康兒靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

和 芳， 唐全紅， 胡玉霞， 高柏麗

(北京創(chuàng)立科創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司，北京100029)

康兒靈顆粒是由刺五加、白術(shù)(炒)、蓮子、六神曲(炒)、茯苓、麥芽(炒)、陳皮、枳殼(炒)、山楂(炒焦)、甘草(炙)、胡黃連、使君子十二味中藥制成的中藥復(fù)方顆粒，它的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第13冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-B-2613-97。功能主治為益氣健脾，開胃消食，用于脾胃虛弱，食欲不振，消化不良，形體瘦弱［1］。此標(biāo)準(zhǔn)為衛(wèi)生部藥典委員會(huì)于1997年8月編輯出版，由于此標(biāo)準(zhǔn)的起草年代較早，技術(shù)水平和條件有限，所以該標(biāo)準(zhǔn)非常簡(jiǎn)單，控制項(xiàng)目很少，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)陳皮、枳殼中所含有的橙皮苷進(jìn)行了薄層色譜鑒別，對(duì)其它藥味沒有任何控制。為了更有效地控制該藥品的藥品質(zhì)量，我們參考文獻(xiàn)［2-3］新建立了刺五加、白術(shù)、蓮子、胡黃連的薄層色譜鑒別方法，并參考文獻(xiàn)［2］新建立了陳皮和枳殼中的橙皮苷的高效液相含量測(cè)定方法，重新制訂了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其中的六味藥材得到了有效地控制，使藥品的質(zhì)量更好地得到了保證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A高效液相色譜儀、PDA-10 Avp檢測(cè)器(日本Shimazu公司)，SB5200超聲波清洗器(上海Branson公司);Milli Q超純水機(jī)(法國(guó)Millipore公司)。

1.2 藥品與試劑 硅膠G薄層板;硅膠GF254薄層板(青島海洋化工廠分廠);橙皮苷、肉桂酸、異嗪皮啶、刺五加對(duì)照藥材、白術(shù)對(duì)照藥材、蓮子對(duì)照藥材(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所);康兒靈顆粒及陰性樣品(自制);甲醇(色譜純);水為超純水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 刺五加的鑒別 取康兒靈顆粒10 g，研細(xì)，加水25 mL振搖使溶解，過濾，過濾液加氯仿萃取3次，每次20 mL，合并氯仿萃取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取不含刺五加藥材的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液;另取刺五加對(duì)照藥材0.5 g，加氯仿25 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。再取異嗪皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照中國(guó)藥典薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－石油醚(60～90℃)－甲醇(9.5∶0.2∶0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。在供試品色譜中，與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.1.2 白術(shù)的鑒別 取康兒靈顆粒15 g，加正己烷40 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液揮至0.5 mL，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照中國(guó)藥典薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述新制備的供試品溶液15 μL，對(duì)照藥材溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)清晰。在供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

2.1.3 蓮子的鑒別 取康兒靈顆粒15 g，加氯仿50 mL，超聲處理30 min，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取蓮子對(duì)照藥材5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照中國(guó)藥典薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－丙酮(7∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。在供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

圖1 刺五加的薄層鑒別圖

圖2 白術(shù)的薄層鑒別圖

2.1.4 胡黃連的鑒別 取康兒靈顆粒10 g，加乙醇40 mL加熱回流2 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?%氫氧化鈉溶液20 mL溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，棄乙醚液，堿液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，再用乙醚提取3次，每次15 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取肉桂酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照中國(guó)藥典薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液2 μL，對(duì)照品溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷－乙醚－冰醋酸(5∶5∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖4。

圖3 蓮子的薄層鑒別圖

圖4 胡黃連的薄層鑒別圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件:色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 － 水 － 冰醋酸(35 ∶61 ∶4)，流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):283nm;柱溫:常溫;理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2.2 供試品溶液的制備:取康兒靈顆粒，研細(xì)，取2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率20 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.2.3 專屬性考察按處方中藥味比例，自配不含陳皮和枳殼的群藥，按其工藝制成陰性制劑，再按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，結(jié)果陳皮和枳殼陰性溶液在與橙皮苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，表明陰性樣品沒有干擾。測(cè)定結(jié)果見圖5。

圖5 康兒靈顆粒HPLC色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密量取橙皮苷對(duì)照品溶液(0.069 2 mg/mL)1、2、4、6、8、10 mL 分別置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μL，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，橙皮苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算得回歸方程為:Y=2 127 492X+1 817.7，r=0.999 9 結(jié)果表明橙皮苷在0.069 2 ～0.692 0 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.2.5 精密度 精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，求得峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.08%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一供試品溶液(批號(hào):20020301)10 μL，分別于配制后在 0、1、2、4、8、12、24 h，依法測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.68%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取康兒靈顆粒(批號(hào)為20020301)樣品6份，按樣品測(cè)定法測(cè)定，求得橙皮苷含量的 RSD為1.72%，說明本方法重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，稱取已知含量的同一批的樣品1 g，精密稱定，分別精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液(0.099 6 mg/mL)各5 mL，按供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 樣品含量測(cè)定 取各批樣品分別按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 康兒靈顆粒處方中含有十二味藥，原標(biāo)準(zhǔn)中已采用TLC法對(duì)陳皮和枳殼進(jìn)行鑒別，現(xiàn)又增加了刺五加、白術(shù)、蓮子、胡黃連四味藥的TLC法定性鑒別;并且采用HPLC法對(duì)橙皮苷進(jìn)行了含量測(cè)定。方法可靠，準(zhǔn)確性好。可很好的控制藥品質(zhì)量。

3.2 曾摸索了方中麥芽的薄層色譜鑒別。康兒靈顆粒、麥芽對(duì)照藥材取樣量分別增大到20 g、10 g，按相應(yīng)方法提取，點(diǎn)樣，展開，檢視。在供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。但考慮取樣量太大，故未收入康兒靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:取橙皮苷對(duì)照品溶液，照色譜條件依法進(jìn)樣，對(duì)色譜峰在200～400 nm范圍內(nèi)測(cè)定光譜圖，結(jié)果橙皮苷在283 nm處有最大吸收，故選擇283 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.4 提取條件的選擇 分別采用超聲波提取(功率250 W，頻率20 kHz)、熱回流提取、冷浸提取，測(cè)定上述康兒靈顆粒中橙皮苷的含量，結(jié)果表明3種提取方法含量基本相近，基于超聲波提取法方便快捷，故正文選擇超聲波提取法。

3.5 提取溶劑的選擇 橙皮苷在甲醇中溶解度較好，分別以甲醇、80%甲醇、50%甲醇為溶劑，按供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，依法測(cè)定橙皮苷的含量，結(jié)果表明80%甲醇作為提取溶劑較好。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第13冊(cè)WS3-B-2613-97［S］.1997.

［2］中國(guó)藥典［S］.一部.2005.

［3］衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編著.中華人民共和國(guó)藥典中藥薄層色譜彩色圖集［M］.廣東:廣東科技出版社，1993.