VEGF在下腔靜脈隔膜型布-加綜合征患者中異常表達(dá)的意義分析

韓新強(qiáng) 祖茂衡

布-加綜合征（Budd-Ch iari synd rom e,簡稱BCS）是由肝靜脈阻塞和（或）其開口以上的下腔靜脈阻塞性病變引起的，以伴有下腔靜脈高壓為特點(diǎn)的一種肝后性門脈高壓癥[1]，發(fā)病多為青壯年，綜合國內(nèi)近20年來發(fā)表的文獻(xiàn)報道，我國BCS病例已經(jīng)超過萬例，居世界首位。

本研究通過收集我院介入科2010年1月～2010年10月間收治的經(jīng)超聲和/或M RV檢查并經(jīng)DSA血管造影證實為下腔靜脈膜性阻塞（M em b ranous obstruction of in ferior vena cav a,M OVC）的BCS患者，通過酶聯(lián)免疫吸附法（En zym elinked immunosorbent assay，ELISA）檢測其下腔靜脈血液中VEGF含量，以探討血管內(nèi)皮損傷與下腔靜脈隔膜形成的關(guān)聯(lián)性。

材料與方法

1 研究對象

1.1 MOVC型BCS患者（實驗組） 40例，男24例，女16例，年齡25～60歲，平均40.1歲，均為徐醫(yī)附院介入科2010年1月～2010年10月住院患者。所有病例均經(jīng)超聲和/或M RV檢查并經(jīng)DSA血管造影證實存在下腔靜脈近心端膜性閉塞；

1.2 對照組 40例，男22例，女18例，年齡32～57歲，平均42.6歲，均為徐醫(yī)附院心內(nèi)科同期住院心律失?；颊撸⒕鶠闊o使用抗凝血（促凝）藥物史和吸煙史，無原發(fā)性高血壓、肺動脈高壓、冠心病、瓣膜病、心肌病、血液病、糖尿病、結(jié)締組織病及惡性腫瘤等，肝、腎功能正常病例。

實驗組和對照組在身高、體重、性別、年齡之間無顯著差異。

2 血清制備

2.1 實驗組 在下腔靜脈隔膜形成患者行介入治療時，置入導(dǎo)管后尚未注入造影劑前，通過導(dǎo)管抽取下腔靜脈內(nèi)血液約10m l置入兩個5m l分離膠-促凝管中（操作過程中注意避免溶血），靜置半小時，然后在低溫4℃下1600g×離心15m in，取上層血清置于1.5m l EP管中，-80℃冷藏，冷藏過程中避免血清反復(fù)凍融，積攢一定數(shù)量3個月內(nèi)行酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）；

2.2 對照組 選取符合入組條件的心律失常患者在行介入射頻消融手術(shù)時，同樣通過導(dǎo)管抽取下腔靜脈血液10m l分別置于兩個5m l分離膠-促凝管中，后續(xù)處理及實驗方法同實驗組。

3 實驗試劑及設(shè)備

①Human VEGF ELISA Kit（96T 美國R＆D公司，由上海希美生物有限公司代購），在其有效期內(nèi)使用

②酶標(biāo)儀 Thermo electron coporation Multiskon MK 3

③離心機(jī) Eppendorf centrifuge 5810R 低溫離心機(jī)

④低溫冰箱 SANYO -80℃ 超低溫冰箱

⑤采血管 分離膠-促凝管（5m l廣州陽普科技有限責(zé)任公司提供）

4 實驗方法

4.1 取-80℃下冷凍的血清在室溫下慢慢解凍，解凍后如發(fā)現(xiàn)血清中有大量顆粒，檢測前予以離心；

4.2 嚴(yán)格按照ELISA試劑盒的操作步驟分步操作，每個樣品做復(fù)孔檢測；

4.3 將加入終止液的酶標(biāo)板在450nm波長下檢測各孔OD值，取復(fù)孔OD值的平均值，畫出酶標(biāo)曲線，并求出相應(yīng)的VEGF濃度值。

5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本的t檢驗，以P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

上述V EGF標(biāo)準(zhǔn)濃度擬合曲線中R 2＞0.9801（R＞0.99），可知標(biāo)準(zhǔn)品VEGF濃度與OD值呈正相關(guān)且線性良好，提示試劑盒質(zhì)量良好，符合實驗要求。

如表1所示實驗組與對照組之間VEGF含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜0.001。

表1 實驗組與對照組VEGF濃度值t檢驗結(jié)果

討論

下腔靜脈隔膜形成是下腔靜脈阻塞型布-加綜合征的主要病理原因。在人體內(nèi)最粗大的靜脈血管及血液持續(xù)流動的狀態(tài)下如何能夠形成薄厚不等的隔膜，這一問題自1899年布-加綜合征被命名[2]以來一直未能明確。凝血機(jī)制不良、妊娠、口服避孕藥、感染、外傷和腫瘤等均可為BCS的激發(fā)因素，其發(fā)病率約10/10萬[3]。

目前國內(nèi)外有關(guān)下腔靜脈隔膜形成的假說主要有：先天性血管發(fā)育異常[4]、血栓機(jī)化及纖維化[5,6]、凝血機(jī)制異常[7,8]、體內(nèi)微量元素異常[9,10]等，但仍沒有任何一種假說可以完全解釋隔膜形成的原因。

血管內(nèi)皮具有重要的內(nèi)分泌功能，正常血管內(nèi)皮主要功能是抑制血管平滑肌收縮、血小板聚集、血管平滑肌細(xì)胞增生等，在血管內(nèi)皮損傷或各種不良因素刺激下，會引起血管通透性增加、內(nèi)皮結(jié)構(gòu)性損害、內(nèi)皮細(xì)胞脫落、修復(fù)等血管內(nèi)皮功能失調(diào)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial grow th fac to r,VEGF）具有促進(jìn)血管內(nèi)皮增值、分化、成熟以及誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞遷移、促進(jìn)基質(zhì)蛋白的合成、分泌等作用，在增加血管壁的通透性及維持血管的正常形態(tài)和完整性有重要意義，在組織修復(fù)中起關(guān)鍵作用[12,13]。

下腔靜脈血管內(nèi)皮損傷后V EGF釋放增加，過度升高的VEGF與其受體VEGFR-1相互作用又可引起下腔靜脈局部血管內(nèi)皮損傷，使血管形成窗口和囊狀-空泡狀細(xì)胞器，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，造成蛋白質(zhì)外漏，有的外漏蛋白質(zhì)形成纖維蛋白原，成為血管外間質(zhì)，形成一種暫時性的新基質(zhì)，允許并支持內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞內(nèi)向移動，隨維結(jié)締組織的不斷增殖，膠原堆積，逐漸增厚融合而形成隔膜。R iem en s等[14]研究表明下腔靜脈隔膜是由纖維組織小碎片構(gòu)成，并且有的小碎片中含有小的毛細(xì)血管，其表面覆蓋有內(nèi)皮細(xì)胞，王佾[4]等對70例M OVC病例活檢也發(fā)現(xiàn)隔膜與下腔靜脈管壁相延續(xù)，符合血管瓣膜樣結(jié)構(gòu)，這與VEGF在內(nèi)皮細(xì)胞方面的作用有相似之處。

我們通過對1200余例BCS患者分析總結(jié)，認(rèn)為M OVC發(fā)生的機(jī)制可能為：患者所處的地理環(huán)境導(dǎo)致的膳食中某種微量元素的異常以及飲食攝入營養(yǎng)成分的差異導(dǎo)致血液中微環(huán)境的改變[10]，加之肝靜脈開口處血流及入房處血流隨心臟收縮產(chǎn)生的切應(yīng)力對下腔靜脈的不斷沖擊，隨時間遷移就可能對下腔靜脈內(nèi)皮產(chǎn)生損傷[11]，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后釋放VEGF等相關(guān)因子，血管內(nèi)皮損傷后機(jī)體調(diào)節(jié)修復(fù)，血管內(nèi)皮修復(fù)伴發(fā)纖維結(jié)締組織增殖，膠原堆積，肉芽形成逐漸增厚融合而形成隔膜。

雖然目前還沒有單一有效地血液檢測來證實內(nèi)皮功能的異常，但通過本試驗研究我們對血管內(nèi)皮損傷、反復(fù)修復(fù)在下腔靜脈隔膜形成中的作用和地位有很大的信心，但還需要進(jìn)一步的研究去證明。

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