高效液相色譜法測定霉酚酸含量及有關物質

劉勝興 林芹

（1.廣西南寧百會藥業(yè)集團有限公司 廣西 南寧 530003; 2.廣西中醫(yī)學院制藥廠 廣西 南寧 530023）

高效液相色譜法(High performance liquid chromatography，HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”等，是一種高壓、高效、高靈敏度、應用范圍廣、分析速度快的分離分析技術。在中國藥典中主要用于藥物的含量測定、有關物質檢查和鑒別等。天然藥物的來源有動物、植物和礦物之分。由于化學成分復雜，有效成分可能有一個，也可以有多個，因此精確測定各有效成分的含量對藥品質量控制，建立質量標準具有重要的意義。高效液相色譜法可對天然藥物的成分進行分離鑒定，并測定有效成分的含量。

霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)是一種高效、選擇性、非競爭性、可逆性的次黃嘌呤單核苷酸脫氫酶抑制劑，可抑制鳥嘌呤核苷酸的合成途徑。MPA有關物質的檢測方法作者未見國內報道。本文采用高效液相色譜法對MPA的含量及有關物質進行研究試驗，建立了霉酚酸的HPLC測定方法，可同時測定含量、分離有關物質，為原料質量控制建立標準。

1 儀器與實驗藥品

Waters600-717-2487型高效液相色譜儀。霉酚酸標準品(純度98%，Sigma公司)，霉酚酸原料由本廠提供；乙腈，甲醇為色譜純；三乙胺，磷酸為分析純。

2 色譜條件

采用phenomenexC8色譜柱（250mm×4.6μm×5μm），流動相：三乙胺磷酸緩沖液（取超純水980mL，加入三乙胺20mL，用磷酸調節(jié)pH至5.6，攪拌至完全溶解）乙腈（60∶40）,檢測波長250nm,流速：1.0mL/min。

3 方法與結果

用本色譜系統(tǒng)檢測霉酚酸有關物質，色譜圖如下，各雜質峰均能與霉酚酸主峰的達到良好的分離。試驗表明，本品在酸、堿、氧化、高溫及光破壞均不穩(wěn)定，降解后的雜質峰也均能與霉酚酸主峰達到良好的分離 。

（1）精密度。選取適量的霉酚酸標準品進行精密測量，用甲醇制成的供試液0.4mg/mL進行搖勻，之后按照上述色譜條件連續(xù)進樣6次，計算霉酚酸峰面積值，RSD為0.2%。結果：精密度良好。

（2）重復性實驗。選擇適量相同批號的霉酚酸樣品并且稱取相同的6份，用甲醇制成的供試液0.4mg/mL進行搖勻，按之前的步驟進行測定，6份溶液及標準溶液分別進樣10uL，結果得到含量的RSD值為0.52%。

（3）溶液穩(wěn)定性實驗。選取相同的霉酚酸供試液1份，在0,4,8,12h分別測定霉酚酸的峰面積值以考察試品的溶液穩(wěn)定性，其中RSD為0.96%。結果說明樣品供試液在12min內基本穩(wěn)定。

(4)線性實驗。稱取霉酚酸適量，用甲醇制成供試液800.48ug/mL，分別取溶液6.0、5.5、5.0、4.5、3.5、2.5mL置于15mL的容器中，并用甲醇溶液定容至刻度，得到不同濃度的溶液分別為479.32、445.56、397.56、358.24、279.54、201.45μg/mL，然后分別進樣15uL，并記錄下色譜圖，結果顯示霉酚酸濃度在201.45～479.32μg/mL范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系。

（5）回收率實驗。稱取霉酚酸適量并且以對照品溶液進樣，按峰面積計算樣品回收率，測得回收率平均值為98.69%。在統(tǒng)一的色譜條件下，測得最低檢測限為0.1ng（S/N≥3）。通過上述方法檢測不同批原料結果為02001含量為98.2%，雜質為0.41%；02001含量為98.9%，雜質為0.65%；02003含量為97.9%，雜質為0.54%。

4 討論

霉酚酸在C8柱上易產(chǎn)生前沿峰。不同品牌C8柱，保留時間、峰形有較大的差異?？疾旄鞣N配比的流動相，25cm的長柱有利于達到較好的分離效果，分離度>1.5，分離效果好。本方法，霉酚酸的出峰時間快，峰形較好，同時此方法靈敏，準確，重現(xiàn)性好，適用于霉酚酸原料含量及有關物質的測定。

高效液相色譜法是現(xiàn)代藥物分析中最高效、快捷的方法之一，具有專屬性強、靈敏度高等特點，既可用于藥物分離，也可用于定性定量分型，適用范圍廣因此在藥物成分的分離與測定方面能夠充分發(fā)揮其它分析方法無與倫比的優(yōu)勢。而且隨著計算機軟件的開發(fā)、專家系統(tǒng)的應用、檢測手段的進步、各種聯(lián)用技術的出現(xiàn)以及其他一些相關問題的解決，HPLC將稱為今后質量規(guī)范化，國際化的重要途徑之一。

[1]徐蓉，胡輝，朱健.新型免疫抑制抗生素霉酚酸酯的研究進展[N].溫州大學學報,2005.

[2]李發(fā)美，于治國，陳發(fā)奎，等.醫(yī)藥高效液相色譜技術[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1999.