這種情況是最令人擔(dān)憂的，必須加快這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作，如上述2.11所列疾病。

針對上述我國牛傳染性疾病檢疫標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)存在的差距，建議（1）從OIE參考實(shí)驗室引進(jìn)重大牛病的診斷試劑和方法，選取國內(nèi)資質(zhì)條件好的實(shí)驗室對目前我國已經(jīng)制定的牛病檢疫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗證和復(fù)核。驗證合格者，推薦使用，并推薦申請OIE的國際認(rèn)可；驗證有小幅差距者，暫停使用，待完善達(dá)標(biāo)后再推薦使用；不合格者，停止使用，撤消標(biāo)準(zhǔn)。這樣做有利于提高我國口岸動物檢疫實(shí)驗室的水平，有利于我國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)同等地位的確立，可以推動我國動物及動物產(chǎn)品的出口貿(mào)易，同時更好地防范外來動物疫病入侵，更好地把好國門。（2）遵照OIE標(biāo)準(zhǔn)的要求，制定一個系統(tǒng)、完整的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定體系或框架，在該體系或框架的指導(dǎo)下，對現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行清理整合、特別是對于那些內(nèi)容交叉重復(fù)甚或矛盾的部分進(jìn)行徹底清理，內(nèi)容陳舊的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行更新修訂，過期或不適用的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行作廢處理，缺失的標(biāo)準(zhǔn)加緊制修訂，使我國的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作逐步進(jìn)入一個有序狀態(tài)，按計劃進(jìn)行。