柚皮苷親水凝膠骨架片制備及體外釋放的研究

張 涵， 索緒斌， 宋雅芳， 唐立海

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所，廣東廣州510405;2.廣東藥學(xué)院中藥開發(fā)研究所，廣東廣州510006)

柚皮苷是柚中主要的黃烷酮，其全稱為柚皮素－7－O－新橙皮糖苷(其結(jié)構(gòu)式見圖1)，是一種雙氫黃酮類化合物［1，2］，主要存在于蕓香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中，也是骨碎補、枳實、枳殼、化橘紅等中藥的主要有效成分之一［3］。研究表明，柚皮苷具有降低血漿中總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(動脈粥樣硬化的主要致病因素)水平的作用［4］。除此而外，還具有鎮(zhèn)靜、抗氧化、抗腫瘤、抗真菌、抗動脈粥樣硬化、解痙、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)血糖等藥理作用［5］。柚皮苷為水溶性藥物，制成常規(guī)制劑，半衰期短，血藥濃度波動大，生物利用度相對較低［6］，將柚皮苷制成凝膠骨架片可以延長藥物釋放時間，降低毒副作用，提高患者的順應(yīng)性。本實驗欲將柚皮苷制成能持續(xù)12 h釋放藥物的凝膠骨架片，對其制備方法及其體外釋放度進(jìn)行了研究，為該藥物緩釋制劑的研究提供參考。

圖1 柚皮苷的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure of naringin

1 儀器與材料

BS124S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);ZRS－8G智能溶出試驗儀(天津大學(xué)無線電廠);國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩(浙江上虞市道墟五四儀器沙篩廠);ZP17E型旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)(上海天和制藥機(jī)械有限公司)。

柚皮苷(陜西浩洋生物科技有限公司);色譜純甲醇(江蘇漢邦科技有限公司);羥丙甲基纖維素(HPMC)K4M、K15M、K100M(上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司);甘露醇(天津市福晨化學(xué)試劑廠);蔗糖(天津市福晨化學(xué)試劑廠);聚乙二醇(PEG)10000(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);PEG 400(汕頭市光華化學(xué)廠);PEG 4000(廣東光華化學(xué)廠)，其余試劑為市售分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱:Chromasil ODS柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇－冰醋酸－水(35 ∶4 ∶61)，流速為1 mL/min;檢測波長283 nm;柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取柚皮苷對照品約10 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為貯備液。取貯備液配制成不同濃度的對照品溶液，進(jìn)樣檢測，記錄峰面積，以峰面積(Y)對藥物濃度(X，μg/mL)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y =18 234.7X－1 051.6，R=0.999 6。在 4.7 ～940 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 凝膠骨架片的制備

稱取柚皮苷適量，加入輔料(乳糖、甘露醇、蔗糖及 PEG 等 )，加入 HPMC(K4M、K15M 或K100M)，混勻。加50%乙醇適量，制軟材，擠過12目篩制顆粒，40℃干燥，過篩，加入1%潤滑劑(硬脂酸鎂)，混勻，壓片，片重約0.5 g。采取單因素考察輔料及HPMC類型及含量(4%、7%或10%)對柚皮苷親水凝膠骨架片緩釋性能的影響。

2.4 體外釋放度的測定

采用《中華人民共和國藥典》2005年版第二部附錄XC第三法即小杯槳法。取本品，以水250 mL為釋放介質(zhì)，溫度37℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，分別于第 0、1、2、4、6、8、10、12、15、18、24 h 時，取樣5 mL，濾過，同時補充5 mL介質(zhì)，取20 μL續(xù)濾液按上述HPLC條件進(jìn)樣檢測。

2.5 體外釋放模型

將柚皮苷親水凝膠骨架片(由PEG4000、乳糖及7%HPMC K15M組成)的藥物體外溶出曲線分別進(jìn)行零級模型、一級模型、Higuchi模型和 Ritger－Pappas模型擬合。根據(jù)擬合曲線的相關(guān)性，以R值最大為優(yōu)。判斷出柚皮苷親水凝膠骨架片的最佳體外釋放模型。根據(jù)Ritger－Pappas模型擬合的n值大小判斷該凝膠骨架片的藥物釋放機(jī)制。

3 結(jié)果與討論

3.1 PEG對凝膠骨架片緩釋性能的影響

輔料PEG類型對藥物釋放的影響見圖2，從圖中可看出，藥物溶出速度:PEG 4000＞PEG 400＞PEG 10000。含PEG 400骨架片在前2 h的藥物釋放比較緩慢，2 h后的藥物釋放比較均勻且釋放速度加快，17 h后藥物基本釋放完全;含PEG 4000骨架片的藥物在體外釋放較為均勻，15 h后藥物基本釋放完全;含PEG 10000骨架片的藥物在體外并非均勻釋放，5～10 h時的藥物釋放速度較快，21 h后藥物基本釋放完全。緩釋凝膠骨架片中加入PEG主要是為了增加骨架片中釋藥孔道，調(diào)整藥物的釋放速度，根據(jù)前面試驗結(jié)果，我們選擇PEG 4000作為凝膠骨架片的釋藥速度調(diào)節(jié)劑。

圖2 PEG的類型對骨架片藥物溶出的影響Fig.2 Effect of PEG type on the release of drug from the hydrogel matrix tablets

3.2 填充劑對凝膠骨架片緩釋性能的影響

填充劑(乳糖、蔗糖及甘露醇)對骨架片中藥物的釋放見圖3，從圖中可以看出，在0～3 h之間，三者的溶出速度相似，在3～19 h之間，以甘露醇為填充劑的骨架片藥物溶出速率較快，以蔗糖與乳糖為填充劑的骨架片藥物釋放速度相近;分析其原因可能是甘露醇的溶解及結(jié)晶性都強(qiáng)于后兩者，骨架片中甘露醇的快速溶解導(dǎo)致了藥物的快速釋放;但是從片劑的成型而言，乳糖的片劑成型性要優(yōu)于甘露醇和蔗糖，因此我們選擇乳糖作為骨架片的填充劑。

圖3 填充劑(乳糖、蔗糖及甘露醇)對骨架片藥物溶出的影響Fig.3 Effect of diluent agents(lactose，sucrose and mannital)on the release of drug from the hydrogel matrix tablets

3.3 HPMC類型對凝膠骨架片緩釋性能的影響

HPMC類型對藥物釋放的影響見圖4，從圖中可以看出，不同類型HPMC對凝膠骨架片的藥物溶出速度不一樣，其藥物溶出速率順序為:HPMC K4M＞HPMC K15M＞HPMC K100M。以HPMC K4M制成的骨架片，9 h內(nèi)藥物基本釋放完全;以HPMC K15M和HPMC K100M制成的骨架片，其釋藥時間分別為11 h和19 h。其原因在于 HPMC K4M、HPMC K15M及HPMC K100M具有不同的分子量和分子長度，表現(xiàn)于外是他們具有不同的黏度，分子量越大，黏度越大，藥物釋放時間越長，因此可以根據(jù)實際需要選擇HPMC，以制備釋放速度合適的緩釋凝膠骨架片。根據(jù)上述結(jié)果及實際需要，我們選擇HPMC K15M作為片劑的凝膠骨架。

圖4 HPMC類型(K100M、K15M及K4M)對骨架片藥物溶出的影響Fig.4 Effect of HPMC(K100M、K15M and K4M)type on the release of drug from the hydrogel matrix tablets

3.4 HPMC K15M含量對凝膠骨架片緩釋性能的影響

HPMC K15M含量對骨架片藥物溶出的影響見圖5，從圖中可看出骨架片中HPMC含量，影響骨架片藥物的溶出，其藥物溶出速率大小為:4% ＞7%＞10%，隨著HPMC含量的加大，藥物的溶出速率隨之減慢。HPMC K15M含量為4%的骨架片釋藥時間為7 h;骨架片中HPMC K15M含量增加到7%，其釋藥時間延長至13 h，增加到10%時，其釋藥時間則延長至17 h。從這里可以看出，可以通過調(diào)整骨架片中HPMC含量，來調(diào)整藥物的釋放速度。

圖5 HPMC K15M含量對骨架片藥物溶出的影響Fig.5 Effect of the content of HPMC K15 on the release of drug from the hydrogel matrix tablets

3.5 體外釋放曲線擬合結(jié)果

將凝膠骨架片0.5～11 h的體外釋放結(jié)果進(jìn)行模型擬合，擬合結(jié)果見表1。由表中模型擬合結(jié)果可知，零級模型、Higuchi模型和 Ritger－Pappas模型的釋放度與時間均有較好的相關(guān)性，以R值最大為優(yōu)。由表1結(jié)果可知該凝膠骨架片中藥物以零級釋放。Ritger－Pappas模型釋放參數(shù) n=0.964 37＞0.89，說明柚皮苷親水凝膠骨架片中柚皮苷的釋放以溶蝕為主。

表1 凝膠骨架片釋放模型擬合結(jié)果Tab.1 Results of model fitting of the drug release from the hydrogel matrix tablets

4 結(jié)論

采取體外釋放，單因素考察了輔料(乳糖、蔗糖、甘露醇和 PEG)，HPMC類型(K4M、K15M 和K100M)及其含量(4%、7%和10%)對柚皮苷親水凝膠骨架片緩釋性能的影響。制備的骨架片能持續(xù)緩慢釋放藥物。本實驗對柚皮苷親水凝膠骨架片的體外釋放進(jìn)行模型擬合，其藥物釋放為零級，擬合方程為 Mt/M∞=0.084 7t－0.003 6，R=0.998 299。Ritger－Pappas模型擬合中，其釋放參數(shù)n=0.964 37＞0.89，結(jié)果表明柚皮苷親水凝膠骨架片中柚皮苷的釋放機(jī)制以溶蝕為主。

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