夏至草的化學(xué)成分及抗炎活性研究

朱兆宇，曹璐

信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院

夏至草的化學(xué)成分及抗炎活性研究

朱兆宇，曹璐

信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院

夏至草又名白花夏枯草、小益母草，分布廣泛，資源豐富。夏至草味苦、性平，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)。本文對(duì)夏至草的化學(xué)成分進(jìn)行了分析，研究表明：夏至草化學(xué)成分復(fù)雜，具有20多種化合物，主要包括苯乙醇苷、半日花烷二萜、黃酮等。在了解夏至草化學(xué)成分的基礎(chǔ)之上，對(duì)夏至草所含的15種半日花烷二萜化合物進(jìn)行炎癥體外篩選以分析夏至草抗炎活性。通過實(shí)驗(yàn)得到夏至草中四種具有抗炎活性的化合物，以期對(duì)夏至草的臨床應(yīng)用提供一定的參考。

夏至草；半日花烷二萜；抗炎；脂多糖

夏至草又名白花夏枯草、小益母草，廣泛分布于各個(gè)地區(qū)，其味苦、性平?？梢宰鳛閶D科用藥治療痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等，同時(shí)可以作為消炎用藥治療慢性腎炎等疾病。李俊杰等人通過急性微循環(huán)障礙大鼠模型，發(fā)現(xiàn)夏至草醇提物能夠有效抑制大鼠各臟器組織NO的生成以及一氧化氮合酶（NOS）的活性表達(dá)，侯利亞等人也通過實(shí)驗(yàn)得出了類似的結(jié)論。無(wú)論從實(shí)踐角度還是理論角度都能看出夏至草具有抗炎活性。但是對(duì)于夏至草的化學(xué)成分研究不夠充分細(xì)致，僅知道包括半日花烷二萜類化合物、苯乙醇苷類、植物緇醇類等幾類，對(duì)于具體化合物種類不甚明了。因此為了闡明夏至草的抗炎活性機(jī)理，需要對(duì)夏至草的化學(xué)成分進(jìn)行細(xì)致研究與分析。本文通過組織實(shí)驗(yàn)對(duì)夏至草中的半日花烷二萜類化合物進(jìn)行了分離與分析，得到了半日花烷二萜類化合物的具體成分，以此為基礎(chǔ)進(jìn)一步分析了具有抗炎活性的半日花烷二萜類化合物種類，闡明了夏至草抗炎活性機(jī)理。

一、材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑與溶液

細(xì)菌脂多糖（LPS,Escherichia coli,serotype 055∶B5）；丙酮；石油醚；二氯甲烷；茴香醛試液；牛血清蛋白；DMEM培養(yǎng)基。

1.2 儀器

Acculab電子天平；酶標(biāo)儀(TECAN,Mannedorf,Switzerland)；Waters2695高效液相色譜儀；MPA100顯微熔點(diǎn)儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 夏至草化學(xué)成分的提取

將夏至草（3g）洗干凈，待干燥后粉碎，然后用丙酮溶液（20L）浸泡48小時(shí)，得到90g丙酮提取物，用濃度為90%的甲醇溶解丙酮提取物，然后先后用正己烷、二氯甲烷萃取，最終得到二氯甲烷提取物27g，提取物經(jīng)減壓桂膠柱色譜（200-300目）,用正已烷-乙酸乙醋系統(tǒng)(4∶1一0∶1)進(jìn)行梯度洗脫,得到10個(gè)流份(A-J)。對(duì)各流份分別經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以不同比例的二氯甲院-甲醇作為洗脫劑洗脫，得到的流份經(jīng)半制備液相,以乙腈-水（53：47）為流動(dòng)相，得到各種化合物。

2.2 建立炎癥模型

為了分析夏至草的抗炎活性，需要建立炎癥模型來(lái)檢驗(yàn)夏至草的抗炎活性。本文通過脂多糖（LPS）誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)構(gòu)建炎癥模型。BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)使用DMEM培養(yǎng)基，加入鏈霉素（100μg/ml）、牛血清蛋白、青霉素（100μg/ml），培養(yǎng)箱環(huán)境為溫度37度、二氧化碳5%、空氣95%，培養(yǎng)時(shí)間為24h。將脂多糖以1mg/ml的濃度溶解于蒸餾水中，儲(chǔ)存在-20°C的環(huán)境中以作備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將脂多糖溶液稀釋到0.1μg/ml誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞，從而建立炎癥模型。

2.3 一氧化氮分析

本文通過Griess試劑來(lái)測(cè)量細(xì)胞上清液中亞硝酸鹽的含量，因?yàn)閬喯跛猁}是一氧化氮穩(wěn)定的氧化終產(chǎn)物，因此可以通過亞硝酸鹽的含量來(lái)評(píng)估一氧化氮的含量。陽(yáng)性對(duì)照組為槲皮素(IC50為10.02/μM)。將上述夏至草所提取出的化合物通過DMSO制作成儲(chǔ)備溶液，實(shí)驗(yàn)時(shí)取DMSO儲(chǔ)備溶液處理經(jīng)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞，處理完畢后取制其中的細(xì)胞上清液100μl與等量的Griess re?agent（1%對(duì)氨基苯磺酰胺）混合。并置于96孔板中。在微孔板讀數(shù)器上檢測(cè)550ran下的吸收值,使用亞硝酸納制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、結(jié)果

通過對(duì)夏至草的理化分析，對(duì)二氯甲烷萃取的丙酮溶液進(jìn)行現(xiàn)代色譜分離，鑒定出15種半日花烷型二萜化合物，結(jié)果如表1所示：

表1 夏至草化合物成分

將分離出來(lái)的夏至草化合物用培養(yǎng)的炎癥模型進(jìn)行篩選，通過檢測(cè)化合物對(duì)一氧化氮的抑制情況來(lái)判斷化合物的抗炎癥特性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：夏至草素E C23H36O7、leoleorin A（C22H34O5）、leo?leorin B（C20H26O2）、夏至草素G（C22H32O6）都能在一定程度上抑制小膠質(zhì)細(xì)胞生成一氧化氮。這也充分證明了夏至草具有抗炎癥活性。

三、討論

夏至草廣泛分布于各個(gè)地區(qū)，資源豐富，具有改善淋巴循環(huán)與血液循環(huán)、心肌保護(hù)、抗氧化、抗炎等藥理活性，因此在中醫(yī)藥學(xué)臨床應(yīng)用十分廣泛。但是對(duì)于夏至草的化學(xué)成分，以及起到相應(yīng)藥理活性的化合物并不是十分明了。本文就夏至草的化合成分，分離的得到15種半日花烷型二萜化合物，半日花烷型二萜化合物本身具有松弛血管、解痙鎮(zhèn)痛的生物活性，這與上述夏至草的藥理活性相一致。為了研究夏至草的抗炎活性，對(duì)15種半日花烷型二萜化合物進(jìn)行體外篩選，得到了具有抗炎作用的化合物，這對(duì)闡明夏至草藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)具有重要的意義。綜上所述：夏至草資源十分豐富，具有多種藥理活性，廣泛應(yīng)用于藥學(xué)臨床，因此對(duì)于夏至草的化學(xué)成分以及藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)的研究十分必要，這也為夏至草就進(jìn)一步的應(yīng)用與推廣提供了可靠的科學(xué)依據(jù)。

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朱兆宇（1989-），女，漢族，河南信陽(yáng)人，單位：信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。